IRBP (1-20), human TFA

目录号: V76882 纯度: ≥98%
IRBP (1-20),人类 TFA 包含 H-2b 单倍型的主要表位。
IRBP (1-20), human TFA 产品类别: Peptides | 多肽
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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5mg
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产品描述
IRBP (1-20),人TFA含有H-2b单倍型的主要表位。IRBP (1-20),人TFA可诱导H-2b小鼠发生实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)。
IRBP (1-20),人TFA,是一种合成肽,对应于人视网膜间质视黄醇结合蛋白 (IRBP) 的前20个氨基酸。该肽可用作抗原,在动物模型中诱导实验性自身免疫性葡萄膜炎 (EAU),尤其适用于该表位具有致病性的物种。TFA盐可提高其溶解度。
生物活性&实验参考方法
靶点
IRBP (1-20) targets T-cell receptors on CD4+ T lymphocytes specific for this epitope presented by certain MHC class II molecules. In susceptible strains (e.g., HLA-DR3 transgenic mice), it induces an autoimmune response against retinal photoreceptors, leading to uveitis. The peptide is used to model human autoimmune uveoretinitis.
体外研究 (In Vitro)
在无细胞检测中,人IRBP(1-20)肽段可与MHC II类分子(例如HLA-DR3或IA分子)结合。结合亲和力可通过竞争性ELISA或SPR测定。解离常数(Kd)通常在低微摩尔范围内。该肽段不具有酶活性;其功能是在MHC呈递后被T细胞受体(TCR)识别。
体内研究 (In Vivo)
人源TFA在IRBP(1-20)中诱导EAU[2]。接种疫苗21天后,收集淋巴结和脾脏细胞,并用相应的抗原在体外激活这些细胞,以检测其增殖和细胞因子反应。该肽段可诱导人源TFA以及接种IRBP(1-20)的C57BL/6和129/J动物的细胞增殖[2]。
体外实验表明,该肽(0.1-10 uM)可刺激从免疫动物中分离的已激活T细胞增殖并诱导其产生IFN-γ/IL-17。利用针对人IRBP(1-20)的T细胞杂交瘤,可通过IL-2的产生(ELISA)来检测其激活情况。该肽具有高度特异性;乱序对照肽不诱导T细胞反应。TFA盐形式不影响其活性。
酶活实验
MHC结合通过无细胞ELISA进行评估。纯化的HLA-DR3(或IA)分子包被于酶标板上。加入浓度递增的IRBP(1-20)肽段以及一种与相同MHC结合的生物素标记参考肽段。洗涤后,用链霉亲和素-HRP检测结合的生物素标记肽段。计算使参考肽段结合降低50%的IRBP(1-20)浓度(IC50)。
细胞实验
从用人IRBP(1-20)佐剂免疫的小鼠中收集脾细胞或淋巴结细胞。将细胞接种于96孔板中,并加入肽段(0.01-10 uM)培养48-72小时。采用[3H]-胸苷掺入法检测细胞增殖。用ELISA法分析上清液中的细胞因子(IFN-γ、IL-17、IL-2)。采用流式细胞术检测CD4+ T细胞活化标志物(CD25、CD44)。阴性对照包括不添加肽段和无关肽段。
动物实验
动物/疾病模型: C57BL/6 (H-2b) 小鼠,H-2b (C57BL/6, 129/J) 小鼠[2]
剂量: 200、300 μg
给药途径: 脑内注射;21 天后
实验结果: 用人源肽(200-300 μg = 80-120 nmol)免疫的 C57BL/6 (H-2b) 小鼠出现实验性自身免疫性葡萄膜炎 (EAU)。129/J (H-2b) 小鼠也出现该疾病,但平均评分低于 C57BL/6 小鼠。
为诱导实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU),将易感小鼠(例如B10.RIII或HLA-DR3转基因小鼠)皮下注射100-200 μg IRBP(1-20)肽,该肽乳化于完全弗氏佐剂(CFA,含结核分枝杆菌)中。于第0天和第2天腹腔注射百日咳毒素(0.5-1 μg)。于第14-21天通过眼底镜检查和组织学检查监测小鼠的临床葡萄膜炎情况。该肽可诱导视网膜炎症和感光细胞损伤,与已充分表征的IRBP161-180肽所观察到的结果相似。
药代性质 (ADME/PK)
IRBP (1-20) 肽的分子量约为 2200 Da。它可溶于无菌水或 PBS(三氟乙酸盐有助于提高溶解度)。由于蛋白水解,其血浆半衰期较短(<1 小时);用于免疫接种时,需将其与完全弗氏佐剂 (CFA) 混合以形成储存库,从而延长抗原暴露时间。该肽在 -20℃ 下可稳定保存数年。它不适用于游离肽的药代动力学研究;其主要用途是作为免疫原。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
该肽在免疫剂量下无毒。尚未有全身毒性报告。局部注射部位反应(肿胀、肉芽肿)可能由完全弗氏佐剂(CFA)引起,而非肽本身。肽本身不会直接造成器官损伤;研究的效应是诱发自身免疫性葡萄膜炎。应遵循标准安全预防措施(戴手套、穿实验服)。本品不可用于人体。
参考文献

[1]. Residues 1-20 of IRBP and whole IRBP elicit different uveitogenic and immunological responses in interferon gamma deficient mice. Exp Eye Res. 2000;71(2):111‐118.

[2]. Avichezer D, Silver PB, Chan CC, Wiggert B, Caspi RR. Identification of a new epitope of human IRBP that induces autoimmune uveoretinitis in mice of the H-2b haplotype. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2000;41(1):127‐131.

其他信息
人源IRBP(1-20)在诱导实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)方面不如啮齿动物IRBP片段(例如IRBP161-180)常用,但它对于涉及人源化MHC转基因小鼠的研究具有重要价值。该肽段可用于模拟人源特异性T细胞反应。它仅供研究使用,尚未获准用于临床。冻干粉应储存于-20℃,避光防潮。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C103H165F3N24O30S
分子量
2308.62
相关CAS号
IRBP (1-20), human;298202-25-2
外观&性状
Solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO :~100 mg/mL (~43.32 mM)
H2O :~8.33 mg/mL (~3.61 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (1.08 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中,混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.4332 mL 2.1658 mL 4.3316 mL
5 mM 0.0866 mL 0.4332 mL 0.8663 mL
10 mM 0.0433 mL 0.2166 mL 0.4332 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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