| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PKR[1]
Pyruvate kinase R (PKR) (activator) |
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| 体外研究 (In Vitro) |
PKR激活剂4是一种强效的丙酮酸激酶R (PKR)激活剂，PKR是红细胞特异性的丙酮酸激酶同工酶。PKR催化磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)转化为丙酮酸，并在该过程中生成ATP。PKR的激活可提高红细胞内ATP水平并降低2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)水平。体外实验表明，PKR激活剂4以浓度依赖的方式提高PKR的酶活性。目前尚无公开的EC50值，但该化合物被描述为一种“强效”激活剂。PKR激活剂4在专利WO2019035864A1中作为实施例7A公开，表明它是具有PKR激活活性的系列化合物之一。
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| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚无PKR激活剂4的具体体内数据；然而，作为一种强效PKR激活剂，它在镰状细胞病小鼠模型（例如Berkeley SCD小鼠或Townes SCD小鼠）中具有潜在的体内疗效。体内PKR激活有望减少红细胞镰状化，提高红细胞存活率，降低溶血，并减少炎症和血管阻塞标志物。根据专利描述，PKR激活剂4具有血液疾病研究的潜力，这表明可能已经开展了体内研究，但尚未公开详细信息。体内研究将包括对SCD小鼠模型进行口服给药、体外测量红细胞PKR活性，以及评估血液学参数（血红蛋白、血细胞比容、网织红细胞计数）、溶血标志物（胆红素、乳酸脱氢酶）和缺氧条件下的红细胞镰状化情况。
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| 酶活实验 |
重组人丙酮酸激酶-R (PKR) 在大肠杆菌或昆虫细胞中表达并纯化。PKR 活性测定通过乳酸脱氢酶 (LDH) 催化 NADH 氧化，并偶联磷酸烯醇式丙酮酸 (PEP) 和 ADP 转化为丙酮酸和 ATP 来进行。反应混合物包含 Tris-HCl 缓冲液 (pH 7.4)、KCl (100 mM)、MgCl2 (10 mM)、PEP (0.5-5 mM)、ADP (0.5-5 mM)、NADH (0.2-0.5 mM) 和 LDH (10 U/mL)。加入 PKR 酶 (10-50 ng) 启动反应。使用分光光度计或酶标仪在 37℃ 下监测 5-10 分钟内 340 nm 处的吸光度下降（NADH 氧化）。计算初始反应速率 (V0)。在激活剂筛选中，化合物以不同浓度（0.001-100 uM）进行测试，并计算相对于对照组（DMSO溶剂）的活性倍数增加。EC50值由剂量反应曲线确定（达到最大激活50%的浓度）。本实验测试了PKR激活剂4，以确认其PKR激活作用。该化合物在专利WO2019035864A1中被列为实施例7A。详细实验方案请参阅该专利。
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| 细胞实验 |
在细胞PKR激活研究中，使用人成红细胞系（例如BEL-A或HUDEP-2）或原代人红细胞。细胞在合适的培养基（例如含生长因子的StemSpan培养基）中培养。细胞用PKR激活剂4（0.01-100 uM）处理24-72小时。使用上述PKR活性测定方法，在细胞裂解液中测定红细胞PKR活性。使用生物发光法（例如CellTiter-Glo或ATP生物发光试剂盒）测定细胞内ATP水平。使用酶比色法（2,3-DPG测定试剂盒）测定2,3-DPG水平。计算ATP与2,3-DPG的比值。使用血氧分析仪或通过评估P50值（血红蛋白饱和度达到50%时的氧分压）来测定血红蛋白氧亲和力。在镰状细胞试验中，将镰状细胞病患者的红细胞用PKR激活剂4（0.1-10 uM）处理，并暴露于低氧条件（例如，2% O2或焦亚硫酸钠）。通过光学显微镜定量镰状红细胞的百分比。细胞活力通过MTT法或台盼蓝染色计数进行评估。此外，还评估细胞凋亡（Annexin V/PI染色）和红细胞形态。目前尚无PKR激活剂4的特定细胞学数据公开；这些是PKR激活剂的通用实验方案。
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| 动物实验 |
目前尚无已发表的PKR激活剂4的体内动物研究。根据PKR激活剂的典型方案，可在镰状细胞病小鼠模型（例如，Berkeley SCD小鼠或Townes SCD小鼠）中进行体内疗效研究。将该化合物配制成合适的溶剂（例如，10% DMSO + 90%玉米油或0.5%甲基纤维素），并以1-50 mg/kg的剂量，每日一次或两次灌胃给药，持续2-8周。终点指标包括：红细胞PKR活性（体外测定）、红细胞中ATP和2,3-DPG水平、全血细胞计数（CBC）（血红蛋白、血细胞比容、红细胞计数、网织红细胞计数）、溶血标志物（血浆胆红素、乳酸脱氢酶LDH、结合珠蛋白）、红细胞存活率（生物素标记法）、脾脏和肝脏的组织病理学检查（髓外造血和铁沉积），以及在体外缺氧条件下评估红细胞镰状化。也可进行血管阻塞研究（肠系膜微循环）。PKR激活剂4具有血液疾病研究的潜力，因此相关研究可能正在进行或计划中。详细的体内实验方案请参阅专利WO2019035864A1。这些方案为通用方案，并未专门针对PKR激活剂4进行验证。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
PKR激活剂4的具体药代动力学数据尚不明确。根据其分子特性（分子量416.57，LogP值约为3-4），该化合物具有中等亲脂性，预计口服生物利用度中等至良好。该化合物含有硅烷基（Si），这在药物分子中较为罕见，可能影响其代谢。硅烷部分在生物体液中可能不稳定，从而导致快速清除。血浆半衰期、Cmax、AUC、清除率、分布容积和蛋白结合率等数据尚未公开报道。溶解度：DMSO 50 mg/mL（120.03 mM），超声加热后溶解。体内制剂：10% DMSO + 90% 玉米油（≥5 mg/mL，12.00 mM）。储存：粉末-20℃可保存3年；溶剂-80℃可保存6个月。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PKR激活剂4无具体毒性数据。作为一种PKR激活剂，其主要预期靶向作用是调节红细胞代谢，这也是镰状细胞贫血症的预期治疗机制。对其他丙酮酸激酶同工酶（PKM1、PKM2、PKL）的非靶向激活可能影响其他组织的代谢，从而导致不良反应。该化合物含有硅烷基团（Si），其毒性未知。在专利WO2019035864A1中，PKR激活剂4被选为示例化合物，表明其可能已通过初步安全性筛选（例如，细胞毒性、hERG和CYP抑制、遗传毒性）。然而，目前尚无公开的具体毒性数据。仅供研究使用；操作时请采取标准实验室防护措施（戴手套、穿实验服、佩戴护目镜）。不得用于人体。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
PKR激活剂4（实施例7A，CAS：2283420-05-1）是一种强效的丙酮酸激酶R（PKR）激活剂，PKR是红细胞特异性丙酮酸激酶同工酶。PKR激活可增加ATP生成并降低红细胞内2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）水平，使血红蛋白氧解离曲线左移并提高氧亲和力。这具有治疗镰状细胞病（SCD）和其他血红蛋白病的潜力，因为提高血红蛋白氧亲和力可以减少缺氧条件下红细胞的镰状化。PKR激活剂4已在专利WO2019035864A1（用于治疗血液疾病的丙酮酸激酶激活剂）中作为实施例7A公开。分子式：C18H24N6O2SSi（或根据来源不同，也可能是C18H24N2O2SSi），分子量：416.57。溶解度：DMSO 50 mg/mL (120.03 mM)。储存：粉末，-20℃保存3年。未获准用于临床。仅供研究使用。参考文献：Giovanni Cianchetta等。用于治疗血液疾病的丙酮酸激酶激活剂。WO2019035864A1。
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| 分子式 |
C18H24N6O2SSI
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|---|---|
| 分子量 |
416.572662353516
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| 精确质量 |
416.145
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| CAS号 |
2283420-05-1
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| PubChem CID |
151335432
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| tPSA |
115
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
617
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CN1C2=C(C=NNC2=O)C3=C1N=C(S3)CC4=NN(C=C4)COCC[Si](C)(C)C
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| InChi Key |
OJINPWVFOQGLEV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H24N6O2SSi/c1-23-15-13(10-19-21-18(15)25)16-17(23)20-14(27-16)9-12-5-6-24(22-12)11-26-7-8-28(2,3)4/h5-6,10H,7-9,11H2,1-4H3,(H,21,25)
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| 化学名 |
7-methyl-4-[[1-(2-trimethylsilylethoxymethyl)pyrazol-3-yl]methyl]-3-thia-5,7,10,11-tetrazatricyclo[6.4.0.02,6]dodeca-1(8),2(6),4,11-tetraen-9-one
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 50 mg/mL (120.03 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (12.00 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4006 mL | 12.0028 mL | 24.0056 mL | |
| 5 mM | 0.4801 mL | 2.4006 mL | 4.8011 mL | |
| 10 mM | 0.2401 mL | 1.2003 mL | 2.4006 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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