CY7-SE triethylamine (Sulfo-Cyanine7 Succinimidyl Ester triethylamine)

目录号: V77124 纯度: ≥98%
CY7-SE 三乙胺是一种 CY 染料。
CY7-SE triethylamine (Sulfo-Cyanine7 Succinimidyl Ester triethylamine) 产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
50mg
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Other Forms of CY7-SE triethylamine (Sulfo-Cyanine7 Succinimidyl Ester triethylamine):

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产品描述
CY7-SE三乙胺是一种CY染料。CY是花菁的缩写,花菁是一种由两个氮原子通过奇数个甲基单元连接而成的化合物。花菁化合物具有长波长、吸收和发射可调、消光系数高、水溶性好、合成相对简单等特点。CY染料常用于标记蛋白质、抗体和小分子化合物。对于蛋白质抗体的标记,可通过简单的混合反应完成结合。下面我们将介绍蛋白质抗体的标记方法,具有一定的参考意义。
CY7-SE三乙胺(磺基花菁7琥珀酰亚胺酯三乙胺)是一种水溶性近红外(NIR)荧光染料(激发/发射波长约为750/775 nm),含有胺反应性琥珀酰亚胺酯(SE)基团,并用三乙胺稳定。它是一种用于肽、蛋白质、抗体和寡核苷酸荧光标记的研究工具。
生物活性&实验参考方法
靶点
CY7-SE triethylamine does not bind to a biological target; it is a chemical labeling reagent. The succinimidyl ester (SE) group reacts specifically with primary amines (-NH2) on lysine residues or protein N-termini under mild conditions to form stable covalent amide bonds. The CY7 fluorophore provides NIR fluorescence for detection and imaging.
体外研究 (In Vitro)
方案一:蛋白质制备 1) 请将蛋白质(抗体)浓度配制至 2 mg/mL,以获得最佳标记效果。2) 蛋白质溶液的 pH 值为 8.5±0.5。如果 pH 值低于 8.0,则需加入 1 mg 碳酸氢钠 (1M) 调节 pH 值。3) 如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL,标记效率将显著降低。建议最终蛋白质浓度范围为 2–10 mg/mL,以获得最佳标记效率。4) 为确保最佳标记效果,蛋白质需要溶于不含铵离子和伯胺的缓冲液中,例如 Tris 或甘氨酸缓冲液。2. 染料制备(例如使用 CY3-NHS 酯) 要配制 10 mM 的储备液,请用无水 DMSO 填充 CY3-NHS 酯小瓶。使用移液器或涡旋振荡器充分混匀。3. 染料用量计算。待标记蛋白质的量决定了反应所需的 CY3-NHS 酯的量;CY3-NHS 的理想摩尔比约为 10。例如:假设 500 μL 2 mg/mL IgG(MW=150,000)是所需的标记蛋白,则将 1 mg CY3-NHS 酯溶解于 100 μL DMSO 中,即可得到所需的 5.05 μL CY3-NHS 酯。以下是精确的计算步骤:1) mg/mL(IgG) × mL(IgG)/MW(IgG) = 2 mg/mL × 0.5 mL/150,000 mg/mmol = 6.7×10-6 mmol 2) mol(CY3-NHS酯) = mol(IgG) × 10 = 6.7 × 10-6 mmol × 10 = 6.7 × 10-5 mmol 3) μL(CY3-NHS酯) = mmol(CY3-NHS酯) × MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯) = 6.7 × 10-5 mmol × 753.88 mg/mmol/0.01 mg/μL = 5.05 μL (CY3-NHS酯) 4. 开始偶联反应。1) 加入所需量的刚制备的CY3-NHS酯(10 mg/mL)。将 0.5 mL 蛋白质样品逐渐加入溶液中,轻轻摇晃使其混合均匀,然后快速离心,使物质聚集在反应管底部。为防止蛋白质样品变性或失活,请勿等量混合。2) 将反应管置于避光处,在室温下轻轻孵育 60 分钟。10 至 15 分钟后,轻轻反转反应。5. 纯化偶联物 下面提供了一个使用 SepHadex G-25 柱纯化染料-蛋白质偶联物的示例。首先,按照制造商的说明准备 SepHadex G-25 柱。2) 将反应混合物(来自“运行偶联反应”)加满 SepHadex G-25 柱。3) 当样品流过树脂表面时,立即加入 PBS(pH 7.2–7.4)。为完成所选样品的纯化,可再次加入 PBS(pH 7.2–7.4)。将含有相应染料-蛋白质缀合物的组分合并。
在体外,CY7-SE三乙胺可用作荧光标记剂。将其添加到含有目标蛋白或肽的溶液中,其中的SE基团与暴露的胺基反应。所得标记的生物分子可用于流式细胞术、荧光显微镜或免疫分析等检测方法,其中CY7标记可在近红外通道中进行检测,且生物样品产生的背景自发荧光极低。
体内研究 (In Vivo)
CY7-SE三乙胺不直接用于体内活性测定。它用于标记靶向配体(例如抗体、肽),然后将这些配体静脉注射到动物模型中。CY7荧光团提供近红外荧光,由于近红外波长下光散射和吸收减少,因此可以进行体内深层组织成像。这使得对生物分布和肿瘤蓄积进行非侵入性追踪成为可能。
酶活实验
在体外酶活性测定中,CY7-SE 三乙胺通常不用作底物或抑制剂,而是用于蛋白质标记反应。标记方案:将 100 ug 浓度为 1 mg/mL 的蛋白质(例如抗体)溶于 PBS 缓冲液(pH 7.2-7.4)中,并与 2-10 uL 浓度为 5-20 mM 的 CY7-SE 三乙胺 DMSO 溶液(DMSO 终浓度为 2-20%)混合。反应在室温下温和搅拌 60 分钟。未反应的染料可通过透析或尺寸排阻色谱法去除。标记度 (DOL) 通过分光光度法测定,分别在 750 nm 和 280 nm 波长处测量吸光度来确定。
细胞实验
在基于细胞的检测中,使用CY7标记的抗体或肽进行细胞摄取和结合研究。将细胞接种于8孔腔室载玻片或96孔板中,并培养过夜。将CY7标记的靶向探针加入培养基中,使其终浓度为1-10 ug/mL,并在37℃下孵育1-4小时。然后用PBS洗涤细胞以去除未结合的探针,用4%多聚甲醛固定(可选),并用Hoechst 33342进行细胞核复染。使用显微镜或酶标仪进行荧光成像,激发/发射波长为750/775 nm。为了评估非特异性结合,在平行孔中加入50倍过量的未标记抗体进行共孵育。
动物实验
在体内成像研究中,将CY7标记的抗体(例如,抗EGFR抗体偶联物)通过尾静脉注射给携带皮下肿瘤异种移植瘤的小鼠(6-8周龄,20-25克)。典型剂量为每只小鼠50-100微克标记抗体,溶于100-200微升PBS缓冲液(pH 7.4)中。使用近红外成像系统(激发波长745-755纳米,发射波长800纳米带通滤波器)在不同时间点(例如,注射后1、6、12、24、48、72小时)进行体内荧光成像。在实验终点,处死小鼠,并取出主要器官(肿瘤、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、心脏)进行离体荧光成像,以量化生物分布。荧光信号以辐射效率 [(p/s/cm2/sr)/(microW/cm2)] 或每克组织注射剂量的百分比表示。
药代性质 (ADME/PK)
CY7-SE 三乙胺的分子量为 881.11 Da(游离碱)。该化合物为固体,应在 -20℃ 下避光防潮保存。储备液(10-20 mM)用无水 DMSO 配制;配制好的溶液应在 -80℃ 下保存长达 6 个月,或在 -20℃ 下保存长达 1 个月。用于蛋白质标记时,该染料通常以 DMSO 溶液的形式使用。三乙胺盐形式用于在储存过程中稳定活性 NHS 酯。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
作为一种反应性标记试剂,CY7-SE 三乙胺应小心操作,避免皮肤接触和吸入粉尘。应遵循标准的实验室安全操作规程(例如,佩戴手套、实验服和护目镜)。本产品仅供研究使用,不得用于人体诊断或治疗。在典型的研究浓度下,尚未报告明显的毒性。
参考文献

[1]. Ptaszek M. Rational design of fluorophores for in vivo applications. Prog Mol Biol Transl Sci. 2013;113:59-108.

[2]. Shindy, H. A. (2017). Fundamentals in the chemistry of cyanine dyes: A review. Dyes and Pigments, 145, 505–513. doi:10.1016/j.dyepig.2017.06.029.

其他信息
CY7-SE 三乙胺是一种用于近红外成像的荧光染料。CY7 荧光团是一种七甲川吲哚菁类菁染料,由于含有磺酸基团,具有优异的水溶性。琥珀酰亚胺酯 (SE) 形式可通过酰胺键与伯胺共价偶联。三乙胺反离子用于在储存过程中稳定反应性 NHS 酯。常见应用包括流式细胞术、免疫荧光 (IF)、荧光原位杂交 (FISH)、蛋白质印迹和体内成像。该化合物也可作为游离酸或其他反应性形式(例如 NHS 酯、马来酰亚胺、叠氮化物)用于不同的标记策略。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C45H60N4O10S2
分子量
881.11
相关CAS号
CY7-SE;477908-53-5
外观&性状
Dark purple to dark blue solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: (1). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。  (2). 该产品在溶液状态不稳定,请现配现用。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO :~83.33 mg/mL (~94.57 mM)
H2O :~10 mg/mL (~11.35 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.1349 mL 5.6747 mL 11.3493 mL
5 mM 0.2270 mL 1.1349 mL 2.2699 mL
10 mM 0.1135 mL 0.5675 mL 1.1349 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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