| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase (allosteric inhibitor binding to the NNI-1 site, also known as the thumb pocket I) [1].
Biochemical IC50 against genotype 1b (Con1b) NS5B polymerase: 34 nM [1]. EC90: 0.3 μM (Huh7-Luc cell)[1]. EC50: 82 nM (HCV)[2] The primary target of TMC647055 Choline salt is the Hepatitis C virus (HCV) NS5B protein, an RNA-dependent RNA polymerase that is essential for viral RNA replication. As a non-nucleoside inhibitor, it binds to an allosteric site on the NS5B polymerase, distinct from the active catalytic site. This binding induces a conformational change in the enzyme, preventing it from synthesizing new viral RNA strands, thereby effectively stopping the HCV life cycle and treating the infection. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
抗复制子活性：在稳定含有复制子的细胞系中，TMC647055抑制HCV基因1b型复制，中位EC50为77 nM（荧光素酶检测）和139 nM（qRT-PCR检测）。针对基因1a型，中位EC50为166 nM（qRT-PCR检测）。在 40% 人血清存在下，针对基因型 1b 的 EC50 值增加至 740 nM（荧光素酶读数）[1]。
跨基因型活性（嵌合复制子）：在瞬时复制子试验中，使用来自患者分离株的 NS5B 序列的嵌合复制子，TMC647055 对基因型 1a、1b、3a、4a 和 6a 的 EC50 中值范围为 27 nM 至 113 nM。然而，与参考基因型 1b 相比，针对基因型 2a 和 2b 嵌合复制子的活性降低了 200 倍以上 [1]。 选择性和细胞毒性：TMC647055 对 HCV 表现出高选择性。在浓度高达 100 μM 时，未观察到该化合物对多种 DNA 和 RNA 病毒（巨细胞病毒、腺病毒、牛痘病毒、柯萨奇病毒、流感病毒、黄热病病毒）的抗病毒活性；在浓度高达 25 μM 时，也未观察到对登革病毒的抑制作用。该化合物对乙型肝炎病毒的 EC50 值为 86 μM。在 Huh7 细胞中，平均 CC50 值为 42.1 μM；在 MT4 细胞中，平均 CC50 值为 28.9 μM。在其他细胞系（MRC-5、HEK-293T、HepG2、VeroE6）中，CC50 值均大于 50 μM [1]。 耐药性谱（突变）：TMC647055 的活性因 NNI-1 结合口袋突变而显著降低。在瞬时复制子分析中，L392I、V494A 和 P495L 突变的 EC50 倍数变化分别为 9 倍、3 倍和 371 倍。活性不受与其他抑制剂类别（NNI-2、-3、-4、核苷类抑制剂、NS3/4A 蛋白酶抑制剂、NS5A 抑制剂）耐药相关的突变的影响[1]。 体外耐药性筛选：在 1b 基因型复制子细胞中，使用 TMC647055 进行的耐药性筛选实验经常筛选出 NS5B 残基 L392 (L392I) 和 P495 (P495S/T/L) 的突变。在基因型 1a 实验中，P495 (P495S/L)、Q309 (Q309R/K)、F574 (F574V/S/A) 和 C575 (C575F/S) 位点的突变最为常见 [1]。 克隆形成实验：在使用 Huh7-Luc 复制子细胞进行的克隆形成实验中，浓度为 1.5 μM 的 TMC647055 完全抑制了耐药复制子克隆的形成。浓度为 750 nM 时，需要与 NS3/4A 蛋白酶抑制剂 TMC435 (80 nM) 联合使用才能抑制克隆形成 [1]。 在 Huh7-Luc 细胞中，TMC647055（胆碱盐）表现出抗病毒活性，EC90 值为 0.3 μM [1]。在细胞 HCV 测试中，TMC647055 胆碱盐表现出强烈的联合作用，EC50 值为 82 nM[2]。 体外研究表明，TMC647055胆碱盐是一种高效的HCV复制抑制剂。它对HCV具有强大的联合抑制活性，在Huh7-Luc细胞中IC50值为82 nM，EC90值为0.3 uM。该化合物在针对多种人类DNA和RNA病毒的评估中表现出对HCV的高选择性，表明其对其他病毒的脱靶效应可能性较低。它是一种细胞渗透性化合物，能够有效到达感染肝细胞内的靶点。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
TMC647055 化合物 18a（胆碱盐）单次口服 10 mg/kg 剂量后，表现出令人满意的药代动力学特征，具有良好的口服生物利用度和全身暴露量、中等的血浆清除率和适中的分布容积[2]。
复制子清除和反弹试验：在为期 2 周的 Huh7-Luc 复制子细胞清除试验中，1.5 μM 和 3.75 μM 的 TMC647055 均能剂量依赖性地降低 HCV 复制子 RNA 水平，最大降低值分别为 3.1 log10 和 3.7 log10。然而，停药后 HCV RNA 水平反弹，表明单药治疗不足以完全清除病毒。相比之下，1.5 μM TMC647055 与 100 nM TMC435 的组合导致 HCV RNA 在清除期迅速下降到定量限以下，并在治疗停止后 3 周内防止反弹 [1]。 TMC647055 胆碱盐在丙型肝炎病毒 (HCV) 感染动物模型中已证实具有体内活性。虽然已发表的具体数据有限，但其作为口服治疗药物的开发表明，该药物吸收良好，且具有良好的全身暴露量。该化合物已与其他直接抗病毒药物 (DAA) 联合用于临床试验，以期获得较高的治愈率。胆碱盐制剂经过专门设计，旨在提高其体内生物利用度和药代动力学特性。 |
| 酶活实验 |
引物依赖性RNA聚合酶（RdRp）活性测定：采用引物依赖性转录活性测定法测定TMC647055的生化活性。将纯化的Con1b NS5BAC21聚合酶（20 nM）与抑制剂预孵育15分钟。加入含有5'-生物素标记的寡核苷酸（rG13）引物、poly(rC)模板、GTP和[3H]GTP的混合物启动反应。室温孵育2小时后，加入链霉亲和素包被的SPA磁珠终止反应。基因型 1b NS5B 聚合酶的 IC50 测定值为 34 nM [1]。
表面等离子共振 (SPR) 结合动力学：采用 SPR 技术测定了 TMC647055 与各种 NS5BAC21 聚合酶分离株之间的相互作用。将纯化的 His6 标签聚合酶固定在传感器芯片上。采用单循环动力学方法，每次注入 300 秒，共注入 5 种递增浓度的抑制剂，并监测解离情况 1200 秒。使用全局拟合分析数据。对于野生型 Con1b NS5B，中位 KD 值为 4.1 nM，kon 为 2.2E+04 1/Ms，koff 为 8.9E-05 1/s，复合物半衰期 (t1/2) 为 130.5 分钟。 P495L 突变体表现出显著降低的亲和力（KD = 6.5 μM），这是由于 koff 增加了 200 倍，kon 减少了 6 倍 [1]。 利用无细胞均相时间分辨荧光 (HTRF) 结合分析法可以研究 TMC647055 与 HCV NS5B 聚合酶的结合。标准实验方案包括将纯化的重组 HCV NS5B 聚合酶与一种荧光标记的示踪分子（该示踪分子与聚合酶的变构位点结合）进行孵育。向反应体系中加入浓度递增的 TMC647055，使示踪分子被置换。这种置换导致 HTRF 信号降低。化合物的半数抑制浓度 (IC50) 可根据置换曲线计算得出，其值通常在低纳摩尔 (nM) 范围内。该反应在针对聚合酶活性优化的缓冲液中进行。 |
| 细胞实验 |
稳定复制子荧光素酶报告基因检测：将含有1b型双顺反子亚基因组HCV复制子（克隆ET）的Huh7-Luc细胞接种，并用TMC647055系列稀释液孵育3天。通过测量萤火虫荧光素酶活性来确定HCV复制的抑制情况。EC50和EC90值由剂量反应曲线计算得出[1]。
稳定复制子qRT-PCR检测：将Huh7-Luc（1b型）、Huh7-SG-Con1b（1b型）和Huh7-SG-1a（1a型）复制子细胞与TMC647055孵育3天。采用定量实时PCR检测HCV复制子RNA水平，并以细胞参考mRNA（RPL13基因）进行标准化[1]。 突变体和嵌合体瞬时复制子检测：构建突变复制子（NS5B位点定向突变）或嵌合复制子（NS5B序列来自不同基因型）。将体外转录的RNA电穿孔导入Huh7-Lunet细胞。4天后，通过比较抑制剂处理组和未处理对照组的荧光素酶发光值来评估药物敏感性[1]。 细胞毒性检测：将不同浓度的TMC647055与多种细胞系（MRC-5、HEK-293T、HepG2、VeroE6）孵育3天。通过添加刃天青分析细胞毒性，并测量转化产物（试卤灵）的荧光强度。CC50 值根据剂量依赖性抑制曲线计算得出[1]。 基于荧光素酶的反向筛选：将表达 CMV 启动子控制的荧光素酶报告基因的 Huh7 细胞（Huh7-CMV-Luc）和表达 HIV-1 LTR 控制的荧光素酶报告基因的 MT4 T 淋巴细胞（MT4-LTR-Luc）与 TMC647055 孵育 3 天。通过测量荧光素酶发光强度确定细胞毒性[1]。 克隆形成实验：将 Huh7-Luc 复制子细胞接种，并在 G418 存在下，单独或与 TMC435 联合处理不同浓度的 TMC647055。每周更换两次培养基。 2-3周后，用中性红染色并计数剩余的细胞克隆[1]。 复制子清除和反弹试验（基于细胞）：在不添加G418的情况下，将Huh7-Luc复制子细胞用TMC647055单独处理或与TMC435联合处理2周。每周传代培养两次，收集细胞沉淀进行RNA提取和RT-PCR，以监测HCV复制子RNA水平。2周后，撤除抑制剂，并在添加G418的情况下继续培养细胞3周，以观察残留HCV RNA的潜在反弹[1]。 为了以高通量方式评估细胞活性，我们使用了HCV复制子系统。将含有亚基因组HCV复制子（一种不产生感染性病毒的自复制病毒RNA）的Huh7（人肝癌细胞）培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中。将细胞接种于96孔板中，并用不同浓度（例如0.1 nM至10 uM）的TMC647055胆碱盐处理48-72小时。处理后，裂解细胞，并使用实时定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）定量HCV RNA的水平。或者，可以将报告基因（例如荧光素酶）整合到复制子中，并在加入底物后直接读取信号。然后确定抑制RNA复制的半数有效浓度（EC50）。 |
| 动物实验 |
大鼠药代动力学研究：雄性大鼠分别静脉注射（2 mg/kg）和口服（10 mg/kg）TMC647055。静脉注射溶剂为PEG400/生理盐水（70/30），口服溶剂为PEG400/2%维生素E TPGS。测定血浆清除率、肝脏浓度（给药后7小时）、肝血比值和口服生物利用度[2]。犬药代动力学研究：犬单次口服10 mg/kg TMC647055。口服溶剂为PEG400/2%维生素E TPGS。评估所得药代动力学参数（生物利用度、Cmax、AUC、清除率、Vdss）[2]。
动物/疾病模型： 大鼠[2] 剂量： 2 mg/kg；10 mg/kg 给药途径： 2 mg/kg，静脉注射；10 mg/kg，口服；单次给药 实验结果： 编号 清除率 (L/h/kg) 最大血药浓度 (ng/mL) [肝脏] (ng/mL) 肝脏/血浆浓度 (%) TMC647055（化合物 18a） 3.2 440 7800 46 ＞66 体内研究通常在小鼠模型中进行，使用替代系统，例如HCV复制子小鼠模型，或使用人源化肝脏嵌合小鼠。对于药代动力学和初步疗效研究，将TMC647055胆碱盐配制成合适的溶剂（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80、45%生理盐水）。以特定剂量（例如，10-100 mg/kg）口服给药。在不同时间点采集血样，并通过LC-MS/MS测定血浆中化合物的浓度。为了评估抗病毒疗效，可在1-2周内多次给药（例如，每日两次），并测量血浆中病毒RNA水平的降低情况。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
体外代谢稳定性（大鼠和人肝微粒体）：代谢稳定性以浓度为 5 μM 时 15 分钟后化合物的代谢百分比表示。对于 TMC647055（化合物 18a），在大鼠肝微粒体中的代谢率为 30%，在人肝微粒体中的代谢率为 35% [2]。
大鼠药代动力学：静脉注射（2 mg/kg，溶剂：PEG400/生理盐水 70/30）后，TMC647055 的血浆清除率 (Cl) 为 3.2 L/h/kg。口服给药（10 mg/kg，赋形剂：PEG400/2% vitE-TPGS）后，Cmax 为 440 ng/mL，给药后 7 小时肝脏浓度为 7800 ng/mL，肝血浆比为 46，口服生物利用度 >66% [2]。 犬药代动力学：单次口服 10 mg/kg（赋形剂：PEG400/2% vitE-TPGS）后，TMC647055 显示出较高的口服生物利用度 (F = 87%)、Cmax 为 10.2 μM、AUC0-inf 为 25.8 μM·h、中等血浆清除率 (Cl = 0.54 L/h/kg) 和较低的分布容积 (Vdss = 0.32 L/kg) [2]。 胆碱盐制剂旨在增强母体化合物的药代动力学 (PK) 特性。TMC647055 胆碱盐的配方旨在提高吸收率，使其适用于口服给药。该化合物是一种非核苷类抑制剂，这意味着它不靶向活性位点，其药代动力学参数（Cmax、Tmax、AUC、半衰期）将在标准动物研究中测定。在体内，它用于丙型肝炎病毒 (HCV) 的研究，通常储存在 4°C 的干燥环境中，以确保其长期使用的稳定性 [35L4-L5]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
细胞毒性：TMC647055在多种细胞系中均未显示出细胞毒性。在Huh7细胞中，平均CC50为42.1 μM，在MT4细胞中为28.9 μM。在MRC-5、HEK-293T、HepG2和VeroE6细胞中，CC50均大于50 μM [1]。在Huh7细胞中，相关类似物的选择性指数（CC50/EC50）为70至400以上[2]。
体内代谢：在大鼠体内，TMC647055的体内代谢未产生二期代谢物，例如活性酰基葡糖醛酸苷[2]。 细胞色素P450抑制：未检测到TMC647055对细胞色素P450酶的显著抑制作用，表明其药物相互作用的可能性较低[2]。 遗传毒性和心血管效应：在临床前试验中，TMC647055在遗传毒性和心血管效应的检测中显示出可接受的指标[2]。 公开渠道提供的TMC647055胆碱盐的具体毒性数据仅限于其在临床前研究中的应用。作为一种强效抗病毒药物，其安全性对其临床应用至关重要。在研究中，毒性评估通常采用标准的啮齿动物口服给药试验。观察指标包括临床症状、体重变化以及主要器官（肝脏、肾脏、心脏）的组织病理学分析。TMC647055胆碱盐的开发旨在降低其母体化合物潜在的毒性问题，例如溶解度差或刺激性。与所有研究用化学品一样，应遵循标准安全操作规程。本品仅供研究使用，不得用于人体。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
作用机制 (MOA)：TMC647055 是一种非核苷类抑制剂，可与 HCV NS5B 聚合酶上的变构 NNI-1 位点（拇指口袋 I）结合。据推测，这种结合可将柔性 λ1 环从其拇指结构域结合位点上置换下来，扰乱手指结构域和拇指结构域之间的相互作用，从而将酶锁定在开放的、无活性的构象中，并阻止 RNA 合成 [1]。
结合动力学：SPR 研究表明，TMC647055 对大多数基因型具有高效力，这主要归因于其极慢的解离速率 (koff)，从而导致复合物半衰期 (t1/2) 较长，尤其是对基因型 1b 的半衰期长达 130.5 分钟。对 2b 基因型的活性降低归因于其解离速率加快 9 倍以上以及复合物半衰期缩短 9 倍以上 [1]。 临床状态：截至本文发表时，TMC647055 正在进行治疗慢性丙型肝炎的临床试验。该药物已完成在健康志愿者和丙型肝炎病毒感染患者中的 I 期研究，结果显示其安全性、耐受性和抗病毒活性。随后，该药物正在进行 II 期临床试验 [1][2]。 TMC647055 胆碱盐是一种强效且选择性的 HCV NS5B 聚合酶抑制剂，该酶是治疗丙型肝炎病毒 (HCV) 感染的有效靶点。它属于直接抗病毒药物 (DAA) 类，这类药物彻底改变了 HCV 的治疗。胆碱盐形式旨在提高化合物的溶解度和生物利用度。本产品仅供研究使用，不得用于人体临床。它是病毒学研究和丙型肝炎病毒研究的重要工具。为保持其化学完整性，应储存在 4°C 的干燥环境中 [35L4-L5]。 |
| 分子式 |
C37H53N5O8S
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|---|---|
| 分子量 |
727.91
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| 精确质量 |
727.3614848
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| 相关CAS号 |
TMC647055;1204416-97-6
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
140 Ų
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| SMILES |
CN1CCOCCN(S(=O)(=O)NC(=O)C2=CC3=C(C=C2)C(=C4N3CC(=CC5=C4C=CC(=C5)OC)C1=O)C6CCCCC6)C.C[N+](C)(C)CCO.[OH-]
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| InChi Key |
PHHZAIOGANLKJD-UHFFFAOYSA-M
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| InChi Code |
InChI=1S/C32H38N4O6S.C5H14NO.H2O/c1-34-13-15-42-16-14-35(2)43(39,40)33-31(37)22-9-11-27-28(19-22)36-20-24(32(34)38)17-23-18-25(41-3)10-12-26(23)30(36)29(27)21-7-5-4-6-8-21;1-6(2,3)4-5-7;/h9-12,17-19,21H,4-8,13-16,20H2,1-3H3,(H,33,37);7H,4-5H2,1-3H3;1H2/q;+1;/p-1
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| 化学名 |
28-cyclohexyl-22-methoxy-10,16-dimethyl-9,9-dioxo-13-oxa-9lambda6-thia-1,8,10,16-tetrazapentacyclo[16.8.1.12,6.13,26.020,25]nonacosa-2,4,6(29),18,20(25),21,23,26(28)-octaene-7,17-dione;2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium;hydroxide
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| 别名 |
TMC647055 Choline salt; TMC-647055 (Choline salt); 28-cyclohexyl-22-methoxy-10,16-dimethyl-9,9-dioxo-13-oxa-9lambda6-thia-1,8,10,16-tetrazapentacyclo[16.8.1.12,6.13,26.020,25]nonacosa-2,4,6(29),18,20(25),21,23,26(28)-octaene-7,17-dione;2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium;hydroxide; TMC647055 Choline Hydroxide Salt; orb1306307;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~62.5 mg/mL (~85.86 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.3738 mL | 6.8690 mL | 13.7380 mL | |
| 5 mM | 0.2748 mL | 1.3738 mL | 2.7476 mL | |
| 10 mM | 0.1374 mL | 0.6869 mL | 1.3738 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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