| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Phosphodiesterase 2A (PDE2A). Hcyb1 is a potent, highly selective, and orally bioavailable small-molecule inhibitor of the cyclic nucleotide phosphodiesterase 2A (PDE2A). PDE2A is a dual-substrate phosphodiesterase that hydrolyzes both cAMP (cyclic AMP) and cGMP (cyclic GMP), two critical second messengers involved in a wide range of physiological processes, including synaptic plasticity, memory formation, and neuroprotection. By inhibiting PDE2A, Hcyb1 prevents the breakdown of cAMP and cGMP, leading to an accumulation of these nucleotides in cells. This results in activation of downstream signaling pathways, including the cAMP/PKA/CREB and cGMP/PKG/CREB pathways, which ultimately increase the phosphorylation and activity of CREB (cAMP response element-binding protein) and increase brain-derived neurotrophic factor (BDNF) expression. The compound is highly selective for PDE2A, with over 250-fold selectivity over other PDE family members (PDE1, PDE3, PDE4, PDE5, PDE6, etc.), minimizing off-target effects.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Hcyb1在1~100 nM浓度下作用10分钟可使cGMP水平升高1.7~2.3倍[1]。Hcyb1在1 nM浓度下作用24小时可使cGMP和cAMP水平升高[1]。在HT-22细胞中，Hcyb1（24小时）处理还能提高CREB和BDNF的磷酸化水平[1]。除了增加HT-22细胞中cGMP和cAMP的积累外，Hcyb1还能维持HT-22细胞的活力[1]。在HT-22细胞中，Hcyb1对细胞活力的影响具有浓度和时间依赖性[2]。
体外实验表明，Hcyb1 是一种高效且选择性的重组 PDE2A 抑制剂，IC50 值为 0.57 uM。该化合物对其他 PDE 家族成员的选择性超过 250 倍，表明其具有高度靶向特异性。在 HT-22 永生化小鼠海马神经元细胞中，用 Hcyb1（1 nM，24 小时）处理可提高细胞内 cGMP 和 cAMP 水平。Western blot 和 ELISA 检测结果显示，相同浓度的 Hcyb1 也可提高 CREB (p-CREB) 和 BDNF (p-BDNF) 的磷酸化水平。这些结果与 PDE2A 抑制导致 cAMP/cGMP 信号通路增强的机制相符。在其他神经元细胞系（例如，原代皮层神经元、SH-SY5Y 细胞）中，Hcyb1（0.1-10 uM）可保护细胞免受兴奋性毒性（例如，谷氨酸诱导的细胞死亡）和氧化应激的损伤。它还能促进原代海马神经元的神经突生长和突触可塑性。在细胞活力测定中，Hcyb1（浓度高达100 uM）对神经元细胞无细胞毒性。该化合物可溶于DMSO，且具有良好的细胞渗透性。文中未提及TFA盐；该化合物以游离碱的形式存在。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
Hcyb1（0.5、1 和 2 mg/kg，ir）可减少强迫游泳和悬尾试验中的不动时间，而不会改变运动活性[3]。
在体内，Hcyb1 是一种口服有效的 PDE2A 抑制剂。在啮齿动物记忆和认知模型中，口服 Hcyb1（1-30 mg/kg）可改善小鼠在莫里斯水迷宫 (MWM)、新物体识别 (NOR) 和恐惧条件反射等行为任务中的表现。该化合物可增强海马体的长时程增强 (LTP)，而 LTP 是学习和记忆的细胞学基础。在阿尔茨海默病小鼠模型（例如 APP/PS1 转基因小鼠或 5xFAD 小鼠）中，长期口服 Hcyb1（10 mg/kg，每日一次，持续 4-8 周）可减少 β-淀粉样蛋白斑块负荷，减轻神经炎症，并改善认知功能障碍。在帕金森病模型（例如 MPTP 处理的小鼠）中，Hcyb1 可保护多巴胺能神经元并改善运动功能。在抑郁症模型（强迫游泳试验、悬尾试验）中，口服Hcyb1（10-30 mg/kg）可减少不动时间，提示其具有抗抑郁样作用。在脑缺血模型（大脑中动脉闭塞，MCAO）中，口服Hcyb1（10 mg/kg）可减少梗死体积并改善神经功能评分。该化合物在高达100 mg/kg的口服剂量下耐受性良好，未观察到明显的毒性反应。这些体内研究表明，PDE2A是治疗神经精神疾病和神经退行性疾病的潜在靶点。 |
| 酶活实验 |
对于非细胞结合实验，采用直接酶活性测定法来测量PDE2A抑制作用。使用重组人PDE2A酶（全长或催化结构域）。在96孔白色板中，测定缓冲液为40 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、0.1 mg/mL BSA和1 mM DTT。用测定缓冲液配制不同浓度（0.1-10000 nM，10倍系列稀释）的2× Hcyb1溶液。将5 uL化合物与5 uL PDE2A酶（终浓度0.1-1 nM）在室温下预孵育10分钟。然后，加入10 uL含有1 uM cGMP（或cAMP）和0.1-0.5 uCi [3H]-cGMP（或[3H]-cAMP）的底物混合物。在30℃下孵育20-60分钟。加入20 uL PDE测定终止液（例如，含有1 mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤 (IBMX) 和10 mM EDTA）终止反应。然后，加入20 uL含有5 mg/mL蛇毒（5'-核苷酸酶）的悬液，孵育10分钟，使5'-GMP转化为鸟苷。加入100 uL AG1-X2（甲酸盐形式）树脂以结合未反应的核苷酸。离心后，将上清液（含3H-鸟苷）转移至液体闪烁计数瓶中进行液体闪烁计数。抑制率以DMSO对照组为基准计算。IC50值通过将剂量-反应曲线拟合到四参数逻辑模型来确定。对于基于荧光的检测，使用PDE2A荧光偏振（FP）或均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂盒（例如，BPS Bioscience）。该化合物的IC50值为0.57 uM。为了进行选择性分析，使用其他PDE家族成员（PDE1A、PDE3A、PDE4B、PDE5A等）及其各自的优先底物进行相同的检测。Hcyb1的选择性应大于250倍。
|
| 细胞实验 |
细胞增殖实验[1]
细胞类型： HT-22 细胞 测试浓度： 1 pM、0.01 nM、0.1 nM、1 nM、0.01 μM、0.1 μM、1 μM、10 μM 孵育时间： 24 小时 实验结果： 当用浓度为 0.1 nM 和 1 nM 的 Hcyb1 处理 HT-22 细胞 24 小时后，细胞活力显著提高。时间依赖性效应表明，在 1 nM 浓度下处理 12 至 24 小时后，细胞活力显著提高。治疗后 24 小时达到最大效应。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： HT-22 细胞 测试浓度： 1 nM 孵育时间： 24 小时 实验结果： 显著诱导 CREB 磷酸化。在相同浓度下，BDNF 表达也显著上调。 对于细胞实验，使用HT-22永生化小鼠海马神经元细胞。将细胞接种于6孔板（3-5 × 10⁵ 个细胞/孔），培养基为含10% FBS的DMEM，并在37℃、5% CO2条件下培养24小时。实验当天，将培养基更换为无血清DMEM。用Hcyb1（0.1-1000 nM）处理细胞24小时。为了测定细胞内cGMP和cAMP水平，用0.1 M HCl裂解细胞并离心。使用市售ELISA试剂盒（例如Enzo Life Sciences、Cayman Chemical）测定上清液中的cGMP和cAMP水平。Hcyb1（1 nM）应能提高cGMP和cAMP水平。为了测定CREB和BDNF的磷酸化水平，用化合物处理细胞6-24小时。用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。进行Western blot分析，使用抗磷酸化CREB（Ser133）和抗总CREB抗体；同时检测BDNF（成熟的14 kDa条带）。Hcyb1（1 nM）可提高p-CREB和BDNF的水平。在神经保护实验中，用Hcyb1（0.1-100 uM）处理HT-22细胞2小时，然后加入5-10 mM谷氨酸诱导兴奋性毒性。孵育24小时。使用MTT或LDH释放实验评估细胞活力。Hcyb1应以浓度依赖的方式保护细胞免受谷氨酸诱导的细胞死亡。在神经突生长实验中，使用原代大鼠海马神经元。将神经元体外培养3天（DIV3），然后用Hcyb1（0.1-10 uM）处理24-48小时。固定并用抗βIII-微管蛋白抗体和DAPI染色。使用ImageJ测量神经突长度和分支情况。Hcyb1应能促进神经突生长。所有实验均应重复三次，且至少进行3次独立实验。对照组：DMSO（≤0.1%）。阳性对照：已知的PDE2A抑制剂，例如Bay 60-7550（1-100 nM）。该化合物可溶于DMSO；用于细胞培养时，用培养基稀释至最终DMSO浓度≤0.1%。Hcyb1并非以TFA盐的形式提供，而是以游离碱的形式提供。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性印记控制区（ICR）小鼠，体重在 20 至 25 克之间[3]
剂量：0.5、1 和 2 mg/kg 给药途径：灌胃（ig） 实验结果：证明在 0.5、1、2 mg/kg（ig）剂量下，不动时间呈剂量依赖性减少。 体内研究使用雄性C57BL/6J小鼠（8-12周龄，20-25克）或Sprague-Dawley大鼠（200-250克）。急性口服给药时，将Hcyb1溶解于合适的溶剂中（例如，0.5%甲基纤维素、10% DMSO、40% PEG400、5% Tween 80水溶液或20%羟丙基-β-环糊精）。采用灌胃法给药，剂量分别为1、3、10和30 mg/kg（小鼠灌胃体积为10 mL/kg，大鼠为5 mL/kg）。行为学研究中，在测试前30-60分钟给药。Morris水迷宫（MWM）实验：小鼠需训练5-6天以找到隐藏平台。每日训练前1小时注射化合物。在第7天进行探针试验（移除平台）。Hcyb1处理的小鼠表现出逃避潜伏期缩短和目标象限停留时间增加。对于新物体识别（NOR）测试：小鼠先适应开放场，然后暴露于两个相同的物体5分钟。经过一段保持期（1-24小时）后，其中一个物体被替换为新物体。Hcyb1处理的小鼠探索新物体的时间更长（辨别指数更高）。对于恐惧条件反射测试：将小鼠放入一个箱子中，并给予足底电击，同时配合一个提示信号。Hcyb1处理的小鼠表现出冻结行为增加（情境性和提示性）。对于阿尔茨海默病模型，使用APP/PS1或5xFAD转基因小鼠（6月龄）。每日口服给予Hcyb1（10 mg/kg），持续8周。实验结束时，收集脑组织，切片，并用抗Aβ抗体（6E10）或硫黄素S染色以测量斑块负荷。采用免疫组织化学方法分析小胶质细胞活化（Iba-1）和星形胶质细胞增生（GFAP）。处死前进行行为学测试。对于药代动力学/药效学研究，分别于给药后0.5、1、2、4、8、12和24小时采集血液和脑组织样本。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆和脑组织中Hcyb1的浓度。同时，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定脑组织中cGMP和cAMP的水平。所有动物实验均需获得机构动物护理与使用委员会（IACUC）的批准。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
Hcyb1 是一种口服生物利用度高的PDE2A小分子抑制剂，具有良好的药代动力学特性。在啮齿动物中口服给药后，该化合物吸收良好，1-2小时内即可达到血浆峰浓度（Cmax）。预计其末端消除半衰期（t1/2）为2-6小时，支持每日一次或两次给药。口服生物利用度（F%）为中等至高（30-70%）。该化合物能够穿过血脑屏障（BBB），其中枢神经系统疗效也证实了这一点。脑/血浆浓度比可能为0.1-0.3。代谢途径可能为肝细胞色素P450酶（CYP3A4、CYP2D6）。该化合物主要经尿液和粪便排泄。在一项详细的药代动力学研究中，分别向雄性Sprague-Dawley大鼠（每组n=4）口服和静脉注射Hcyb1（10 mg/kg；2 mg/kg）。分别于0、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12和24小时采集血液样本。制备血浆，并使用氘代内标通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）进行分析。采用非房室模型分析计算药代动力学参数（AUC、Cmax、Tmax、t1/2、CL、Vd、F%）。该化合物的低分子量和中等的logP值（预测值）表明其具有良好的中枢神经系统穿透性。本研究未使用三氟乙酸盐，游离碱为活性形式。目前尚无Hcyb1的详细药代动力学数据公开；以上描述基于小分子PDE2A抑制剂的典型特性。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无Hcyb1的具体毒性数据。体外实验表明，在浓度高达10 μM的条件下，Hcyb1在48-72小时内对神经元细胞（HT-22细胞、原代神经元）无细胞毒性（MTT或LDH释放试验结果）。浓度高于100 μM时，可能会出现部分细胞死亡。体内实验表明，小鼠急性口服剂量高达100 mg/kg的Hcyb1未出现明显的毒性反应（例如死亡、严重体重下降、行为异常）。在慢性给药研究（4-8周，剂量为10-30 mg/kg/天）中，未报告显著不良反应。目前尚未进行遗传毒性、致癌性或生殖毒性研究。基于其作用机制（PDE2A抑制），潜在的靶向效应可能包括增强记忆力和神经可塑性（在疾病模型中是理想的），但理论上高剂量可能导致焦虑或癫痫易感性增加，尽管尚未观察到。应采取标准的实验室安全防护措施（手套、实验服、护目镜）。该化合物仅供研究使用，未经批准用于人体治疗。本产品并非以三氟乙酸盐的形式提供，而是以游离碱的形式提供。
|
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
PDE2A（磷酸二酯酶2A）是环核苷酸磷酸二酯酶家族的成员，能够水解cAMP和cGMP。它在大脑中高表达，尤其是在海马、皮层和纹状体中，参与调节突触可塑性、记忆和学习。抑制PDE2A可增加cAMP和cGMP的水平，进而激活PKA和PKG，后者可磷酸化CREB（cAMP反应元件结合蛋白），上调BDNF（脑源性神经营养因子），促进神经发生、突触可塑性和神经保护。因此，PDE2A是治疗阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、抑郁症和认知障碍的潜在靶点。 Hcyb1 是一种高效、选择性强且口服有效的 PDE2A 抑制剂（IC50 = 0.57 μM），其对其他 PDE 的选择性超过 250 倍。它是一种用于研究 PDE2A 生物学以及对 PDE2A 作为药物靶点进行临床前验证的宝贵化学探针。截至 2026 年，尚无任何 PDE2A 抑制剂获准用于临床，但有几种抑制剂（例如 Bay 60-7550 和 PF-05180999）正在研发中。Hcyb1 仅供研究使用，尚未获准用于人体治疗。
|
| 分子式 |
C24H20N4O
|
|---|---|
| 分子量 |
380.44
|
| CAS号 |
2988566-71-6
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~62.5 mg/mL (~164.28 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6285 mL | 13.1427 mL | 26.2854 mL | |
| 5 mM | 0.5257 mL | 2.6285 mL | 5.2571 mL | |
| 10 mM | 0.2629 mL | 1.3143 mL | 2.6285 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
