| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
GSK-3
Phospho-Glycogen Synthase Peptide-2 is a substrate for glycogen synthase kinase-3 (GSK-3) [28L6-L7][28L10-L11]. GSK-3 is a proline-directed serine-threonine kinase that plays a key role in multiple signaling pathways, including insulin signaling, Wnt signaling, and cell fate determination. The peptide does not target a traditional receptor; rather, it serves as a surrogate substrate for the enzyme. The phosphorylated serine residue in the peptide sequence is a recognition motif for GSK-3, which then phosphorylates a nearby serine or threonine residue in the substrate. This peptide can also be used for the affinity purification of other protein-serine kinases. In vitro, the peptide is a validated substrate for GSK-3, allowing the quantitative measurement of kinase activity in a cell-free system. The peptide is not known to have any intrinsic biological activity in cells unless delivered into the cytoplasm via a transfection reagent or a cell-penetrating peptide; it is used primarily as an in vitro tool in cell lysates. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在体外，磷酸糖原合成酶肽-2是GSK-3的特异性底物。当该肽与纯化的GSK-3和γ-32P-ATP孵育时，可以测量放射性磷酸盐掺入肽中的量，从而定量测定GSK-3的活性。该肽也可用于非放射性检测方法，例如ADP-Glo™检测或基于ELISA的检测，以测定GSK-3的活性。此外，该肽还可用于从细胞裂解液中亲和纯化蛋白丝氨酸激酶：将肽固定在固相载体（例如琼脂糖珠）上，并以此为诱饵，捕获能够识别并结合磷酸化底物序列的激酶。
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| 体内研究 (In Vivo) |
磷酸糖原合成酶肽-2不适用于体内研究，因为它是一种体外底物，未经额外修饰难以有效穿过细胞膜。目前尚无具体的体内数据。它仅用作无细胞和细胞裂解液检测中的生化工具，用于测定GSK-3活性。对于体内应用，其他方法（例如，通过Western blot检测内源性GSK-3底物的磷酸化水平）更为合适。
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| 酶活实验 |
本文描述了一种典型的 GSK-3 激酶活性测定方案。反应混合物（25-50 uL）包含：激酶缓冲液（20 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl2，5 mM DTT，0.1% BSA）、50 uM ATP（可添加或不添加 γ-32P-ATP，0.1-0.5 uCi/uL）以及浓度为 100-500 uM 的肽底物。加入 0.5-1 ug 重组人 GSK-3β（或 GSK-3α）启动反应。在 30℃ 孵育 15-30 分钟后，取少量反应液点样至 P81 磷酸纤维素滤纸上或加入 0.5% 磷酸终止反应。将滤纸用0.75%磷酸洗涤3次，用丙酮冲洗，然后在闪烁计数器中计数。对于非放射性测定，使用ADP-Glo™激酶测定试剂盒（Promega）：激酶反应后，剩余的ATP转化为光，并测量发光强度。生成的ADP量与激酶活性成正比。测定GSK-3抑制剂的IC50值时，在加入肽和ATP之前，先将化合物与酶预孵育10-15分钟。通过拟合抑制曲线计算IC50值。该肽也用于亲和纯化。将肽固定在合适的树脂上（例如，通过N端半胱氨酸或生物素-链霉亲和素）。预先清除细胞裂解液，然后与固定化的肽孵育。洗涤后，洗脱结合的激酶，并通过质谱法进行鉴定。
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| 细胞实验 |
由于该肽不具有细胞渗透性，因此通常不进行基于细胞的检测。然而，该肽可用于测定细胞裂解液中的 GSK-3 活性。细胞（例如 HEK293、HeLa）在 RIPA 缓冲液或含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的非变性裂解缓冲液中裂解。裂解液经离心澄清。测定蛋白质浓度（BCA 法）。将 10-50 ug 裂解液蛋白加入含有肽底物和 ATP 的反应混合物中（如上文体外检测所述）。混合物在 30℃ 下孵育 30-60 分钟。使用磷酸化特异性抗体以 ELISA 形式检测肽中磷酸化的掺入情况；或者，如果使用生物素标记的肽，则将反应混合物加入链霉亲和素包被的酶标板中，然后用磷酸化特异性抗体进行检测。这样就可以测量裂解液中内源性 GSK-3 的活性。或者，也可以使用 ADP-Glo™ 试剂盒检测裂解液中的 GSK-3 活性。GSK-3 活性可以根据总蛋白浓度进行标准化。
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| 动物实验 |
由于该肽不用于动物，因此目前尚无针对该肽的体内动物实验方案。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于该肽是一种体外工具，并未给动物服用，因此药代动力学不适用。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无该肽的毒性数据。作为激酶的底物，在所用浓度（反应混合物中通常为 100-500 μM）下，预计其在体外无毒性。应遵循标准的实验室安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
磷酸糖原合成酶肽-2（底物）TFA 是一种研究级肽，尚未获准用于临床。它是糖原合成酶激酶-3 (GSK-3) 的肽底物，可用于蛋白丝氨酸激酶的亲和纯化。该肽含有一个磷酸化的丝氨酸残基，使其成为 GSK-3 的底物。本产品仅供研究使用，不得用于人体治疗。请将冻干粉末储存于-20℃干燥避光处。
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| 分子式 |
C125H192F3N40O50P
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| 分子量 |
3143.07
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| 相关CAS号 |
Phospho-Glycogen Synthase Peptide-2(substrate);851366-97-7
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~100 mg/mL (~31.82 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 100 mg/mL (31.82 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.3182 mL | 1.5908 mL | 3.1816 mL | |
| 5 mM | 0.0636 mL | 0.3182 mL | 0.6363 mL | |
| 10 mM | 0.0318 mL | 0.1591 mL | 0.3182 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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