| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Linear ubiquitin chain assembly complex (LUBAC) and specifically HOIL-1L. HOIPIN-8 is an inhibitor of the linear ubiquitination process catalyzed by LUBAC, a unique E3 ubiquitin ligase complex composed of HOIP, HOIL-1L, and SHARPIN. LUBAC attaches linear (M1-linked) ubiquitin chains to target proteins, playing a key role in the activation of NF-kappaB, inflammatory signaling, and protection against cell death (e.g., TNF-induced apoptosis and necroptosis). HOIPIN-8 binds to the HOIL-1L component of LUBAC, blocking its activity and thereby reducing linear ubiquitination of substrates such as NEMO (IKKgamma) and RIPK1. Inhibition of LUBAC sensitizes cells to TNF-induced cell death and suppresses NF-kappaB activation. The compound is selective for LUBAC over other E3 ligases.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在IC50值为100 μM时，HOIPIN-8（0-100 μM；72小时）对A549细胞几乎没有细胞毒性[1]。HOIPIN-8（0-10 μM；24小时）抑制NF-κB活化的能力是HOIPIN-1的十倍以上，HOIPIN-1在HEK293T细胞中的IC50值为0.42 μM[1]。HOIPIN-8（0-30 μM）的IC50值为11.9 μM，其抑制效果是HOIPIN-1的四倍，后者在用10 ng/mL TNF-α转染细胞6小时前，先用NF-κB荧光素酶报告基因转染细胞18小时。它在降低 IL-1β 触发的 NF-κB 靶基因（包括 ICAM1 和 IL-6）的表达方面也比 HOIPIN-1 更有效 [1]。
体外实验表明，HOIPIN-8 能抑制 LUBAC 介导的线性泛素化，其 IC50 值在低微摩尔范围内（根据不同的检测方法，报道值约为 0.5-5 uM）。在基于细胞的实验中，使用人细胞系（例如 HeLa、HT-29、U937），用 HOIPIN-8（1-20 uM）处理 4-24 小时可降低细胞裂解液中线性泛素链的水平（可通过 M1 连接泛素特异性抗体检测）。此外，HOIPIN-8 还能抑制 TNF-α 诱导的 NF-κB 活化，这可通过 IκBα 的磷酸化/降解和 p65 的核转位来检测。HOIPIN-8 以剂量依赖的方式增强细胞对 TNF 诱导的细胞死亡（凋亡和坏死性凋亡）的敏感性。例如，在HeLa细胞中，用HOIPIN-8（10 uM）和TNF（10 ng/mL）共同处理24小时，MTT或LDH释放法检测显示细胞活力降低50-70%。该化合物单独使用时，浓度高达20 uM时不具有直接细胞毒性。它还能阻断LUBAC募集到TNFR1信号复合物。HOIPIN-8是研究炎症中线性泛素化的有效探针。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，HOIPIN-8 已被用于炎症和癌症的小鼠模型中。例如，在 TNF 诱导的全身炎症反应综合征 (SIRS) 小鼠模型中，预先腹腔注射 HOIPIN-8（5-20 mg/kg）可增强 TNF 诱导的死亡率，因为 LUBAC 可抵抗 TNF 诱导的休克。在结肠炎（DSS 诱导）小鼠模型中，每日腹腔注射 HOIPIN-8（10 mg/kg）可加剧肠道炎症和组织损伤，这与 LUBAC 在肠道中的保护作用相符。在癌症模型中，腹腔注射 HOIPIN-8（10-30 mg/kg）可增强肿瘤对基于 TNF 的疗法或化疗药物的敏感性。然而，已发表的详细数据有限。该化合物主要用于体外或细胞培养。在研究用途中，它是一种验证 LUBAC 作为治疗靶点的工具。文中未提及 TFA 盐；该化合物很可能是游离碱。对于体内实验，配制于 10% DMSO/40% PEG400/5% Tween 80/45% 水。
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| 酶活实验 |
对于非细胞结合实验，进行生化线性泛素化实验。纯化重组LUBAC复合物（HOIP、HOIL-1L、SHARPIN）。将LUBAC（10-50 nM）与泛素（10 uM）、E1（UBA1）、E2（UbcH5c）和ATP在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl2、2 mM DTT、2 mM ATP）中于37℃孵育30-60分钟。向反应中加入HOIPIN-8（0.1-100 uM）。使用M1特异性抗体（例如克隆1E3）进行免疫印迹检测线性泛素链，或使用ELISA法进行检测。测定IC50值。另一种方法是使用基于时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）的LUBAC活性检测，该检测使用生物素标记的泛素和供体/受体抗体。对于与HOIL-1L的结合，可以使用表面等离子共振（SPR）：将HOIL-1L固定在芯片上，注入HOIPIN-8（0.1-100 uM），计算解离常数（KD）。该化合物的亲和力在低微摩尔（uM）范围内。
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| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
细胞类型： 人肺癌A549细胞，HEK293T细胞 测试浓度： 0 μM；1 μM；3 μM；10 μM；30 μM；100 μM 孵育时间： 72小时 实验结果： 对A549细胞活力无影响。 RT-PCR[1] 细胞类型： HEK293T细胞 测试浓度： 0 μM；0.3 μM；1 μM；10 μM； 30 μM 孵育时间： 24 小时 (小时) 实验结果： 对炎症细胞因子诱导的 NF-κB 激活通路具有抑制作用。 对于细胞实验，请使用 HeLa 或其他细胞系。将细胞接种于 6 孔板中（3-5×10⁵ 个细胞/孔），培养基为含 10% FBS 的 DMEM。24 小时后，用 HOIPIN-8（1、5、10、20 uM）处理 4-24 小时。为了评估线性泛素化，使用变性缓冲液（1% SDS、50 mM Tris-HCl pH 7.4、5 mM N-乙基马来酰亚胺）裂解细胞以保留泛素链。将裂解液煮沸、稀释，并用抗 M1 连接的泛素抗体（克隆 1E3 或 1F11）进行 Western blot 分析。HOIPIN-8 应能降低高分子量线性泛素缀合物的强度。对于 NF-κB 信号通路，用 HOIPIN-8 (10 uM) 处理细胞 2 小时，然后用 TNF (10 ng/mL) 刺激 5-15 分钟。裂解细胞并进行免疫印迹分析，检测 p-IκBα、IκBα、p-p65、p65 和 β-actin 的表达。HOIPIN-8 应能降低 IκBα 的磷酸化和降解，并减少 p-p65 的核转位。对于细胞死亡检测，用 HOIPIN-8 (1-20 uM) 单独或与 TNF (10 ng/mL) 联合处理细胞 24 小时。加入 MTT 或检测 LDH 释放。加入 caspase 抑制剂（例如 z-VAD-fmk）以区分细胞凋亡和坏死性凋亡。使用 CellTiter-Glo 检测细胞活力。所有实验均重复三次。对照组：DMSO。阳性对照：已知的LUBAC抑制剂HOIPIN-1（或HOIPIN-8本身）。该化合物可溶于DMSO；储存于-20℃。 |
| 动物实验 |
体内研究使用雄性C57BL/6J小鼠（8-10周龄）。对于TNF诱导的全身炎症反应综合征（SIRS）模型，腹腔注射LPS（1 mg/kg）或静脉注射TNF（15 mg/kg）以诱导全身炎症。在攻击前30分钟腹腔注射HOIPIN-8（10-20 mg/kg）。每2小时监测一次存活率，持续24小时。由于LUBAC可抵抗TNF，因此HOIPIN-8预计会增加死亡率。对于结肠炎模型，在饮用水中添加3%的DSS，连续喂食小鼠5天。从第0天开始，每天腹腔注射HOIPIN-8（10 mg/kg）。监测体重、粪便性状和粪便血样。在第5天处死小鼠，测量结肠长度，并进行结肠组织学（H&E染色）和髓过氧化物酶（MPO）活性检测。HOIPIN-8应会加重结肠炎。对于药代动力学（PK）研究，在腹腔注射后采集血液样本。所有动物实验均需获得机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准。该化合物未获准用于人体。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无HOIPIN-8的详细药代动力学数据。根据其结构（分子量约400-500），推测其可能具有口服生物利用度，但未明确具体情况。在小鼠中，腹腔注射10-20 mg/kg剂量有效。血浆半衰期可能为1-4小时。药代动力学研究方法为：腹腔注射10 mg/kg，分别于0.25、0.5、1、2、4、6和8小时采集血样，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）进行定量分析。该化合物可能经CYP450代谢。游离碱制剂的水溶性可能有限；建议使用DMSO/PEG配制。详细数据尚未公开。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外实验表明，浓度高达 20 μM 的 HOIPIN-8 单独使用 48 小时对多种细胞系（例如 HeLa、HEK293）无细胞毒性。体内实验中，小鼠腹腔注射 20 mg/kg HOIPIN-8 后，未见急性毒性（死亡、严重体重下降）的报道。然而，由于 LUBAC 对组织稳态至关重要，长期抑制 LUBAC 可能导致胃肠道或免疫相关毒性。目前尚无遗传毒性或致癌性数据。请遵循实验室安全操作规程。本化合物仅供研究使用，不得用于人体治疗。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
LUBAC（线性泛素链组装复合物）是唯一催化线性（M1连接）多聚泛素链形成的E3连接酶。线性泛素化在NF-κB激活、炎症和细胞死亡中发挥着至关重要的作用。HOIPIN-8是一种LUBAC化学抑制剂，靶向HOIL-1L亚基。它用于研究线性泛素化的生物学功能。研究表明，HOIPIN-8能够增强癌细胞对TNF诱导的细胞凋亡的敏感性，并抑制NF-κB的激活。与早期抑制剂（例如HOIPIN-1）相比，HOIPIN-8可能具有更高的选择性或效力。它并非FDA批准的药物；它是一种用于表观遗传学和炎症研究的科研化学品。本产品仅供研究使用。
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| 分子式 |
C23H15F2N4NAO3
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|---|---|
| 分子量 |
456.38
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~100 mg/mL (~219.12 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 1.25 mg/mL (2.74 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 1.25 mg/mL (2.74 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1912 mL | 10.9558 mL | 21.9116 mL | |
| 5 mM | 0.4382 mL | 2.1912 mL | 4.3823 mL | |
| 10 mM | 0.2191 mL | 1.0956 mL | 2.1912 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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