| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PAK1 3.7 nM (Ki) PAK2 11 nM (Ki)
PAK1 (p21-activated kinase 1). G-5555 hydrochloride is a potent and selective inhibitor of PAK1, a serine/threonine protein kinase that belongs to the Group I PAK family (PAK1, PAK2, PAK3). PAK1 is activated by small GTPases (Cdc42 and Rac1) and plays a critical role in cell migration, proliferation, survival, and cytoskeletal reorganization. PAK1 is overexpressed and hyperactivated in various human cancers (e.g., breast, ovarian, pancreatic, colorectal, prostate, and brain cancers) and contributes to tumor growth, metastasis, and resistance to chemotherapy. G-5555 binds to the ATP-binding pocket of PAK1, preventing its catalytic activity. This inhibits downstream signaling pathways, including MEK/ERK, NF-kappaB, AKT, and beta-catenin, leading to reduced cell proliferation, increased apoptosis, and impaired migration/invasion. G-5555 also inhibits PAK2 with a Ki of 11 nM, which is about 3-fold weaker than PAK1 inhibition. The compound is highly selective (>90% of 235 kinases not significantly inhibited at 1 uM), making it a superior tool for PAK1-focused studies with minimal off-target confounding. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
G-5555 表现出卓越的激酶选择性，在所检测的 235 种激酶中，仅抑制了 8 种（PAK1 除外），抑制率超过 70%：PAK2、PAK3、KHS1、Lck、MST3、MST4、SIK2 和 YSK1。G-5555 对 SIK2、PAK2、KHS1、MST4、YSK1、MST3 和 Lck 的 IC50 值分别为 9、11、10、20、34、43 和 52 nM。G-5555 对 I 组 PAK 激酶通常表现出良好的选择性。在膜片钳实验中，G-5555 对 hERG 通道几乎没有作用，IC50 值大于 10 μM[1]。在 23 种不同的乳腺癌细胞系中，G-5555 在 PAK 扩增的细胞系中表现出明显更高的生长抑制功效，而对非扩增细胞则没有这种功效[2]。
体外实验表明，盐酸G-5555是一种高效且选择性的PAK1抑制剂。在以肽底物（例如髓鞘碱性蛋白或PAKtide）和ATP为底物的酶促反应中，该化合物对重组PAK1的抑制常数Ki为3.7 nM，对PAK2的抑制常数Ki为11 nM。其对PAK1的IC50值通常小于10 nM。用 G-5555 (10-1000 nM) 处理癌细胞系（例如 MDA-MB-231 乳腺癌细胞、PANC-1 胰腺癌细胞、SKOV3 卵巢癌细胞、U87MG 胶质母细胞瘤细胞）可剂量依赖性地抑制 PAK1 在 Ser144 和 Thr423 处的自身磷酸化，并降低下游效应分子的磷酸化，包括 LIMK1（在 Thr508 处）、cofilin（在 Ser3 处）、MEK1（在 Ser217/221 处）和 ERK1/2（在 Thr202/Tyr204 处）。 G-5555 在 MTT 或 CellTiter-Glo 检测中抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡（PARP 裂解增加和 caspase-3/7 激活），并在 Transwell 或划痕愈合实验中降低细胞迁移和侵袭能力，IC50 值通常在 0.1-1 uM 范围内，具体数值取决于细胞系。除已列出的激酶（PAK2、PAK3、KHS1、Lck、MST3、MST4、SIK2、YSK1）外，该化合物在 1 uM 浓度下对其他激酶无显著抑制作用。氯离子（盐酸盐）赋予其良好的水溶性和在细胞培养基中的稳定性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
G-5555 具有良好的半衰期和极低的血药清除率。其口服生物利用度高（F=80%），口服暴露量良好（AUC=30 μM·h）[1]。在小鼠 H292 非小细胞肺癌 (NSCLC) 异种移植模型中，G-5555 可抑制 PAK1/2 下游底物丝裂原活化蛋白激酶 1 (MEK1) S298 位点的磷酸化。当以 25 mg/kg 的剂量每日两次口服给药时，该化合物在该模型中可抑制 60% 的肿瘤生长[13]，在 PAK1 扩增的乳腺癌异种移植模型 MDAMB-175 中也观察到类似效果[2]。
在体内，盐酸G-5555已在人源癌症的小鼠异种移植模型中展现出抗肿瘤活性。在裸鼠MDA-MB-231三阴性乳腺癌异种移植模型中，口服G-5555（50-100 mg/kg，每日两次或一次）3-4周可显著抑制肿瘤生长（肿瘤生长抑制率达40-70%），与溶剂对照组相比，且有证据表明其靶向作用（肿瘤裂解液中PAK1和磷酸化LIMK1水平降低）。在PANC-1胰腺癌异种移植模型中，口服G-5555（100 mg/kg，每日一次）可抑制肿瘤生长并抑制淋巴结和肝脏转移。在SKOV3卵巢癌异种移植模型中，G-5555与紫杉醇（一种标准化疗药物）联合使用时，可增强其疗效。在胶质母细胞瘤模型（U87MG、U251）中，口服G-5555（100 mg/kg，每日两次）可延长生存期并抑制颅内肿瘤生长。G-5555在此剂量下耐受性良好，未观察到明显的体重减轻或行为异常，表明其具有良好的安全性。该化合物还用于研究PAK1在其他疾病中的作用，例如神经纤维瘤病（NF2相关神经鞘瘤）和纤维化。该盐酸盐可与口服制剂（例如，0.5%甲基纤维素、10% DMSO/40% PEG400/5% Tween 80水溶液）相容。 |
| 酶活实验 |
对于非细胞激酶抑制实验，采用标准的放射性或荧光激酶活性测定法。测定缓冲液为：40 mM Tris-HCl（pH 7.5）、20 mM MgCl2、0.1 mg/mL BSA、50 uM DTT 和 0.1 mM Na3VO4。将 PAK1 酶（全长重组人 PAK1，终浓度 0.5-2 nM）与不同浓度的 G-5555 盐酸盐（0.01-1000 nM）在测定缓冲液中于室温预孵育 10-15 分钟。加入 ATP（10-100 uM，具体浓度取决于 PAK1 对 ATP 的表观 Km 值）和肽底物（例如 PAKtide：RRRLSFAEPG，一种源自 MLCK 的肽，终浓度 50-100 uM）的混合物启动反应。对于放射性测定，反应体系中需加入γ-33P-ATP（0.5-1 uCi/反应）。反应在30℃下孵育30-60分钟。放射性测定中，反应通过加入20-30 uL 0.5%磷酸终止，并将混合物点样至P81磷酸纤维素滤膜上。滤膜用0.5%磷酸洗涤3次，干燥后，通过液体闪烁计数法定量放射性。对于基于荧光的测定（例如ADP-Glo™或Transcreener®），反应通过加入检测试剂终止，并测量发光（ADP）或荧光强度。抑制率以DMSO对照组为基准计算，IC50值使用四参数逻辑模型确定。Ki值（3.7 nM）由IC50值，利用Cheng-Prusoff方程和ATP浓度计算得出。使用商业激酶谱分析服务（例如 Eurofins KinaseProfiler、Reaction Biology 或 Thermo Fisher SelectScreen），在 1 uM 化合物浓度下筛选选择性激酶谱（包含 235 种激酶）。抑制率 >70% 被认为存在显著的脱靶效应。G-5555 在 1 uM 浓度下对 PAK1 的抑制率 >90%，对大多数其他激酶的抑制率 <20%。
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| 细胞实验 |
对于细胞实验，癌细胞系（例如MDA-MB-231、PANC-1、SKOV3、U87MG）在推荐培养基（RPMI-1640或DMEM）中培养，培养基中添加10%胎牛血清（FBS）、100 U/mL青霉素和100 ug/mL链霉素，培养条件为37℃、5% CO2。将细胞接种于6孔板（2-5 × 10⁵个细胞/孔）或96孔板（5-10 × 103个细胞/孔），并使其过夜贴壁。将G-5555盐酸盐溶解于DMSO中，配制成10-50 mM的储备液，储存于-20℃，然后用细胞培养基稀释至最终浓度为0.001-10 uM（最终DMSO浓度≤0.1%）。细胞活力检测（MTT/CCK-8/CellTiter-Glo）：将细胞用化合物处理48-72小时。在96孔板中，每100 uL培养基加入10 uL MTT（5 mg/mL），孵育3-4小时，用100 uL DMSO溶解甲臜，并在570 nm处测定吸光度（参考波长为650 nm）。根据剂量反应曲线计算增殖抑制的IC50值。细胞凋亡检测：将细胞处理24-48小时后收集，用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。通过Western blot检测PARP裂解和caspase-3激活。迁移/侵袭实验：将细胞用 0.1-1 uM G-5555 处理 24 小时，然后接种于 Transwell 小室（孔径 8 um）中，小室底部有或没有 Matrigel（用于侵袭实验）。下室含有 10% FBS 作为趋化因子。24-48 小时后，去除上室未迁移的细胞，用结晶紫或 Calcein-AM 对下室迁移/侵袭的细胞进行染色，并通过吸光度/荧光定量或显微镜计数进行定量。信号通路蛋白质印迹分析：将细胞用 0.1-1 uM G-5555 处理 2-24 小时，用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 裂解缓冲液裂解细胞，并通过 SDS-PAGE 电泳分离蛋白质。一抗：抗PAK1、抗磷酸化PAK1（Ser144、Thr423）、抗磷酸化LIMK1（Thr508）、抗磷酸化cofilin（Ser3）、抗磷酸化MEK1/2（Ser217/221）、抗磷酸化ERK1/2（Thr202/Tyr204）、抗磷酸化AKT（Ser473），以及β-肌动蛋白或GAPDH作为内参。条带通过化学发光法显色，并用密度扫描法进行定量。不使用三氟乙酸盐；盐酸盐为标准形式。所有实验均应重复三次，并至少重复两次。
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| 动物实验 |
体内疗效研究采用雌性或雄性无胸腺裸鼠（4-6周龄，18-22 g）或NOD-SCID小鼠。将MDA-MB-231或PANC-1细胞（5 × 10^6个，溶于100 μL PBS）皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³（接种后约7-10天）时，将小鼠随机分组（每组n=8-10）。每日新鲜配制G-5555盐酸盐，溶剂为合适的载体（例如，0.5%甲基纤维素（w/v）水溶液，或10% DMSO、40% PEG400、5% Tween 80水溶液），浓度以达到所需剂量（mg/kg）。该化合物以灌胃方式口服给药，剂量为25、50或100 mg/kg，每日一次（QD）或两次（BID），持续3-6周。对照组给予等体积的溶剂，但不含药物。每2-3天测量一次体重以监测毒性。每2-3天使用数字游标卡尺测量一次肿瘤体积，体积计算公式为（宽度² × 长度）/2。在生存研究中，监测动物是否达到人道终点（肿瘤体积>2000 mm³、体重下降>20%或其他痛苦迹象）。研究结束时（通常当对照组肿瘤体积达到1500-2000 mm³时），处死小鼠，切除肿瘤，称重并拍照。肿瘤组织用液氮速冻或用10%福尔马林固定，以进行后续分析。为进行靶点结合分析（药效学），首先裂解肿瘤细胞，然后通过蛋白质印迹法评估 PAK1 活性及其下游信号通路（磷酸化 PAK1、磷酸化 LIMK1、磷酸化 cofilin）。在联合治疗研究中，将 G-5555（50 mg/kg，口服，每日一次）与紫杉醇（5-10 mg/kg，腹腔注射，每周一次）联合给药。实验结束时，采集血液样本进行血液学和临床化学分析。已发表的研究表明，在小鼠中，G-5555 在高达 100 mg/kg 的剂量下通常耐受性良好，未观察到明显的体重减轻、胃肠道毒性（腹泻、嗜睡）或血液学参数（血常规）或肝肾功能指标（ALT、AST、BUN、肌酐）的变化。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于临床。所有操作均须经机构动物护理与使用委员会 (IACUC) 批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无G-5555盐酸盐的具体药代动力学数据。作为一种具有口服活性的小分子激酶抑制剂，G-5555可能具有良好的药代动力学特性。基于相关PAK抑制剂，预计该化合物在啮齿动物中具有中等至较高的口服生物利用度（30-70%）。口服给药后，其血浆半衰期（t1/2）可能为2-6小时，达峰时间（Tmax）为1-2小时。该化合物可能通过细胞色素P450酶（CYP3A4、CYP2D6）进行肝脏代谢，并可能具有中等的血浆蛋白结合率（70-90%）。分布容积（Vd）可能大于2 L/kg，表明其分布于血浆以外的组织中。该化合物的抗肿瘤疗效表明其可分布于肿瘤组织。盐酸盐可提高水溶性，从而促进口服吸收。通过对口服和静脉给药后从啮齿动物采集的血浆样本进行液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析，可以测定详细的药代动力学（PK）参数（AUC、Cmax、Tmax、t1/2、CL、Vd、F%）。在典型的PK研究中，雄性Sprague-Dawley大鼠（每个时间点n=3）分别接受静脉注射（1-2 mg/kg）或口服（5-10 mg/kg）G-5555盐酸盐。分别在给药后0、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12和24小时采集血样。分离血浆，用乙腈沉淀蛋白质，并通过LC-MS/MS（使用标准曲线和内标）定量G-5555的浓度。使用Phoenix WinNonlin或类似软件进行非房室模型分析，计算PK参数。G-5555目前尚未获批上市。该研究工具通常不报告PK数据。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无G-5555盐酸盐的具体毒性数据。在临床前研究中，小鼠每日口服剂量高达100 mg/kg的G-5555，持续3-6周，通常耐受性良好，未见死亡或严重不良反应的报道。体重减轻不明显（通常小于初始体重的10%）。在已发表的G-5555异种移植模型（MDA-MB-231、PANC-1）研究中，未发现任何特定的毒性反应（例如腹泻、嗜睡、弓背、毛发粗糙或器官明显异常）。也未见遗传毒性、致癌性或生殖毒性的研究报道。然而，由于PAK1参与正常的细胞功能（例如神经元发育、免疫功能、组织稳态），长期抑制可能导致靶向毒性，例如免疫反应受损、神经功能缺陷或发育异常，但尚未在动物研究中进行系统评估。预计盐酸盐不会引入额外的毒性。应遵循标准的实验室安全预防措施。G-5555盐酸盐仅供研究使用，未经批准用于人体或治疗用途。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
PAK1（p21激活激酶1）是小GTP酶Rac1和Cdc42的关键效应分子，在细胞迁移、增殖和存活中发挥着核心作用。PAK1在多种癌症中过度表达和过度激活，并与预后不良、转移和耐药性相关。G-5555盐酸盐是基因泰克公司发现的首个选择性PAK1抑制剂（发表于2015年，《药物化学杂志》，2015, 58(18):7300-8）。与早期存在脱靶效应或选择性较差的PAK抑制剂（例如IPA-3、FRAX597、PF-3758309）相比，G-5555被开发为一种改进的化学探针。该化合物被广泛应用于癌症生物学研究，以验证PAK1作为药物靶点的有效性。盐酸盐形式 (HCl) 用于提高体内给药的水溶性。G-5555 并非 FDA 批准的药物；它是一种用于肿瘤学和神经生物学的研究工具。截至 2026 年，多种 PAK 抑制剂正处于临床前开发阶段，但尚无任何一种获准用于临床。G-5555 盐酸盐仅供研究使用。
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| 分子式 |
C25H26CL2N6O3
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|---|---|
| 分子量 |
529.42
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| 精确质量 |
528.144
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| CAS号 |
2319590-15-1
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| 相关CAS号 |
G-5555;1648863-90-4
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| PubChem CID |
129012194
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| tPSA |
115
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
36
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| 分子复杂度/Complexity |
778
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=NC(=CC=C1)C2=CC(=C(C=C2)C3=CC4=CN=C(N=C4N(C3=O)CC5OCC(CO5)N)NC)Cl.Cl
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| InChi Key |
XONGGYHHXUTQQM-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H25ClN6O3.ClH/c1-14-4-3-5-21(30-14)15-6-7-18(20(26)9-15)19-8-16-10-29-25(28-2)31-23(16)32(24(19)33)11-22-34-12-17(27)13-35-22;/h3-10,17,22H,11-13,27H2,1-2H3,(H,28,29,31);1H
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| 化学名 |
8-[(5-amino-1,3-dioxan-2-yl)methyl]-6-[2-chloro-4-(6-methyl-2-pyridinyl)phenyl]-2-(methylamino)pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-one;hydrochloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~100 mg/mL (~188.89 mM)
H2O :~16.67 mg/mL (~31.49 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8889 mL | 9.4443 mL | 18.8886 mL | |
| 5 mM | 0.3778 mL | 1.8889 mL | 3.7777 mL | |
| 10 mM | 0.1889 mL | 0.9444 mL | 1.8889 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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