Bile acid derivative

本研究旨在比较两种亲水性胆汁酸，牛磺酰脱氧胆酸（THDCA）和牛磺酰去氧胆酸（TUDCA）对HepG2细胞的影响。通过将细胞与浓度逐渐增加（50-800微摩尔/升）的胆汁酸一起孵育，在不同暴露时间评估细胞毒性，同时与脱氧胆酸（DCA）（350微摩尔/毫升和750微摩尔/摩尔）诱导的细胞毒性进行比较，测试其细胞保护作用。分析在每个潜伏期结束时收获的培养基，以评估天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶和γ-谷氨酰转肽酶的释放。此外，还测定了THDCA和TUDCA对人红细胞的溶血作用。在孵育24小时时，THDCA和TUDCA在高达200和400微摩尔/升的浓度下均无细胞毒性。在800微摩尔/升时，THDCP和TUDCA均诱导AST释放略有增加。在该浓度下，随着暴露时间延长至72小时，THDCA和TUDCA诱导的AST释放量显著增加（P<0.05），高于对照组，其中THDCA的AST值（48小时时为2.97+/-0.88时间对照值（tcv），72小时时为4.50+/-1.13 tcv）显著高于TUDCA（48小时为1.50+/-0.20 tcv，72小时为1.80+/-0.43 tcv，P<0.01）。在细胞保护实验中，添加50微摩尔/升THDCA仅略微降低了350微摩尔/毫升DCA诱导的AST释放（-5%），而添加50微毫升/升TUDCA则显著有效（-23%；P<0.05）。更高剂量的THDCA或TUDCA并没有降低350微摩尔/升DCA引起的毒性，但毒性远低于单独等摩尔剂量的DCA。在该实验模型中使用的浓度下，THDCA和TUDCA均不具有溶血性；然而，在非常高的浓度（6mmol/l）下，两种胆汁酸都会引起5-8%的溶血。我们得出结论，具有相似亲水性的胆汁酸分子可能表现出不同的细胞毒性和细胞保护特性[2]。

在胆瘘大鼠中评估了通过与牛磺脱氧胆酸（THDCA）共融合预防静脉注射牛磺脱氧脱氧胆酸（TCDCA）产生的肝毒性作用；还比较了后者与牛磺脱氧胆酸（TUDCA）的保肝作用。以8微摩尔/分钟/千克的剂量输注TCDCA的大鼠显示胆汁流量和钙分泌减少，碱性磷酸酶（AP）和乳酸脱氢酶（LDH）的胆汁释放增加。这与TCDCA的胆汁分泌率非常低（约1微摩尔/分钟/千克）有关。同时输注相同剂量的THDCA或TUDCA可以保持胆汁流动，几乎完全消除了这两种酶向胆汁中的病理泄漏。THDCA的效果略强。当TCDCA与两种保肝胆汁酸（BA）中的任何一种混合时，TCDCA的最大分泌率增加到最高值（8微摩尔/分钟/千克），这两种胆汁酸在胆汁中有效且完全分泌，没有代谢。与对照盐水输注相比，钙输出也恢复，磷脂（PL）分泌增加。THDCA研究中的这一增长更高。这些数据表明，THDCA通过促进其胆汁分泌和减少其肝脏停留时间，在预防静脉输注TCDCA引起的肝毒性方面非常有效；这与选择性刺激PL胆汁分泌有关[1]。

通过将细胞与含有终浓度为50至800μmol/l的THDCA或TUDCA或DCA的培养基孵育3、6、12、24、48和72小时，测试了牛磺酸脱氧胆酸/THDCA和TUDCA对HepG2细胞的细胞溶解作用。 为了评估THDCA和TUDCA的肝保护作用，将350μmol/l DCA与浓度逐渐增加的Taurohyodeoxycholic acid/牛磺酸脱氧胆酸/THDCA或TUDCA（50、100、200和400μmol/l）的混合物与HepG2细胞孵育24和48小时。将每个孵育时间的酶释放与单独DCA在350μmol/1和750μmol/l下诱导的酶释放进行比较。[2]

---

胆汁盐对人红细胞溶血特性的评估：在以5000 rpm离心静脉样本10分钟后，对从正常健康受试者获得的新鲜人红细胞评估不同胆汁盐的溶血特性。红细胞在磷酸盐缓冲盐水中洗涤三次，在Tris缓冲液（10 mmol Tris，130 mmol NaCl，10 mmol葡萄糖，pH 7.4）中重新悬浮至原始血容量，并在含有不同胆汁盐浓度增加的多孔微孔板中孵育（牛磺酸脱氧胆酸/THDCA、TUDCA、UDCA、CA CDCA、DCA，测试溶液的终浓度：25、50、100、200、400、800μmol/l，0.5、1、2、4和6 mmol/l）溶解在5 mmol/l Tris缓冲液（加0.15 mol/l NaCl，含100 mg/dl葡萄糖，pH 7.4，37°C）中。对于25至800μmol/l的浓度，暴露时间分别为50分钟、18小时和24小时，而对于大于800μmol/1的浓度，只使用了50分钟的孵育时间。在15℃下离心微孔板后，测定红细胞上清液中的总血红蛋白含量 000 以NH4Cl（100%溶血）诱导的百分比表示[2]。

[1]. Taurohyodeoxycholic acid protects against taurochenodeoxycholic acid-induced cholestasis in the rat. Hepatology. 1998 Feb;27(2):520-5.

[2]. Comparative cytotoxic and cytoprotective effects of taurohyodeoxycholic acid (THDCA) and tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) in HepG2 cell line. Biochim Biophys Acta. 2002 Jan 30;1580(1):31-9.

Taurohyodeoxycholic acid is a bile acid taurine conjugate. It is a conjugate acid of a taurohyodeoxycholate(1-).

---

In this study we have compared the cytotoxic and cytoprotective effects of two hydrophilic bile acids, TUDCA and THDCA/Taurohyodeoxycholic acid, using HepG2 cell cultures, a suitable model of human hepatocytes. Low concentrations of either bile acid resulted to be not cytotoxic, however as concentrations and time of exposure increase, a trend to increased enzyme release into the medium becomes evident, being greater with THDCA as compared to TUDCA. In mixing experiments using a fixed concentration of DCA and increasing that of either TUDCA or THDCA, the effects of the two bile acids appeared to differ to a greater extent, in that enzyme release induced by THDCA plus DCA was always greater than that caused by TUDCA plus DCA. The mixing experiments show that an equimolar dose of the hydrophobic bile acid DCA alone is by far more toxic than a mixture of THDCA or TUDCA plus DCA as shown in Fig. 2. The different behavior of THDCA as compared to TUDCA might be explained on the basis of its physical–chemical characteristics. Having a retention time very close to that of TUDCA on HPLC, Taurohyodeoxycholic acid/THDCA behaves as a hydrophilic bile acid; on the other hand its CMC is similar to that of the hydrophobic bile acids. Given that cytotoxicity of the bile acids has been related to their relative hydrophobicity the effect of THDCA on HepG2 cells reflects the balance between the hydrophilic and hydrophobic properties. Hydrophobic bile salts at concentrations lower than their CMC can induce alterations in membrane permeability of large unilamellar vesicles whereas for hydrophilic bile salts such an effect can be detected only at concentrations far higher than that reached in physiological conditions. The view is supported also by our data on bile acid-induced hemolysis, which show that at high concentrations even very hydrophilic bile acids may be damaging for membranes. Thus in the conditions of our study THDCA was not cytotoxic on HepG2 cells, at low concentrations, and showed, at higher concentrations, a moderate cytolytic effect that was not observed yet with the more hydrophilic TUDCA.[2]

C26H45NO6S

499.70

499.297

2958-04-5

38411-85-7

119046

White to off-white solid powder

1.216g/cm3

1.552

4.869

132.31

4

6

7

34

858

10

C[C@H](CCC(=O)NCCS(=O)(=O)O)[C@H]1CC[C@@H]2[C@@]1(CC[C@H]3[C@H]2C[C@@H]([C@H]4[C@@]3(CC[C@H](C4)O)C)O)C

HMXPOCDLAFAFNT-BHYUGXBJSA-N

InChI=1S/C26H45NO6S/c1-16(4-7-24(30)27-12-13-34(31,32)33)19-5-6-20-18-15-23(29)22-14-17(28)8-10-26(22,3)21(18)9-11-25(19,20)2/h16-23,28-29H,4-15H2,1-3H3,(H,27,30)(H,31,32,33)/t16-,17-,18+,19-,20+,21+,22+,23+,25-,26-/m1/s1

2-[[(4R)-4-[(3R,5R,6S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-3,6-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]ethanesulfonic acid

Taurohyodeoxycholic acid; 2958-04-5; Taurine Hyodeoxycholate; 2-[[(4R)-4-[(3R,5R,6S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-3,6-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]ethanesulfonic acid; D6V086EMME; CHEMBL270516; THDCA; TAUROHYODEOXYCHOLIC ACID SODIUM SALT;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO :~100 mg/mL (~200.12 mM)
H2O :~25 mg/mL (~50.03 mM; ultrasonic and warming and adjust pH to 12 with NaOH and heat to 60°C)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 25 mg/mL (50.03 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。