| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
HPK1 0.25 nM (IC50)
HPK1-IN-3 specifically targets HPK1 (MAP4K1). It is a potent ATP-competitive inhibitor with an IC50 of 0.25 nM against the enzyme. HPK1 is a serine/threonine kinase that acts as a negative regulator of T-cell receptor (TCR) signaling. By blocking HPK1 activity, the compound is designed to relieve this brake on T-cell activation, promoting a more robust immune response. It also has reported cellular potency in human PBMCs. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在人类单核细胞衍生的树突状细胞中，用 HPK1-IN-3（化合物 27；0.25–4 μM；24 小时）治疗显著增加了促炎细胞因子 TNF-α 和 IL-6 的浓度依赖性水平 [1]。
在无细胞酶活性测定中，HPK1-IN-3 对 HPK1 (MAP4K1) 表现出强效抑制活性，IC50 值为 0.25 nM。该数据证实其是一种有效的 ATP 竞争性抑制剂。在利用人外周血单核细胞 (PBMC) 进行的细胞活性测定中，HPK1-IN-3 增强 IL-2 产生的 EC50 值为 108 nM，表明其具有功能活性，并能够在相关的细胞系统中调节 T 细胞反应。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚未公布HPK1-IN-3的具体体内活性数据。然而，鉴于其强大的体外活性和108 nM的细胞EC50值，推测其可增强体内T细胞反应。这可在同源小鼠肿瘤模型（例如MC38或CT26）中得到验证，口服HPK1-IN-3可能通过增强CD8+ T细胞浸润和效应功能来减缓肿瘤生长。此外，HPK1-IN-3还可与抗PD-1抗体联合使用，以期克服耐药性。
|
| 酶活实验 |
HPK1-IN-3 的特定体外实验方案采用 ADP-Glo™ 激酶活性检测试剂盒。该检测在白色 384 孔板中进行。将重组全长人 HPK1 (MAP4K1) 酶与系列稀释的 HPK1-IN-3（例如，1 pM 至 10 uM）在含有 10 uM ATP 和 MBP 底物的激酶反应缓冲液中孵育。室温孵育 60 分钟后，加入 ADP-Glo 试剂终止反应并消耗剩余的 ATP。40 分钟后，加入激酶检测试剂将 ADP 转化为 ATP，并使用酶标仪测量发光值。IC50 值使用四参数逻辑曲线计算。
|
| 细胞实验 |
对于体外细胞实验，采用Ficoll-Paque密度梯度离心法从全血中分离人外周血单核细胞（PBMC）。将PBMC接种于预先包被抗CD3抗体（1 ug/mL）的96孔板中。加入浓度范围为0.1 nM至10 uM的HPK1-IN-3，以及可溶性抗CD28抗体（1 ug/mL）。培养72小时后，收集细胞上清液。采用电化学发光（ECL）或ELISA法定量IL-2水平。根据浓度-反应曲线计算IL-2产生的EC50值。
|
| 动物实验 |
HPK1-IN-3 的体内药效学 (PD) 方案旨在评估其增强 T 细胞活化的能力。C57BL/6 小鼠经口灌胃给予 HPK1-IN-3，剂量为 1-30 mg/kg。在预定的时间点（例如，给药后 2、6、12 和 24 小时），处死小鼠并收集脾脏。分离脾细胞，并在 GolgiPlug（布雷菲德菌素 A）存在下，用抗 CD3/CD28 磁珠进行体外刺激 4-6 小时。然后对细胞进行 CD4 和 CD8 表面染色，随后进行细胞内 IL-2 和 IFN-γ 细胞因子染色。通过流式细胞术分析细胞因子阳性 T 细胞的百分比，以评估药效学效应。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无HPK1-IN-3的详细药代动力学（PK）数据。作为一种高效、选择性强的ATP竞争性HPK1抑制剂，其特性将在标准的小鼠PK研究中进行表征。雄性BALB/c小鼠分别接受单次静脉注射（IV）剂量（1 mg/kg）和单次口服（PO）剂量（10 mg/kg）的HPK1-IN-3。在给药后24小时内的多个时间点采集血浆样本。采用经验证的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法测定HPK1-IN-3的浓度。关键参数，包括半衰期（T1/2）、最大血药浓度（Cmax）、曲线下面积（AUC）、清除率（Cl）、分布容积（Vd）和口服生物利用度（%F），将使用WinNonlin软件进行计算。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无HPK1-IN-3的毒理学数据。作为一种HPK1抑制剂，HPK1能够解除T细胞上的负调控检查点，其主要靶向毒性预计为免疫介导的炎症。一项标准的探索性毒性研究将包括一项为期7天的重复给药大鼠口服毒性试验。动物将每日接受0、3、10和30 mg/kg剂量的HPK1-IN-3治疗。评估内容包括临床观察、体重、食物消耗量、血液学（包括分类计数）、血清化学以及全面的组织病理学检查，尤其关注淋巴组织（脾脏、胸腺、淋巴结）。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
HPK1-IN-3 是一种研究级化合物，尚未获准用于临床。其分子式为 C23H22F4N6O2，分子量为 490.45，纯度为 98.61%。该化合物以粉末形式储存于 -20℃。HPK1-IN-3 是研究 HPK1 作为癌症免疫治疗靶点的关键工具。它对于研究 HPK1 介导的 T 细胞活化负反馈环路的解除具有重要价值。
|
| 分子式 |
C23H22F4N6O2
|
|---|---|
| 分子量 |
490.453398227692
|
| 精确质量 |
490.174
|
| CAS号 |
2739844-34-7
|
| PubChem CID |
155883041
|
| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
|
| LogP |
4.2
|
| tPSA |
105
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
11
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
35
|
| 分子复杂度/Complexity |
731
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CN1CCC2=CC(=C(C=C2C1)NC3=NC=C(C(=N3)NC4=C(C=CC=C4F)C(F)(F)F)C(=O)N)OC
|
| InChi Key |
RZLXOEIALAVGKH-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C23H22F4N6O2/c1-33-7-6-12-9-18(35-2)17(8-13(12)11-33)30-22-29-10-14(20(28)34)21(32-22)31-19-15(23(25,26)27)4-3-5-16(19)24/h3-5,8-10H,6-7,11H2,1-2H3,(H2,28,34)(H2,29,30,31,32)
|
| 化学名 |
4-[2-fluoro-6-(trifluoromethyl)anilino]-2-[(6-methoxy-2-methyl-3,4-dihydro-1H-isoquinolin-7-yl)amino]pyrimidine-5-carboxamide
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 83.33 mg/mL (169.91 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0389 mL | 10.1947 mL | 20.3894 mL | |
| 5 mM | 0.4078 mL | 2.0389 mL | 4.0779 mL | |
| 10 mM | 0.2039 mL | 1.0195 mL | 2.0389 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
