| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Integrin[1].
Integrins (alphavbeta3, alphavbeta5, alpha5beta1, alphaIIbbeta3). GRGDSP is an RGD-containing peptide that binds to the ligand-binding pocket of integrin receptors, which are heterodimeric transmembrane proteins that mediate cell-ECM adhesion. Integrins recognize the RGD motif present in many ECM proteins, including fibronectin, vitronectin, fibrinogen, osteopontin, and tenascin. GRGDSP competes with these native proteins for integrin binding, thereby inhibiting integrin-dependent cell adhesion to the ECM. The inhibition is competitive, reversible, and specific for RGD-binding integrins. The peptide does not affect integrins that recognize other motifs (e.g., alpha4beta1 binding to VCAM-1 or alpha2beta1 binding to collagen). The control peptide GRGESP (where Asp is replaced by Glu) or GRADSP does not inhibit integrin binding and serves as a negative control. GRGDSP is not a drug but a widely used research reagent. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
经动脉输注GRGDSP（一种包含RGD肽的Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro整合素抑制剂）已被证实有效。作为一种合成的线性RGD肽，GRGDSP（Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro）能够阻止肿瘤细胞黏附于血管内皮细胞，并限制其扩散能力[1]。GRGDSP（Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro）是一种可溶性整合素阻断RGD肽，在整合素研究中，GRGDSP常与其他RGD肽联合使用。为了促进内皮化，GRGDSP可应用于心血管植入物（如血管移植物）的表面[2]。
体外实验表明，GRGDSP TFA（Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro）是一种强效且特异性的整合素介导的细胞黏附抑制剂。在50-500 uM的浓度下，GRGDSP可显著抑制多种细胞类型（例如成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、破骨细胞、血小板和癌细胞）与RGD依赖性细胞外基质蛋白（包括纤连蛋白、玻连蛋白和纤维蛋白原）的黏附。例如，在100-500 uM的浓度下，GRGDSP可使细胞在纤连蛋白包被表面的黏附减少50-90%（结晶紫染色法测定）。抑制细胞黏附于纤连蛋白的IC50值通常为50-200 uM。 GRGDSP还能抑制细胞在细胞外基质（ECM）上的铺展，这可通过鬼笔环肽染色F-肌动蛋白来评估，并且GRGDSP还能阻止黏着斑的形成（减少paxillin或vinculin染色）。在迁移实验中，GRGDSP（50-500 uM）以剂量依赖的方式抑制伤口愈合和Transwell迁移。在血小板聚集实验中，GRGDSP（0.1-1 mM）阻断纤维蛋白原与αIIbβ3整合素的结合，从而抑制血小板聚集和血栓形成。在血管生成实验中，GRGDSP抑制内皮细胞在Matrigel基质胶上的管状结构形成。GRGDSP还能抑制整合素介导的信号通路，包括FAK（Tyr397）磷酸化、Src激活以及下游PI3K/AKT和ERK1/2通路。该肽不抑制整合素与非RGD配体（例如层粘连蛋白、胶原蛋白）的结合。对照肽GRGESP无抑制活性。三氟乙酸盐不影响其活性。在骨形成研究中，GRGDSP（100-500 uM）可抑制胎鼠顶骨培养物的矿化作用。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
不适用（可溶性整合素抑制剂）。GRGDSP TFA 的主要用途是作为体外研究工具，阻断整合素功能。然而，该肽也可用于体内研究，在动物模型中局部或全身给药时，可用于研究整合素介导的过程。例如，在肝细胞癌大鼠模型中，经动脉输注 GRGDSP（负载于纳米颗粒中）可通过抑制整合素介导的肿瘤细胞黏附和血管生成，减少肿瘤生长和转移。在鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM) 实验中，GRGDSP (50-200 uM) 可抑制血管生成。在体内，由于肾脏清除和蛋白水解降解，可溶性 RGD 肽的血浆半衰期非常短（几分钟）；因此，它们通常与载体（例如，PEG、纳米颗粒）结合以维持作用。GRGDSP 目前尚无获批的体内治疗适应症；它仅是一种研究试剂。该肽也可在体外使用：在添加荧光标记的 ECM 蛋白之前，可将组织切片与 GRGDSP (100-500 uM) 孵育，以评估整合素结合。
|
| 酶活实验 |
为评估整合素结合抑制，固相竞争性黏附实验是标准方法。将96孔板用细胞外基质蛋白（例如，纤连蛋白（5-10 ug/mL）、玻连蛋白（2-5 ug/mL）或纤维蛋白原（10-20 ug/mL））包被，包被液为碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液（pH 9.6），4℃过夜。然后用1% BSA的PBS溶液封闭孔板，37℃孵育1小时。用胰蛋白酶-EDTA消化细胞（例如，HEK293、NIH3T3或血小板），用无血清培养基洗涤，并重悬于无血清培养基中。向细胞悬液中加入GRGDSP TFA（0-1000 uM），并在37℃预孵育15-30分钟。将细胞悬液（5 × 10⁴ 个细胞/孔）加入到包被有细胞外基质（ECM）的孔中，并在 37℃ 下孵育 30-60 分钟。用 PBS 轻轻洗涤去除未贴壁细胞。用 4% 多聚甲醛固定贴壁细胞，用 0.1% 结晶紫染色，洗涤后用 1% SDS 裂解。在 590 nm 处读取吸光度。抑制率以未处理细胞为基准计算。IC₅0 值由剂量反应曲线（四参数逻辑拟合）得出。对于直接结合实验，可以进行 ELISA：用纯化的整合素（例如 αvβ3 或 α5β1）包被孔板。封闭后，加入生物素标记的 GRGDSP（如有生物素-GRGDSP）+/- 未标记的 GRGDSP，用链霉亲和素-HRP 和 TMB 底物进行检测。对于表面等离子体共振 (SPR)：将整合素固定在 CM5 传感器芯片上，在 25°C 下，将 GRGDSP (0.1-1000 uM) 溶于运行缓冲液 (10 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM MnCl2, 0.005% P20) 中。记录传感器图，并确定 KD 和结合动力学。
|
| 细胞实验 |
对于细胞黏附实验（详见第5节），任何表达RGD结合整合素的贴壁细胞系均适用。细胞在标准培养基中培养。将96孔板用纤连蛋白（5-10 ug/mL）PBS溶液包被，4℃过夜，然后用1% BSA封闭（30分钟，37℃）。用胰蛋白酶消化细胞，洗涤后重悬于无血清培养基中。向细胞悬液中加入GRGDSP TFA（0-1000 uM，配制成100 mM的储备液，溶于水或PBS，-20℃保存），37℃预孵育15-30分钟。将细胞以5 × 10⁴个/孔的密度接种，37℃孵育30-60分钟。用PBS洗涤2-3次去除未黏附的细胞。贴壁细胞用4%多聚甲醛（PFA）固定10分钟，用结晶紫染色（0.1%，15分钟），洗涤后用1% SDS裂解。测量590 nm处的吸光度。细胞黏附率 = (OD590处理组 / OD590对照组) × 100。IC50值根据剂量反应曲线计算（通常为50-200 uM）。细胞铺展实验：细胞黏附（15-60分钟）后，固定细胞，用0.1% Triton X-100透化，用鬼笔环肽-FITC（F-肌动蛋白）和DAPI（细胞核）染色，并在荧光显微镜下观察。使用ImageJ软件定量细胞面积。细胞迁移实验：Transwell小室（孔径8 um）两侧包被纤连蛋白（10 ug/mL）。将预先用 GRGDSP（0-500 uM）处理的细胞（5 × 10⁴ 个细胞，溶于 100 uL 无血清培养基）加入上室。下室含有 10% FBS 作为趋化因子。6-24 小时后，去除上室表面的未迁移细胞，并将下室表面的迁移细胞用结晶紫染色并计数（每个插入物 5 个视野）。划痕愈合实验：将 6 孔板中的汇合细胞用移液器吸头划痕，洗涤后置于含有 1% FBS 和 GRGDSP（0-500 uM）的培养基中孵育。使用相差显微镜在 0、6、12 和 24 小时测量伤口愈合情况。信号传导实验：将细胞接种于纤连蛋白包被的培养皿中，在有或无 GRGDSP 的情况下培养 30-60 分钟使其贴壁。细胞裂解后，取细胞裂解液进行Western blot分析，检测p-FAK (Tyr397)、p-Src (Tyr416)、p-AKT (Ser473)、p-ERK (Thr202/Tyr204)或总蛋白水平。所有实验均应重复三次，且至少进行三次独立实验。血小板聚集实验：将人血小板富集血浆 (PRP) 与 GRGDSP (0-1 mM) 孵育5分钟，然后用 ADP (10 uM)、胶原蛋白 (2 ug/mL) 或凝血酶 (0.1 U/mL) 诱导聚集。采用光透射聚集法监测聚集情况。TFA 盐可溶于水和 PBS。注意：GRGDSP 在这些浓度下无细胞毒性。
|
| 动物实验 |
由于半衰期短，可溶性GRGDSP通常不用于体内研究，但可以与纳米颗粒偶联或局部给药。例如：肝细胞癌大鼠模型。通过肝内注射癌细胞（例如CBRH-7919），制备携带原位肝肿瘤的雄性Sprague-Dawley大鼠（200-250 g）。GRGDSP被配制成偶联物：例如，GRGDSP与聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PEG-PLGA）纳米颗粒（包裹阿霉素）偶联。GRGDSP偶联的纳米颗粒（剂量：0.5-2 mg肽当量/kg，溶于200 μL生理盐水）经肝动脉在5-10分钟内进行动脉内输注。对照组：游离 GRGDSP（相同剂量）、非靶向纳米颗粒（不含 GRGDSP）、GRGESP 偶联纳米颗粒或载体（生理盐水）。分别于第 0 天和第 7 天进行治疗。在基线和第 14 天，通过 MRI 或超声测量肿瘤大小。第 14 天，处死大鼠，切除肿瘤，称重，切片，并进行 H&E 和 CD31 染色（用于微血管密度检测）。采用 TUNEL 检测评估细胞凋亡。全身给药：小鼠静脉注射 GRGDSP（10-50 mg/kg，溶于 100-200 μL PBS）。在不同时间点采集血样，以测量血小板聚集抑制率（通过聚集测定法）并评估抗转移疗效（例如，在 B16-F10 黑色素瘤肺转移模型中）。然而，由于药物清除迅速，全身疗效受到限制。所有动物实验均需获得 IACUC 批准。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无GRGDSP TFA的详细药代动力学数据。GRGDSP是一种小分子线性六肽（分子量约700 g/mol），具有很高的水溶性，静脉给药后能迅速从血液循环中清除，由于肾小球滤过和血浆肽酶的蛋白水解作用，其血浆半衰期仅为几分钟（t1/2 < 5 min）。该肽不具有口服生物利用度。TFA盐不改变其药代动力学性质。在体内应用中，GRGDSP通常与载体（例如纳米颗粒、PEG或聚合物）偶联，以延长循环时间、增强肿瘤蓄积并提高疗效。偶联形式的半衰期为1-8小时，具体数值取决于载体的大小和PEG化程度。游离肽不用于治疗目的，其详细的药代动力学参数也未公开。GRGDSP仅供研究使用。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无GRGDSP TFA的具体毒性数据。GRGDSP是一种由天然L-氨基酸组成的短链合成肽，通常被认为毒性较低。体外实验表明，在浓度高达1 mM（48-72小时）的情况下，GRGDSP对细胞无细胞毒性，该结果通过MTT或LDH检测获得。体内实验表明，小鼠静脉注射50 mg/kg游离GRGDSP通常耐受性良好，文献报道未出现急性死亡或显著体重减轻。在高剂量（>100 mg/kg）下，由于血小板αIIbβ3整合素受到抑制，可能出现短暂性低血压和出血时间延长；然而，这些是药理作用，而非毒性。TFA盐的含量很低，呈化学计量比，被认为无毒。尚未进行遗传毒性、致癌性或生殖毒性研究。该肽仅供研究使用，不得用于人体或治疗用途。应采取标准的实验室安全防护措施（戴手套、穿实验服）。GRGDSP肽并非获批药物。
|
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
RGD（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）肽是细胞生物学研究中最常用的肽基序之一。它最初由Pierschbacher和Ruoslahti于1984年鉴定为纤连蛋白中的细胞黏附位点。GRGDSP（甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-脯氨酸）是一种合成的六肽，广泛用作整合素功能的可溶性抑制剂。它常被用作细胞黏附、迁移和整合素信号传导研究中的标准RGD肽。该肽也可用作表面涂层，以促进固定化细胞的黏附。对照肽GRGESP（甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-谷氨酸-丝氨酸-脯氨酸）或GRADSP（甘氨酸-精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丝氨酸-脯氨酸）用作阴性对照。三氟乙酸盐用于提高溶解度和稳定性。GRGDSP并非药物，也未获得任何医疗适应症的监管批准。它仅供研究使用。该肽通常以冻干粉末形式供应，储存于-20℃，使用时可用水或PBS缓冲液复溶。避免反复冻融。GRGDSP广泛用于癌症转移、血管生成、血栓形成、骨吸收和伤口愈合的研究。
|
| 分子式 |
C24H38F3N9O12
|
|---|---|
| 分子量 |
701.61
|
| 相关CAS号 |
GRGDSP;91037-75-1
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~125 mg/mL (~178.16 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 50 mg/mL (71.26 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4253 mL | 7.1265 mL | 14.2529 mL | |
| 5 mM | 0.2851 mL | 1.4253 mL | 2.8506 mL | |
| 10 mM | 0.1425 mL | 0.7126 mL | 1.4253 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
