| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
0.79 µM (ASH1L histone methyltransferase)[1]
AS-99 TFA targets ASH1L (also known as KMT2H), a histone methyltransferase responsible for catalyzing the methylation of histone H3 at lysine 36 (H3K36me2). This enzyme plays a crucial role in transcriptional activation and is involved in MLL-rearranged leukemia pathogenesis. AS-99 TFA exhibits >100-fold selectivity for ASH1L over 20 other histone methyltransferases, including NSD1, NSD2, NSD3, and SETD2. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
AS-99 TFA 的活性检测针对包括 NSD1、NSD2、NSD3 和 SETD2 在内的 20 种组蛋白甲基转移酶。在 50 µM 的 AS-99 TFA 浓度下，未观察到对任何检测的组蛋白甲基转移酶的明显抑制作用，表明其对 AS-99 TFA 的选择性超过 100 倍[1]。在 10 µM 及更高浓度下，AS-99 对不发生 MLL1 易位的白血病细胞（例如 SET2 和 K562 细胞）的生长几乎没有影响[1]。（1–8 µM；7 天）根据 Annexin V 阳性细胞的定量分析，TFA 可诱导 MLL 白血病细胞凋亡，但对 K562 细胞无此作用[1]。AS-99 TFA 可抑制 MLL 融合驱动的转录通路[1]。与用 DMSO 处理的细胞相比，AS-99 产生的 H3K36me2 峰较少[1]。
体外实验表明，AS-99 TFA 在 50 uM 浓度下对 20 种受试组蛋白甲基转移酶（包括 NSD1、NSD2、NSD3 和 SETD2）均无显著抑制作用，表明其对 ASH1L 的选择性超过 100 倍。AS-99 TFA 对 MLL 白血病细胞（MV4;11、MOLM13、KOPN8 和 RS4;11）的生长有影响，其 GI50 值为 1.8-3.6 uM。在 1-8 uM 浓度下处理 7 天，AS-99 TFA 可诱导 MLL 白血病细胞凋亡，但对 K562 细胞无此作用，Annexin V 染色证实了这一点。此外，AS-99 TFA 还能抑制 MLL 融合驱动的转录程序。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠中，AS-99 TFA（30 mg/kg；腹腔注射；每日一次，连续给药 14 天）可降低白血病负荷[1]。当通过静脉注射 (IV) 和腹腔注射 (IP) 给药于小鼠时，AS-99 TFA 在血浆中表现出良好的暴露量（AUC 分别为 9701 hr* ng/mL 和 10,699 hr* ng/mL），合理的半衰期（~5–6 小时），以及 Cmax >10 µM[1]。
在体内，AS-99 TFA（30 mg/kg；腹腔注射；每日一次，连续14天）可降低携带MV4;11 MLL白血病异种移植瘤小鼠的白血病负荷。该化合物在降低异种移植小鼠模型白血病负荷的同时，不影响正常小鼠的血细胞计数。该化合物具有良好的血浆暴露量和适宜的药代动力学特征，适用于小鼠体内疗效研究。 |
| 酶活实验 |
对于 AS-99 TFA，采用纯化的重组 ASH1L 酶进行生化甲基转移酶活性测定，以评估其对 ASH1L 的抑制作用。将不同浓度的化合物与酶及其底物（组蛋白 H3 肽）在 3H 标记的 S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 存在下孵育。通过测量 3H 掺入肽底物的量来定量甲基化活性，从而计算 IC50 (0.79 uM) 和 Kd (0.89 uM) 值。
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| 细胞实验 |
RT-PCR[1]
细胞类型： MOLM13 细胞 测试浓度： 2-6 µM 孵育时间： 7 天 实验结果： 导致白血病发生所需的经典 MLL 融合靶基因（包括 MEF2C、DLX2、FLT3 和 HOXA9）的剂量依赖性下调。 对于 AS-99 TFA，将 MLL 白血病细胞（MV4;11、MOLM13、KOPN8、RS4;11）和对照细胞（K562、SET2）进行培养，并用 AS-99（1-8 uM，处理 7 天）处理。采用 Annexin V/碘化丙啶双染法通过流式细胞术检测细胞凋亡。使用 CellTiter-Glo 细胞活力检测试剂盒评估细胞增殖。用 2-6 uM AS-99 处理 7 天后，通过 RT-PCR 检测 MLL 融合靶基因（MEF2C、DLX2、FLT3、HOXA9）的表达下调情况。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 8 至 10 周龄雌性 NSG 小鼠（携带 MV4;11 细胞）[1]
剂量： 30 mg/kg 给药途径： 腹腔注射；每日一次，治疗 14 天 实验结果： 在 MLL 白血病异种移植小鼠模型中降低了白血病负荷，且不影响正常小鼠的血细胞计数。 AS-99 TFA 的体内疗效评估在 8-10 周龄的携带 MV4;11 细胞异种移植瘤的雌性 NSG 小鼠中进行。AS-99 TFA（30 mg/kg）腹腔注射，每日一次，连续 14 天。通过分析外周血中的生物发光或人 CD45+ 细胞来测量白血病负荷。同时监测正常小鼠的血细胞计数以评估骨髓抑制情况。静脉注射和腹腔注射后，分别在不同的实验组中测量药代动力学参数。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
AS-99 TFA 在小鼠体内表现出良好的药代动力学特性，静脉注射后血浆暴露量 AUC 为 9701 hr*ng/mL，腹腔注射后 AUC 为 10,699 hr*ng/mL。其半衰期约为 5-6 小时，Cmax 大于 10 μM。这些参数支持在小鼠疗效研究中采用每日一次给药方案。体内给药制剂应根据其溶解度进行优化。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
AS-99 TFA 的详细毒理学数据在标准产品文件中并未得到充分报道。在小鼠疗效研究中，以 30 mg/kg 的剂量腹腔注射，连续给药 14 天，该化合物可降低正常小鼠的白血病负荷，且不影响其血细胞计数，表明其具有一定的选择性。治疗性药物开发需要进行标准的安全性药理学和遗传毒性研究。对于实验室研究，建议遵循组蛋白甲基转移酶抑制剂的标准化学安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AS-99 TFA 是由 Rogawski 等人发现并发表于《自然通讯》（2021）的首个 ASH1L 组蛋白甲基转移酶抑制剂。其游离碱（CAS 2323623-93-2）的分子量为 593.68。该化合物可抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡和分化，下调 MLL 融合靶基因（包括 MEF2C、DLX2、FLT3 和 HOXA9）的表达，并降低 MLL 重排白血病异种移植模型中的白血病负荷。该化合物对 ASH1L 的选择性比对其他 20 种组蛋白甲基转移酶的选择性高 100 倍以上，使其成为表观遗传学研究的宝贵化学探针。目前尚未获得临床批准。
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| 分子式 |
C29H31F6N5O5S2
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|---|---|
| 分子量 |
707.71
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| 相关CAS号 |
AS-99 free base;2323623-93-2;AS-99
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~100 mg/mL (~141.30 mM)
H2O :~12.5 mg/mL (~17.66 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.53 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4130 mL | 7.0650 mL | 14.1301 mL | |
| 5 mM | 0.2826 mL | 1.4130 mL | 2.8260 mL | |
| 10 mM | 0.1413 mL | 0.7065 mL | 1.4130 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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