IDH1R132H/isocitrate dehydrogenase 1 mutant

Ivosidenib (AG-120)（0-13 μM；48 小时）以相当的效力和 IC50 值抑制许多 IDH1-R132 突变体：IDH1-R132H (IC50=12 nM)； IDH1-R132C (IC50=13 nM)； IDH1-R132G (IC50=8 nM)； IDH1-R132L (IC50=13 nM)；和 IDH1-R132S (IC50=12 nM) [1]。

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生化和细胞生物学分析显示，Ivosidenib/AG-120抑制了几种IDH1-R132突变体，其效力与R132H相似（表3），对IDH1亚型具有高度选择性，在微摩尔浓度下对IDH2（WT或突变体）亚型没有抑制作用（表S2）。100μM的AG-120没有抑制所测试的多种脱氢酶（表S3）。[1]

在体外，AG-120对mIDH1-R132同二聚体表现出快速的平衡抑制作用。由于所有可溶性mIDH1酶制剂中都存在持续的预结合NADP（H），因此结合动力学研究以证明作用模式尚无定论（支持信息，图S1和S2）。令人惊讶的是，Ivosidenib/AG-120对IDH1-WT同二聚体表现出缓慢的紧密结合抑制作用（图S3和S4）。[1]

AG-120/Ivosidenib在多种mIDH1-R132内源性和过表达细胞系中也显示出良好的细胞效力（表3），表明其可用于所有mIDH1-R16癌症。[1]

IDH突变已被证明可以通过表观遗传和代谢重连阻断正常的细胞分化。1,3−5为了确定mIDH1抑制对原代人类AML母细胞的影响，在离体试验中用Ivosidenib/AG-120处理患者的骨髓或外周血样本（表S5），mIDH1-R132H、mIDH1-R232C和IDH1-WT。在AG-120存在或不存在的情况下，在含有细胞因子（密度为0.5×106个细胞/mL）的培养基中分选和培养活母细胞。在mIDH1样本中，AG-120在最低测试剂量（0.5μM）下将细胞内2-HG水平降低了96%，在1和5μM下分别降低了98.6%和99.7%（图2）。在评估的多个IDH1-WT患者样本中无法测量2-HG。AG-120诱导AML患者离体治疗的原代mIDH1-R132H和mIDH1-R232C（但不是IDH1-WT）母细胞分化，如甲基纤维素测定中形成分化集落的能力增强、细胞表面分化标志物水平升高以及成熟髓系细胞比例增加所示[1]。

治疗后 12 小时，AG-120（灌胃给药；50 mg/kg 和 150 mg/kg）产生最大抑制（50 mg/kg 和 150 mg/kg 剂量分别为 92.0% 和 95.2%）并迅速减少肿瘤2-HG 浓度 [1]。

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在Sprague-Dawley大鼠、比格犬和食蟹猴中进行的IvosidenibPK研究显示，口服吸收迅速，全身血浆清除率（CLp）低，半衰期中长期（t1/2）（表S4）。尽管在啮齿类动物的重复研究中观察到中度暴露减少（数据未显示），但食蟹猴的暴露没有减少，癌症患者在多次给药后观察到长时间的t1/2和Ivosidenib/AG-120的积累。

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对血脑屏障完整的大鼠单次口服50mg/kg剂量后，Ivosidenib/AG-120的脑穿透率为4.1%（AUC0-8h[脑]/AUC0-8h[血浆]）。然而，血脑屏障受损的神经胶质瘤患者的脑穿透率可能更高。鉴于AG-120非常有效且耐受性良好，它有可能在大脑中达到治疗浓度，其对胶质瘤的治疗益处正在临床试验中进行评估。

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AG-120/Ivosidenib在接种HT1080细胞的雌性裸BALB/c小鼠中显示出明显的肿瘤2-HG减少。每只小鼠通过强饲法接受50或150mg/kg的单次口服赋形剂或AG-120。肿瘤2-HG浓度迅速下降，在给药后约12小时达到最大抑制率（50mg/kg和150mg/kg剂量分别为92.0%和95.2%）。单剂量AG-120后48-72小时，肿瘤2-HG浓度接近基线水平（图1），这与AG-120抑制的可逆性一致[1]。

使用黄递酶/雷沙祖林偶联系统测定化合物对mIDH1-R132H酶反应的抑制效力[1]
在初级反应中，α-KG酸还原为D-2-羟基戊二酸（2-HG）伴随着NADPH氧化为NADP。在二次黄递酶/雷沙祖林反应中测量反应时间结束时残留的NADPH的量，其中NADPH以1:1的摩尔比消耗，雷沙祖林转化为高荧光的间苯二酚。未抑制的反应在测定结束时显示出低荧光，而mIDH1-R132H对NADPH的消耗已被小分子抑制的反应显示出高荧光。初级反应在50的体积中进行L 1X缓冲液（150 mM NaCl，20 mM Tris 7.5，10 mM MgCl2，0.05%w/v牛血清白蛋白[BSA]），含有2 nM mIDH1-R132H，1 mMα-KG和4M NADPH，并在25°C下进行60分钟。为了进行二次反应，25包含36的1X缓冲区的Lg/mL的黄递酶和30mM的10-雷沙祖林加入到主要反应中，并在25°C下再孵育10分钟。在Spectramax平板阅读器上以Ex 544 Em 590读取Florence。如前所述表达并纯化重组蛋白。5以100%二甲基亚砜（DMSO）浓度制备化合物或化合物稀释液，并以1:100稀释到最终反应中。mIDH1-R132C在类似条件下进行测定，不同之处在于1X缓冲液为50mM K2HPO4 pH 6.5、40mM NaHCO3、5mM MgCl2、10%甘油、0.03%w/v BSA。

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IDH1-WT酶反应测定抑制剂效力[1]
IDH1-WT酶是在mIDH1-R132H测定法的改良版中测定的。由于该酶将NADP转化为NADPH，异柠檬酸转化为α-KG，因此NADPH产物可以通过直接偶联到黄递酶/重氮祖林系统并读取Ex 544 Em 590下的再吸收蛋白产量来连续测定。在50个样本中进行了分析L 1X缓冲液（150 mM NaCl，20 mM Tris pH 7.5，10 mM MgCl2，0.05%（w/v）BSA，2 mMβ-巯基乙醇[B-ME]），含有50M NADP，70M DL异柠檬酸盐和31.2ng/mL IDH1-WT酶（反应时间1或16小时）。直接耦合系统包括20g/mL黄递酶和40M resazurin.

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IDH2-WT酶反应测定抑制剂效力[1]
化合物对IDH2-WT酶的抑制效力在与黄递酶的偶联测定中测定。在该测定中，IDH2-WT产生NADPH与雷萨祖林同时还原为高荧光的间苯二酚有关。酶稀释至0.06g/mL，40L 1X测定缓冲液（150 mM NaCl，50 mM磷酸钾pH 7，10 mM MgCl2，10%甘油，2 mM B-ME，0.03%BSA），其中1L的化合物加入DMSO中。将混合物在室温（RT）下孵育16小时。反应开始时加入10基质混合物的L（200M异柠檬酸盐，175M NADP，60g/mL黄递酶，200M resazurin，在1X测定缓冲液中），并在RT下运行30分钟。加入25L的6%十二烷基硫酸钠，并在Spectramax平板阅读器上以Ex544/Em590读取

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mIDH2-R140Q和mIDH2-R172K酶反应测定抑制剂效力[1]
在终点测定中测定了对mIDH2-R140Q和mIDH2-R172K酶的抑制效力，其中通过添加大量过量的黄递酶和雷沙唑林来测量反应结束时残留的NADPH的量。将mIDH2/R140Q 11稀释至0.25g/mL，40L 1X测定缓冲液（150 mM NaCl，50 mM磷酸钾，pH 7.5，10 mM MgCl2，10%甘油，2 mM B-ME，0.03%BSA），在25°C，1L二甲基亚砜中的化合物。反应开始时加入10基质混合物的L（20M NADPH，8Mα-KG，在1X测定缓冲液中），并在25°C下孵育1小时。然后，通过添加25L检测混合物（36g/mL黄递酶，18M resazurin在1X测定缓冲液中），在25°C下孵育5分钟，并如上所述读取。mIDH2-R172K的测定与mIDH2-R140Q的测定一样，具有以下修饰：1.25使用g/mL蛋白质，底物混合物含有50M NADPH和6.4Mα-KG，并且在开始反应之前将化合物孵育1小时。

将细胞以5000（U87MG、HCCC9810、COR-L 105）或2500（HT1080）个细胞/孔的密度接种在各自的生长培养基中至96孔微量滴定板中，并在37°C和5%CO2下孵育过夜。第二天，AG-120在100%DMSO中制备为10mM的原液，然后在培养基中稀释至0.1%DMSO的最终浓度。最高浓度剂量为3µM。从细胞板中取出培养基，并向每个孔中加入200µL的化合物稀释液。对于神经球，将化合物和细胞（40000/孔）同时接种在一起。在37°C下与化合物孵育48小时后，从每个孔中取出100µL培养基，并按如下所述进行分析。然后使细胞板再孵育24小时。在添加化合物后72小时，将10mL/板的Promega Cell Titer Glo试剂解冻并混合。将细胞板从培养箱中取出，并使其平衡至RT。然后向每孔培养基中加入100µL试剂。将细胞板置于轨道振荡器上10分钟，然后在RT下放置20分钟。然后以500ms的积分时间读取板的发光，以确定任何化合物对生长抑制的影响（细胞增殖的半最大抑制，GI50）。[1]

动物/疾病模型：雌性BALB/c裸鼠接种HT1080细胞[1]
剂量：50 mg/kg和150 mg/kg
给药途径：灌胃（po）给药；50 mg/kg和150 mg/kg
实验结果：小鼠肿瘤显示2-HG显著减少。

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HT1080 mIDH1-R132C异种移植瘤的构建[1]
所有动物实验均经机构动物护理和使用委员会批准，并符合所有国家和地方指南及法规。培养HT1080 mIDH1-R132C细胞，并将3 × 10⁶个细胞皮下接种于雌性BALB/c小鼠侧腹部。当肿瘤体积达到约 200 mm³ 时，根据肿瘤大小将小鼠随机分为不同剂量组，并用 AG-120 治疗。小鼠通过灌胃单次给予 50 或 150 mg/kg 的 AG-120（每剂量组 n = 21）。分别于给药后 1、3、6、12、24、48 和 72 小时采集血液和肿瘤组织样本（每个时间点 n = 3），并通过 LC-MS/MS 分析样本中 AG-120 和 2-HG 的含量。

吸收、分布和排泄
口服后，ivosidenib 可迅速吸收。单次口服给药后，复发或难治性 AML 患者的 Cmax 为 4503 ng/mL，新诊断且同时接受阿扎胞苷治疗的 AML 患者的 Cmax 为 4820 ng/mL，胆管癌患者的 Cmax 为 4060 ng/mL。14 天内即可达到稳态血药浓度。复发或难治性 AML 患者的稳态 Cmax 为 6551 ng/mL，新诊断且同时接受阿扎胞苷治疗的 AML 患者的稳态 Cmax 为 6145 ng/mL，胆管癌患者的稳态 Cmax 为 4799 ng/mL。Tmax 为 2 至 3 小时。高脂肪餐会增加 ivosidenib 的暴露量。
口服 ivosidenib 后，约 77% 的剂量通过粪便排出，其中 67% 以未改变的母体药物形式排出。约17%的剂量经尿液排泄，其中10%以未代谢的ivosidenib形式排出。
在复发或难治性AML患者中，稳态表观分布容积为403 L；在同时接受阿扎胞苷治疗的新诊断AML患者中，稳态表观分布容积为504 L；在胆管癌患者中，稳态表观清除率为706 L。
在复发或难治性AML患者中，稳态表观清除率为5.6 L/h；在同时接受阿扎胞苷治疗的新诊断AML患者中，稳态表观清除率为4.6 L/h；在胆管癌患者中，稳态表观清除率为6.1 L/h。

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代谢/代谢物
Ivosidenib主要通过CYP3A4氧化代谢。CYP3A4介导的氧化代谢产物的确切化学结构尚未完全阐明。伊沃西尼布还可以通过 N-去烷基化和水解等次要代谢途径进行代谢。

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生物半衰期
在复发或难治性 AML 患者中，稳态终末半衰期为 58 小时；在同时接受阿扎胞苷治疗的新诊断 AML 患者中，稳态终末半衰期为 98 小时；在胆管癌患者中，稳态终末半衰期为 129 小时。

肝毒性
在ivosidenib治疗期间，血清转氨酶水平升高较为常见，发生率约为15%至20%，但仅有1%至2%的患者转氨酶水平超过正常值上限5倍以上。ivosidenib的临床应用有限，但尚未发现与伴有症状或黄疸的急性肝损伤病例相关。由于IDH抑制剂的临床应用经验有限，其引起肝损伤的可能性尚不明确。
在上市前研究中，ivosidenib治疗与5%至20%的患者出现“分化综合征”相关，有时病情严重甚至危及生命。分化综合征的特征是髓系细胞快速增殖和呼吸窘迫症状，并伴有低氧血症、肺部浸润和胸腔积液。其他表现包括肾功能损害、发热、淋巴结肿大、骨痛、外周水肿和体重增加。肝功能障碍也可能发生，但通常会被更严重的全身表现所掩盖。分化综合征通常在开始治疗后 2 至 8 周内出现，且病情可能较为严重。治疗包括停用 ivosidenib，并在病情较重的情况下使用皮质类固醇和羟基脲。一旦分化综合征缓解，患者可以重新开始使用 ivosidenib。
可能性评分：E（未经证实但怀疑是临床上明显的肝损伤的原因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于哺乳期使用 ivosidenib 的临床信息。由于 ivosidenib 与血浆蛋白的结合率为 92% 至 96%，因此其在乳汁中的含量可能较低。然而，其半衰期约为 93 小时，因此可能会在婴儿体内蓄积。制造商建议在接受ivosidenib治疗期间以及给药后1个月内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
体外实验表明，ivosidenib与血浆蛋白的结合率为92-96%。

[1]. Discovery of AG-120 (Ivosidenib): A First-in-Class Mutant IDH1 Inhibitor for the Treatment of IDH1Mutant Cancers. ACS Med Chem Lett. 2018 Jan 19;9(4):300-305.

伊沃西尼是一种叔酰胺，由(2S)-1-(4-氰基吡啶-2-基)-5-氧代吡咯烷-2-羧酸的羧基与(2S)-2-(2-氯苯基)-N-(3,3-二氟环丁基)-2-[(5-氟吡啶-3-基)氨基]乙酰胺的仲氨基缩合而成。它已获得美国食品药品监督管理局 (FDA) 批准，用于治疗携带异柠檬酸脱氢酶-1 (IDH1) 突变的急性髓系白血病 (AML) 患者。它是一种抗肿瘤药物，也是一种 EC 1.1.1.42（异柠檬酸脱氢酶）抑制剂。它属于一氯苯类、氰基吡啶类、吡咯烷-2-酮类、有机氟化合物、叔酰胺类和仲酰胺类化合物。
伊沃西尼是一种首创的异柠檬酸脱氢酶-1 (IDH1) 抑制剂。IDH1 是一种酶，在某些癌症中经常发生突变和过度表达，导致细胞异常生长和增殖。伊沃西尼抑制突变的 IDH1，阻断其酶活性，从而抑制癌细胞的进一步分化。2018 年 7 月，伊沃西尼获得美国食品药品监督管理局 (FDA) 的加速批准，用于治疗成人复发性难治性急性髓系白血病。目前，伊沃西尼（ivosidenib）已获批用于治疗老年新诊断的急性髓系白血病（可与阿扎胞苷联合使用或作为单药治疗），以及治疗成人局部晚期或转移性胆管癌和复发或难治性骨髓增生异常综合征。该药物仅对携带易感IDH1突变的患者有效。2023年2月，欧洲药品管理局（EMA）人用药品委员会（CHMP）对伊沃西尼给予了积极意见，并建议批准其上市用于治疗急性髓系白血病和胆管癌。2023年5月，EMA正式批准了该药物。
伊沃西尼是一种异柠檬酸脱氢酶1抑制剂。 ivosidenib 的作用机制是作为异柠檬酸脱氢酶 1 抑制剂、细胞色素 P450 3A4 诱导剂和细胞色素 P450 2C9 诱导剂。
Ivosidenib 是一种口服小分子异柠檬酸脱氢酶-1 抑制剂，用于治疗成人急性髓系白血病 (AML)，是一种抗肿瘤药物。Ivosidenib 治疗期间血清转氨酶升高发生率中等，并被怀疑是少数临床表现明显的急性肝损伤病例的原因。
Ivosidenib 是一种口服异柠檬酸脱氢酶 1 型 (IDH1) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。 AG-120 给药后，可特异性抑制细胞质中一种突变形式的 IDH1，从而抑制致癌代谢物 2-羟基戊二酸 (2HG) 的生成。这可能导致表达 IDH1 的肿瘤细胞分化诱导和增殖抑制。IDH1 是柠檬酸循环中的一种酶，在多种癌症中发生突变；它通过阻断细胞分化和催化 2HG 的生成来启动和驱动癌症生长。
IVOSIDENIB 是一种小分子药物，其临床试验阶段最高为 IV 期（涵盖所有适应症），于 2018 年首次获批，目前有 3 项已获批适应症和 7 项在研适应症。该药物带有美国食品药品监督管理局 (FDA) 的黑框警告。药效学
伊沃西尼是一种抗肿瘤药物，对携带易感 IDH1 突变的癌症有效，这表明癌细胞中致癌代谢物 D-2-羟基戊二酸 (D-2HG) 的水平升高。伊沃西尼通过抑制 IDH1 酶，以剂量依赖的方式降低 D-2HG 水平。伊沃西尼可抑制突变型和野生型 IDH1，但不抑制 IDH2。

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代谢酶异柠檬酸脱氢酶 1 (IDH1) 活性位点内关键精氨酸残基 (R132) 的体细胞点突变赋予癌细胞新的功能，导致致癌代谢物 D-2-羟基戊二酸 (2-HG) 的产生。2-HG 水平升高与表观遗传改变和细胞分化受损有关。 IDH1 突变已在多种血液系统恶性肿瘤和实体瘤中被发现。本文报道了 AG-120（ivosidenib）的发现，它是一种 IDH1 突变酶抑制剂，在肿瘤模型中表现出显著的 2-HG 降低作用，并能够在体外诱导原发性 AML 患者样本分化。来自招募携带 IDH1 突变癌症患者的 I 期临床试验的初步数据显示，AG-120 具有可接受的安全性和临床活性。这些令人信服的临床前数据为推进 AG-120 进入临床开发提供了理论依据。此前已发现 enasidenib（一种针对 mIDH2 的活性药物）以及本文所述的 AG-120（ivosidenib，一种针对 mIDH1 的活性药物），这代表了一种基于细胞分化的新型癌症疗法。 AG-120 是一种强效的 mIDH1 抑制剂，具有良好的非临床和临床安全性，在 1 期临床试验中对实体瘤和血液系统恶性肿瘤均显示出良好的临床活性。在复发/难治性mIDH1 AML患者中，正在进行的1期临床试验的中期结果显示，总缓解率为42%，完全缓解率为22%（完全缓解的中位持续时间为9.3个月）。¹⁵ 在既往接受过治疗的非增强型mIDH1胶质瘤患者¹⁶以及既往接受过大量治疗的mIDH1胆管癌患者中观察到了长期疾病稳定，其中中位无进展生存期为3.8个月，6个月无进展生存率为40%。¹⁷ 在这两项单臂1期研究中，AG-120迄今为止已显示出可接受的安全性。^15-18 AG-120目前正处于成人mIDH1 AML（ClinicalTrials.gov NCT03173248）和既往接受过治疗的晚期mIDH1胆管癌的后期临床开发阶段。 （NCT02989857）。[1]

C28H22CLF3N6O3

582.96

582.139

C, 57.69; H, 3.80; Cl, 6.08; F, 9.78; N, 14.42; O, 8.23

2070009-31-1

Ivosidenib;1448347-49-6;IDH1 Inhibitor 8;1448346-63-1

121230976

White to off-white solid

1.5±0.1 g/cm3

854.3±65.0 °C at 760 mmHg

470.4±34.3 °C

0.0±3.2 mmHg at 25°C

1.651

0.38

119.29

1

9

7

41

1050

2

N1(C2=NC=CC(C#N)=C2)C(=O)CC[C@H]1C(N([C@H](C1=CC=CC=C1Cl)C(NC1CC(F)(F)C1)=O)C1=CC(F)=CN=C1)=O

WIJZXSAJMHAVGX-WIOPSUGQSA-N

InChI=1S/C28H22ClF3N6O3/c29-21-4-2-1-3-20(21)25(26(40)36-18-11-28(31,32)12-18)37(19-10-17(30)14-34-15-19)27(41)22-5-6-24(39)38(22)23-9-16(13-33)7-8-35-23/h1-4,7-10,14-15,18,22,25H,5-6,11-12H2,(H,36,40)/t22-,25+/m0/s1

(S)-N-((R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((3,3-difluorocyclobutyl)amino)-2-oxoethyl)-1-(4-cyanopyridin-2-yl)-N-(5-fluoropyridin-3-yl)-5-oxopyrrolidine-2-carboxamide

(R,S)-Ivosidenib; 2070009-31-1; (S)-N-((R)-1-(2-chlorophenyl)-2-((3,3-difluorocyclobutyl)amino)-2-oxoethyl)-1-(4-cyanopyridin-2-yl)-N-(5-fluoropyridin-3-yl)-5-oxopyrrolidine-2-carboxamide; Ivosidenib, (R,S)-; NDE4ELL9MX; (2R)-2-(2-chlorophenyl)-2-{1-[(2S)-1-(4-cyanopyridin-2-yl)-5-oxopyrrolidin-2-yl]-N-(5-fluoropyridin-3-yl)formamido}-N-(3,3-difluorocyclobutyl)acetamide; (2S)-N-[(1R)-1-(2-chlorophenyl)-2-[(3,3-difluorocyclobutyl)amino]-2-oxoethyl]-1-(4-cyanopyridin-2-yl)-N-(5-fluoropyridin-3-yl)-5-oxopyrrolidine-2-carboxamide; (R,S)-AG-120;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 3.33 mg/mL (5.71 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.33 mg/mL (0.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 3.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。