| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase (allosteric inhibitor binding to the NNI-1 site, also known as the thumb pocket I) [1].
Biochemical IC50 against genotype 1b (Con1b) NS5B polymerase: 34 nM [1]. EC90: 0.3 μM (Huh7-Luc cell)[1]. EC50: 82 nM (HCV)[2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
抗复制子活性： 在稳定表达复制子的细胞系中，TMC647055 抑制HCV基因型1b复制的EC50中位数为77 nM（荧光素酶读值）和139 nM（qRT-PCR读值）。对基因型1a，EC50中位数为166 nM（qRT-PCR读值）。在40%人血清存在下，对基因型1b的EC50升高至740 nM（荧光素酶读值）[1]。
跨基因型活性（嵌合复制子）： 在使用来自患者分离株NS5B序列的嵌合复制子的瞬时复制子实验中，TMC647055 对基因型1a、1b、3a、4a和6a的EC50中位数范围为27 nM至113 nM。然而，与参考基因型1b相比，对基因型2a和2b嵌合复制子的活性降低了200多倍 [1]。 选择性和细胞毒性： TMC647055 对HCV具有高选择性。在高达100 μM浓度下，对一系列DNA和RNA病毒（CMV、腺病毒、牛痘病毒、柯萨奇病毒、流感病毒、黄热病病毒）未观察到抗病毒活性，在高达25 μM浓度下对登革热病毒无影响。对HBV的EC50为86 μM。在Huh7细胞中的平均CC50为42.1 μM，在MT4细胞中为28.9 μM。在其他细胞系（MRC-5, HEK-293T, HepG2, VeroE6）中，CC50 > 50 μM [1]。 耐药谱（突变）： TMC647055 的活性会被NNI-1结合口袋的突变显著降低。在瞬时复制子实验中，L392I、V494A和P495L突变的EC50倍数变化分别为9倍、3倍和371倍。其活性不受与其他抑制剂类别（NNI-2, -3, -4，核苷抑制剂，NS3/4A蛋白酶抑制剂，NS5A抑制剂）耐药相关的突变影响 [1]。 体外耐药性筛选： 使用TMC647055 在基因型1b复制子细胞中进行的耐药性筛选实验，频繁筛选出NS5B残基L392 (L392I) 和 P495 (P495S/T/L) 的突变。在基因型1a的筛选中，最常见的突变位于P495 (P495S/L)、Q309 (Q309R/K)、F574 (F574V/S/A) 和 C575 (C575F/S) [1]。 集落形成实验： 在使用Huh7-Luc复制子细胞的集落形成实验中，1.5 μM的TMC647055 完全抑制了耐药复制子集落的形成。在750 nM浓度下，需要与NS3/4A蛋白酶抑制剂TMC435（80 nM）联用才能抑制集落形成 [1]。 在 Huh7-Luc 细胞中，TMC647055（胆碱盐）表现出抗病毒活性，EC90 值为 0.3 μM[1]。在细胞 HCV 测试中，TMC647055 胆碱盐表现出很强的联合作用，EC50 值为 82 nM[2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
复制子清除和反弹实验： 在使用Huh7-Luc复制子细胞的2周清除阶段，1.5 μM和3.75 μM的TMC647055 诱导了HCV复制子RNA的剂量依赖性降低，最大降幅分别为3.1 log10和3.7 log10。然而，在停止化合物处理后，HCV RNA发生反弹，表明单药治疗不足以完全清除。相比之下，1.5 μM TMC647055与100 nM TMC435的联用在清除阶段使HCV RNA迅速降至定量限以下，并在治疗停止后的3周内阻止了病毒反弹 [1]。
TMC647055 化合物 18a（胆碱盐）单次口服剂量 10 mg/kg 表现出令人满意的药代动力学特征，表现出良好的口服生物利用度和全身暴露、中等血浆清除率和适度的分布体积[2]。 |
| 酶活实验 |
引物依赖性RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）实验： 使用引物依赖性转录实验测定了TMC647055 的生化活性。将纯化的Con1b NS5BAC21聚合酶（20 nM）与抑制剂预孵育15分钟。通过加入含有5'-生物素化寡核苷酸(rG13)引物、poly(rC)模板、GTP和[3H]GTP的混合物来启动反应。室温孵育2小时后，加入链霉亲和素包被的SPA磁珠终止反应。测得其对基因型1b NS5B聚合酶的IC50为34 nM [1]。
表面等离子共振（SPR）结合动力学： 使用SPR测量了TMC647055 与多种NS5BAC21聚合酶分离株的相互作用。将纯化的、带His6标签的聚合酶固定在传感器芯片上。采用单循环动力学，依次注射五个递增浓度的抑制剂，每个持续300秒，然后监测解离1200秒。使用全局拟合分析数据。对于野生型Con1b NS5B，中位KD为4.1 nM，kon为2.2E+04 1/Ms，koff为8.9E-05 1/s，复合物半衰期(t1/2)为130.5分钟。P495L突变体的亲和力显著降低（KD = 6.5 μM），这是由于koff增加了200倍，kon减少了6倍 [1]。 |
| 细胞实验 |
稳定复制子荧光素酶报告基因实验： 将含有基因型1b双顺反子亚基因组HCV复制子（克隆ET）的Huh7-Luc细胞接种，并与系列稀释的TMC647055 一起孵育3天。通过测量萤火虫荧光素酶活性来确定对HCV复制的抑制。从剂量反应曲线计算EC50和EC90值 [1]。
稳定复制子qRT-PCR实验： 将Huh7-Luc（基因型1b）、Huh7-SG-Con1b（基因型1b）和Huh7-SG-1a（基因型1a）复制子细胞与TMC647055 一起孵育3天。通过定量实时PCR测量HCV复制子RNA水平，并标准化到细胞参考mRNA（RPL13基因）[1]。 突变体和嵌合体的瞬时复制子实验： 构建了突变复制子（NS5B带有点突变）或嵌合复制子（带有不同基因型的NS5B序列）。将体外转录的RNA电转染到Huh7-Lunet细胞中。4天后，通过比较抑制剂处理孔与非处理对照孔的荧光素酶发光值来评估药物敏感性 [1]。 细胞毒性实验： 将各种细胞系（MRC-5, HEK-293T, HepG2, VeroE6）与不同浓度的TMC647055 一起孵育3天。通过加入刃天青并测量转化产物（试卤灵）的荧光来分析细胞毒性。从剂量依赖性抑制曲线计算CC50值 [1]。 基于荧光素酶的计数器筛选： 将表达CMV启动子控制下荧光素酶报告基因的Huh7细胞（Huh7-CMV-Luc）和表达HIV-1 LTR控制下荧光素酶报告基因的MT4 T淋巴细胞（MT4-LTR-Luc）与TMC647055 孵育3天。通过测量荧光素酶发光来确定细胞毒性 [1]。 集落形成实验： 接种Huh7-Luc复制子细胞，并用不同浓度的TMC647055 单独或与TMC435联用，并在G418存在下处理。每周更换两次培养基。2-3周后，剩余细胞集落用中性红染色并计数 [1]。 复制子清除和反弹实验（基于细胞）： 在无G418条件下，用TMC647055 单独或与TMC435联用处理Huh7-Luc复制子细胞2周。每周传代两次，收集细胞沉淀用于RNA提取和RT-PCR，以监测HCV复制子RNA水平。2周后，撤除抑制剂，将细胞在G418存在下继续培养3周，以允许残留HCV RNA的潜在反弹 [1]。 |
| 动物实验 |
大鼠药代动力学研究： 雄性大鼠通过静脉注射（2 mg/kg）和口服（10 mg/kg）给予TMC647055。静脉注射溶媒为PEG400/生理盐水（70/30），口服溶媒为PEG400/2%维生素E TPGS。测定了血浆清除率、给药后7小时的肝脏浓度、肝脏/血浆比率和口服生物利用度 [2]。
犬药代动力学研究： 犬单次口服TMC647055 10 mg/kg。口服溶媒为PEG400/2%维生素E TPGS。评估了药代动力学参数（生物利用度、Cmax、AUC、清除率、Vdss）[2]。 动物/疾病模型： 大鼠[2] 剂量： 2 mg/kg；10 mg/kg 给药途径： 2 mg/kg，静脉注射；10 mg/kg，口服；单次给药 实验结果： 编号 清除率 (L/h/kg) 最大血药浓度 (ng/mL) [肝脏] (ng/mL) 肝脏/血浆浓度 (%) TMC647055（化合物 18a） 3.2 440 7800 46 ＞66 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
体外代谢稳定性（大鼠和人肝微粒体）： 代谢稳定性表示为化合物在5 μM浓度下孵育15分钟后被代谢的百分比。对于TMC647055（化合物18a），在大鼠肝微粒体中的值为30%，在人肝微粒体中的值为35% [2]。
大鼠药代动力学： 静脉注射（2 mg/kg，溶媒：PEG400/生理盐水 70/30）后，TMC647055 的血浆清除率（Cl）为3.2 L/h/kg。口服给药（10 mg/kg，溶媒：PEG400/2% vitE-TPGS）后，Cmax为440 ng/mL，给药后7小时的肝脏浓度为7800 ng/mL，肝脏/血浆比率为46，口服生物利用度 >66% [2]。 犬药代动力学： 单次口服10 mg/kg（溶媒：PEG400/2% vitE-TPGS）后，TMC647055 表现出高口服生物利用度（F = 87%），Cmax为10.2 μM，AUC0-inf为25.8 μM·h，中等血浆清除率（Cl = 0.54 L/h/kg），以及低分布容积（Vdss = 0.32 L/kg）[2]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
细胞毒性： TMC647055 在一系列细胞系中无细胞毒性。在Huh7细胞中的平均CC50为42.1 μM，在MT4细胞中为28.9 μM。在MRC-5、HEK-293T、HepG2和VeroE6细胞中，CC50 > 50 μM [1]。相关类似物在Huh7细胞中的选择性指数（CC50/EC50）超过70至 >400 [2]。
体内代谢： 在大鼠中，TMC647055 的体内代谢不产生II相代谢产物，例如反应性酰基葡糖苷酸 [2]。 细胞色素P450抑制： 未检测到TMC647055 对细胞色素P450酶的主要抑制作用，表明其药物-药物相互作用的可能性较低 [2]。 遗传毒性和心血管效应： 在临床前实验中，TMC647055 在遗传毒性和心血管效应检测中显示出可接受的特征 [2]。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
作用机制（MOA）： TMC647055 是一种非核苷抑制剂，结合于HCV NS5B聚合酶的别构NNI-1位点（拇指口袋I）。据认为，这种结合会取代灵活的λ1环在其拇指结构域结合位点的位置，干扰手指和拇指结构域之间的相互作用，从而将酶锁定在开放的非活性构象，阻止RNA合成 [1]。
结合动力学： SPR研究揭示，TMC647055 对大多数基因型的高效力是由其极慢的解离速率（koff）驱动的，导致长的复合物半衰期（t1/2），尤其对基因型1b（130.5分钟）。对基因型2b活性降低的原因是其解离速率快9倍以上，复合物半衰期相应减少9倍以上 [1]。 临床状态： 在文献发表时，TMC647055 正在慢性丙型肝炎治疗的临床试验中进行评估。它已完成在健康志愿者和HCV感染患者中的I期研究，证明了其安全性、耐受性和抗病毒活性。随后，它进入了II期临床试验阶段 [1][2]。 |
| 分子式 |
C37H53N5O8S
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|---|---|
| 分子量 |
727.91
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| 精确质量 |
727.3614848
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| 相关CAS号 |
TMC647055;1204416-97-6
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
140 Ų
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| SMILES |
CN1CCOCCN(S(=O)(=O)NC(=O)C2=CC3=C(C=C2)C(=C4N3CC(=CC5=C4C=CC(=C5)OC)C1=O)C6CCCCC6)C.C[N+](C)(C)CCO.[OH-]
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| InChi Key |
PHHZAIOGANLKJD-UHFFFAOYSA-M
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| InChi Code |
InChI=1S/C32H38N4O6S.C5H14NO.H2O/c1-34-13-15-42-16-14-35(2)43(39,40)33-31(37)22-9-11-27-28(19-22)36-20-24(32(34)38)17-23-18-25(41-3)10-12-26(23)30(36)29(27)21-7-5-4-6-8-21;1-6(2,3)4-5-7;/h9-12,17-19,21H,4-8,13-16,20H2,1-3H3,(H,33,37);7H,4-5H2,1-3H3;1H2/q;+1;/p-1
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| 化学名 |
28-cyclohexyl-22-methoxy-10,16-dimethyl-9,9-dioxo-13-oxa-9lambda6-thia-1,8,10,16-tetrazapentacyclo[16.8.1.12,6.13,26.020,25]nonacosa-2,4,6(29),18,20(25),21,23,26(28)-octaene-7,17-dione;2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium;hydroxide
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| 别名 |
TMC647055 Choline salt; TMC-647055 (Choline salt); 28-cyclohexyl-22-methoxy-10,16-dimethyl-9,9-dioxo-13-oxa-9lambda6-thia-1,8,10,16-tetrazapentacyclo[16.8.1.12,6.13,26.020,25]nonacosa-2,4,6(29),18,20(25),21,23,26(28)-octaene-7,17-dione;2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium;hydroxide; TMC647055 Choline Hydroxide Salt; orb1306307;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~62.5 mg/mL (~85.86 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.3738 mL | 6.8690 mL | 13.7380 mL | |
| 5 mM | 0.2748 mL | 1.3738 mL | 2.7476 mL | |
| 10 mM | 0.1374 mL | 0.6869 mL | 1.3738 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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