| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Kd: 0.3 nM (APJ receptor)[1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
BMS-986224 对人 APJ 的 EC50 为 0.02 nM，并完全阻断毛喉素介导的 cAMP 合成。中国仓鼠卵巢-K1 或 HEK293 ZF 细胞在 β-arrestin 募集、ERK 磷酸化和 APJ 内化方面对 BMS-986224 (0-100 nM) 完全响应[1]。强效选择性 APJ 受体激动剂 BMS-986224 显示出类似于 (Pyr1) apelin-13[1] 的信号传导谱。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在 RHR 模型中，BMS-986224（0.192 mg/kg 或 3 mg/kg；SC 输注；每日）通过将每搏输出量和心输出量增加至健康动物中观察到的水平，产生与依那普利不同的效果，但无法预防心脏肥大和纤维化[1]。
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| 酶活实验 |
GPCR选择性分析[1]
进行GPCR选择性测定以评估BBMS-986224与其他GPCR（腺苷A2A；肾上腺素能α1B、1D、2A和2C，肾上腺素能β1和β2；大麻素CB1；多巴胺D1和D2；组胺H1和H2；毒蕈碱M2；阿片样物质μ和κ；血清素5HT1B、5HT2B和5HT4）相互作用的可能性。如Alt等人所述，进行了这些测定。12使用膜过滤法进行的竞争性放射性配体结合测定用于评估BBMS-986224在来源于细胞过表达单个人类GPCR的膜中竞争放射性配体结合的能力。 放射性配体结合分析[1] 将一系列浓度的BBMS-986224添加到含有[3H]apelin-13的细胞膜提取物中（约2倍的平衡解离常数[Kd]）。使用过量未标记的（Pyr1）apelin-13（80 nM）来确定0至120分钟的特异性结合。使用竞争性结合动力学的非线性回归对值进行全局拟合，该回归应用了结合实验中确定的[3H]apelin-13的Kon和Koff约束。使用竞争性放射性配体结合分析来评估BBMS-986224与过表达单个人GPCR的细胞膜中相应放射性配体的结合。 |
| 细胞实验 |
ERK磷酸化[1]
表达人APJ的HEK293 ZF细胞在50μL完全生长培养基中以30000个细胞/孔的速度在384孔聚-D-赖氨酸涂层板上生长和铺板3天。将完整的生长培养基替换为80μL/孔的无血清培养基，以进一步培养过夜。试验化合物[BBMS-986224]在DMSO中连续稀释，并以10-50nL/孔的浓度分配到384孔REMP板中。对于该测定，化合物用50μL HBSS/HEPES/0.1%BSA测定缓冲液进一步稀释。从细胞板中取出培养基，直接向细胞中加入25μL稀释的化合物。在37°C下孵育7分钟后，立即用检测试剂盒中提供的裂解缓冲液裂解细胞并搅拌15分钟。然后将细胞裂解液（4μL/孔）转移到384孔ProxiPlates中，并加入7μL/孔免疫球蛋白G（IgG）检测试剂。在黑暗中孵育2小时后，在EnVision平板阅读器上测量信号。按照cAMP测定所述测定化合物效力。 基于BRET的生物传感器检测1] 用Tyrode缓冲液（137 mM NaCl、1 mM CaCl2、0.9 mM KCl、1 mM MgCl2、3.6 mM NaH2PO4、5.5 mM葡萄糖、12 mM NaHCO3和25 mM HEPES，pH 7.4）洗涤细胞，并向每个孔中加入90μL Tyrode的缓冲液。细胞在室温下在新缓冲液中平衡≥30分钟；然后将10×腔肠素底物（10μL）添加到每个孔中（最终浓度为2μM的紫色腔肠素）。然后将不同浓度的测试化合物（BBMS-986224和（Pyr1）apelin-13）添加到每个孔（HP D300数字分配器；Tecan）中，并在室温下孵育细胞5-15分钟。然后使用BioTek的Synergy Neo多模式阅读器和BRET2BBMS-986224过滤器410/80和515/30收集BRET读数。通过计算GFP（515/30nm）发出的光与Rluc（410/80nm）发射的光的比率来确定BRET信号。使用非刺激对照将BRET信号值转换为激活百分比为0%，（Pyr1）apelin-13最大反应为100%。使用4参数逻辑斯谛方程，利用这些归一化值生成了Sigmoid浓度-响应曲线，以确定不同化合物的EC50。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠（肾性高血压大鼠模型）[1]
剂量：0.192 mg/kg 或 3 mg/kg 给药途径：皮下输注；每日一次；术前3天开始，术后持续7天 实验结果：10天输注期间，低剂量组和高剂量组的稳态血浆浓度分别为102 nmol/L和2686 nmol/L。低剂量下，BMS-986224 可增加每搏输出量 (SV) 和心输出量 (CO)，而不影响其他测量参数，包括测量的舒张期参数、心肌纤维化和静息心率 (RHR) 下的心脏重量。 (Pyr1) Apelin-13、BBMS-986224 和多巴酚丁胺：正常大鼠的急性血流动力学分析[1] 经过 10 分钟的平衡期后，静脉输注载体 (n=14) 或 BBMS-986224（剂量分别为 1、10 或 100 μg/kg/min；n 分别为 8、6 和 7），输注时间为 15 分钟（补充图 IB(i)）。我们还纳入了多巴酚丁胺（一种正性肌力药物）作为对照。进行剂量递增试验，并以 1 μg/kg/min 的剂量静脉输注多巴酚丁胺 15 分钟（参见方法和补充图 IC）。在单独的麻醉和插管动物组中测量血浆暴露量（补充图 IA(ii) 和 IB(ii)）。平衡后，分别在 15 分钟（BMS-986224 和载体）或 20 分钟（Pyr1）内输注 apelin-13（6 μg/kg/min）、apelin-13（1、10 和 100 μg/kg/min）或载体。在输注开始后 5、10、20、22 和 30 分钟采集 (Pyr1) apelin-13 的血样，在输注开始后 5、15、20 和 30 分钟采集 BMS-986224 和载体的血样。在 (Pyr1) apelin-13 实验中，采用优化的采血方案采集血液，随后使用液相色谱-串联质谱法测定浓度，如前所述。[1] BBMS-986224：慢性肾性高血压大鼠模型中的心血管效应[1] 皮下给药[1] 在输注研究中，将渗透泵（ALZET® 渗透泵 2ML2 型；DURECT 公司）皮下植入动物体内。皮下输注组的研究分组包括：BMS-986224（0.192 mg/kg/天或3 mg/kg/天，每剂量组n=15）、赋形剂（n=15）、依那普利（40 mg/kg/天，n=15）和假手术对照组（n=10）。BBMS-986224、依那普利或赋形剂输注于术前3天开始，并持续至术后7天（补充图ID）。关键测量指标包括：第 6 天通过尾套法（CODA；Kent Scientific Products）测量清醒动物的收缩压（SBP）；第 7 天进行心脏结构和功能（每搏输出量 [SV]、心输出量 [CO]、心率 [HR]、左心室质量、左心室舒张末期容积 [LVEDV] 和射血分数 [EF] 以及等容舒张时间 [IVRT]）的超声心动图（ECHO）。在第 7 天采集血浆样本，用于测量 BBMS-986224 和心力衰竭生物标志物。该实验在一个更大的队列（每组 n=20）中重复进行。 口服给药[1] 在每日两次 (BID) 的研究中，BBMS-986224 的剂量选择旨在使血浆峰浓度（0.1 mg/kg/天，BID）或谷浓度（1 mg/kg/天，BID）达到 200 nM。在低剂量每日一次 (QD) 的研究中，0.06 mg/kg QD 的剂量旨在使血浆峰浓度达到 100 nM，0.2 mg/kg 的剂量旨在使血浆药物浓度-时间曲线下面积 (AUC) 0-24 达到 3.4 μM*h。在不同的动物组中分别给予口服 (PO) 和皮下 (SC) 赋形剂，并皮下给予马来酸依那普利 (40 mg/kg/天)。测试化合物的制备方法详见补充表 II。本研究还纳入了假手术对照组。治疗于术前3天开始，术后持续8天（补充图IE、IF）。分别于第7天BMS-986224谷浓度和第8天BMS-986224峰浓度时进行超声心动图检查。于第6天谷浓度和峰浓度时采集血浆样本，并于第8天峰浓度时重复采集。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
背景：目前亟需能够安全增强心肌收缩力和输出量的新型心力衰竭疗法。既往的apelin肽研究表明，APJ（apelin受体）激动剂具有增强心力衰竭患者心脏功能的潜力。然而，apelin的半衰期较短，限制了其治疗应用。本文描述了一种新型口服生物利用度高的APJ激动剂BMS-986224的临床前特性。
方法：采用放射性配体结合实验和APJ下游信号通路检测（cAMP、磷酸化ERK[细胞外信号调节激酶]、基于生物发光共振能量转移的G蛋白检测、β-arrestin募集和受体内化）比较了BMS-986224与(Pyr1)apelin-13的药理学特性。在麻醉植入导管的大鼠中研究了其对心脏功能的急性影响。本研究采用肾性高血压大鼠（RHR）模型，通过超声心动图评估了BMS-986224的慢性作用，该模型可导致心脏肥大和心输出量下降。 结果：BMS-986224是一种强效（Kd=0.3 nmol/L）且选择性的APJ激动剂，其受体结合和信号传导特性与(Pyr1) apelin-13相似。在人胚肾293细胞和人心肌细胞中进行的G蛋白信号传导分析证实了这一点，并表明其信号传导与(Pyr1) apelin-13无明显差异。在麻醉的植入式大鼠中，短期输注BMS-986224可使心输出量增加（10%-15%），而不影响心率，其作用与(Pyr1) apelin-13相似，但与多巴酚丁胺不同。在 RHR 模型中，皮下和口服 BMS-986224 均可使每搏输出量和心输出量增加至健康动物的水平，但并未阻止心脏肥大和纤维化，其作用与依那普利不同。 结论：我们发现了一种新型、高效且口服生物利用度高的非肽类 APJ 激动剂，其信号传导特性与 (Pyr1) apelin-13 非常相似。我们发现，口服 APJ 激动剂可在心脏疾病模型中持续增加心输出量，并且其作用机制与肾素-血管紧张素系统抑制剂依那普利不同，这支持对 BMS-986224 在心力衰竭中的应用进行进一步的临床评估。[1] 我们的研究存在一些局限性。尽管BMS-986224的设计旨在使其信号传导特性和受体相互作用特征与(Pyr1) apelin-13高度相似，但这些化合物之间可能存在未知的差异，从而限制了BMS-986224的临床前研究结果向人类apelin肽类药物研究结果的外推。此外，值得注意的是，我们的研究仅使用了雄性大鼠。虽然在RHR模型中观察到的CO持续改善效果令人鼓舞，但导致这些变化的机制尚不明确，需要开展更多研究来评估其与人类疾病的相关性。 总之，我们发现了一种新型、高效、选择性强且口服生物利用度高的小分子APJ受体激动剂，它重现了内源性(Pyr1) apelin-13的APJ受体信号传导特性和体内心血管效应。我们证明，在疾病模型中，长期口服给药可以维持心脏功能的增强，这支持在临床环境中对BMS-986224进行进一步评估。在临床前模型中观察到的 BMS-986224 的有利作用能否转化为人类心力衰竭，还有待确定。[1] |
| 分子式 |
C24H23CLN4O6
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|---|---|
| 分子量 |
498.915624856949
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| 精确质量 |
498.13
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| CAS号 |
2055200-88-7
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| PubChem CID |
137106310
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| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid powder
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| LogP |
1.8
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| tPSA |
129
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
35
|
| 分子复杂度/Complexity |
812
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(=O)NC(COCC)=C(C2=C(OC)C=CC=C2OC)C(O)=C1C1=NN=C(CC2=NC=C(Cl)C=C2)O1
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| InChi Key |
AGZKELPIAJYRDT-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H23ClN4O6/c1-4-34-12-15-19(20-16(32-2)6-5-7-17(20)33-3)22(30)21(23(31)27-15)24-29-28-18(35-24)10-14-9-8-13(25)11-26-14/h5-9,11H,4,10,12H2,1-3H3,(H2,27,30,31)
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| 化学名 |
3-[5-[(5-chloropyridin-2-yl)methyl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-5-(2,6-dimethoxyphenyl)-6-(ethoxymethyl)-4-hydroxy-1H-pyridin-2-one
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| 别名 |
BMS-986224; 2055200-88-7; N5O33BF03F; UNII-N5O33BF03F; CHEMBL4873876; BMS986224; 2(1H)-Pyridinone,3-(5-((5-chloro-2-pyridinyl)methyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl)- 5-(2,6-dimethoxyphenyl)-6-(ethoxymethyl)-4-hydroxy-; 3-(5-((5-Chloropyridin-2-yl)methyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl)-5-(2,6-dimethoxyphenyl)-6- (ethoxymethyl)pyridine-2,4-diol;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 20.83 mg/mL (41.75 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.17 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0043 mL | 10.0216 mL | 20.0433 mL | |
| 5 mM | 0.4009 mL | 2.0043 mL | 4.0087 mL | |
| 10 mM | 0.2004 mL | 1.0022 mL | 2.0043 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
APJ antagonist-1
APJ receptor agonist 10 free base
Apelin agonist 2
APJ receptor agonist 10
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