Bile acid derivative

本研究旨在比较两种亲水性胆汁酸，Taurohyodeoxycholic acid/牛磺酰脱氧胆酸（THDCA）和牛磺酰去氧胆酸（TUDCA）对HepG2细胞的影响。通过将细胞与浓度逐渐增加（50-800微摩尔/升）的胆汁酸一起孵育，在不同暴露时间评估细胞毒性，同时与脱氧胆酸（DCA）（350微摩尔/毫升和750微摩尔/摩尔）诱导的细胞毒性进行比较，测试其细胞保护作用。分析在每个潜伏期结束时收获的培养基，以评估天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶和γ-谷氨酰转肽酶的释放。此外，还测定了THDCA和TUDCA对人红细胞的溶血作用。在孵育24小时时，Taurohyodeoxycholic acid/THDCA和TUDCA在高达200和400微摩尔/升的浓度下均无细胞毒性。在800微摩尔/升时，THDCP和TUDCA均诱导AST释放略有增加。在该浓度下，随着暴露时间延长至72小时，THDCA和TUDCA诱导的AST释放量显著增加（P<0.05），高于对照组，其中THDCA的AST值（48小时时为2.97+/-0.88时间对照值（tcv），72小时时为4.50+/-1.13 tcv）显著高于TUDCA（48小时为1.50+/-0.20 tcv，72小时为1.80+/-0.43 tcv，P<0.01）。在细胞保护实验中，添加50微摩尔/升THDCA仅略微降低了350微摩尔/毫升DCA诱导的AST释放（-5%），而添加50微毫升/升TUDCA则显著有效（-23%；P<0.05）。更高剂量的THDCA或TUDCA并没有降低350微摩尔/升DCA引起的毒性，但毒性远低于单独等摩尔剂量的DCA。在该实验模型中使用的浓度下，THDCA和TUDCA均不具有溶血性；然而，在非常高的浓度（6mmol/l）下，两种胆汁酸都会引起5-8%的溶血。我们得出结论，具有相似亲水性的胆汁酸分子可能表现出不同的细胞毒性和细胞保护特性[2]。

在胆瘘大鼠中评估了通过与Taurohyodeoxycholic acid/牛磺脱氧胆酸（THDCA）共融合预防静脉注射牛磺脱氧脱氧胆酸（TCDCA）产生的肝毒性作用；还比较了后者与牛磺脱氧胆酸（TUDCA）的保肝作用。以8微摩尔/分钟/千克的剂量输注TCDCA的大鼠显示胆汁流量和钙分泌减少，碱性磷酸酶（AP）和乳酸脱氢酶（LDH）的胆汁释放增加。这与TCDCA的胆汁分泌率非常低（约1微摩尔/分钟/千克）有关。同时输注相同剂量的THDCA或TUDCA可以保持胆汁流动，几乎完全消除了这两种酶向胆汁中的病理泄漏。THDCA的效果略强。当TCDCA与两种保肝胆汁酸（BA）中的任何一种混合时，TCDCA的最大分泌率增加到最高值（8微摩尔/分钟/千克），这两种胆汁酸在胆汁中有效且完全分泌，没有代谢。与对照盐水输注相比，钙输出也恢复，磷脂（PL）分泌增加。THDCA研究中的这一增长更高。这些数据表明，THDCA通过促进其胆汁分泌和减少其肝脏停留时间，在预防静脉输注TCDCA引起的肝毒性方面非常有效；这与选择性刺激PL胆汁分泌有关[1]。

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牛磺酰脱氧胆酸/Taurohyodeoxycholic acid/THDCA是一种天然的6α羟基化胆汁酸，其亲水性介于牛磺酰去氧胆酸和牛磺胆酸之间。我们在大鼠中研究了牛磺脱氧胆酸与这两种胆汁盐的肝胆代谢、胆汁分泌特性和胆汁最大分泌率（SRmax）。在胆盐耗竭的胆瘘大鼠中，以从100到300nmol/min/100g体重的逐步增加的速率静脉注射每种化合物。三种胆汁盐从输注开始迅速出现，并增加到占总胆汁盐的95%以上。未形成明显的胆汁代谢产物。所有胆汁盐均导致胆汁流量和胆汁脂质输出呈剂量依赖性增加。输注牛磺酰脱氧胆酸的大鼠胆汁流量的绝对增加较低，但牛磺酰去氧胆酸每纳摩尔分泌胆汁盐形成的胆汁体积为13.8 nl，牛磺钠脱氧胆酸为6.4 nl，牛胆酸为10.9 nl。SRmax值分别为1080、3240和960 nmol/min/100 g。在所有输注速率下，与其他胆汁盐相比，牛磺酰脱氧胆酸引起的胆汁卵磷脂分泌量更大（P<0.001）。胆固醇和蛋白质的胆汁分泌没有显著差异。电子显微镜显示胆管周围和内部有囊泡和板层体的募集。总之，牛磺脱氧胆酸促进胆汁卵磷脂分泌的程度高于物理化学预测的预期，这代表了一种具有潜在药理学相关性的新型分泌特性[4]。

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牛磺猪去氧胆酸在体外可降低人胆囊的大小和大小。牛磺猪去氧胆酸可增强胆汁流量、胆汁 PDF 快乐和胆汁脂质死亡。牛磺佛脱氧胆酸和牛磺鹅脱氧胆酸的组合可降低牛磺佛脱氧胆酸引起的肝毒性，并增加大鼠的胆汁流量、胆汁酸和磷脂行走。

通过将细胞与含有终浓度为50至800μmol/l的THDCA或TUDCA或DCA的培养基孵育3、6、12、24、48和72小时，测试了牛磺酸脱氧胆酸/THDCA和TUDCA对HepG2细胞的细胞溶解作用。 为了评估THDCA和TUDCA的肝保护作用，将350μmol/l DCA与浓度逐渐增加的Taurohyodeoxycholic acid/牛磺酸脱氧胆酸/THDCA或TUDCA（50、100、200和400μmol/l）的混合物与HepG2细胞孵育24和48小时。将每个孵育时间的酶释放与单独DCA在350μmol/1和750μmol/l下诱导的酶释放进行比较。[2]

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胆汁盐对人红细胞溶血特性的评估：在以5000 rpm离心静脉样本10分钟后，对从正常健康受试者获得的新鲜人红细胞评估不同胆汁盐的溶血特性。红细胞在磷酸盐缓冲盐水中洗涤三次，在Tris缓冲液（10 mmol Tris，130 mmol NaCl，10 mmol葡萄糖，pH 7.4）中重新悬浮至原始血容量，并在含有不同胆汁盐浓度增加的多孔微孔板中孵育（牛磺酸脱氧胆酸/THDCA、TUDCA、UDCA、CA CDCA、DCA，测试溶液的终浓度：25、50、100、200、400、800μmol/l，0.5、1、2、4和6 mmol/l）溶解在5 mmol/l Tris缓冲液（加0.15 mol/l NaCl，含100 mg/dl葡萄糖，pH 7.4，37°C）中。对于25至800μmol/l的浓度，暴露时间分别为50分钟、18小时和24小时，而对于大于800μmol/1的浓度，只使用了50分钟的孵育时间。在15℃下离心微孔板后，测定红细胞上清液中的总血红蛋白含量 000 以NH4Cl（100%溶血）诱导的百分比表示[2]。

[1]. Taurohyodeoxycholic acid protects against taurochenodeoxycholic acid-induced cholestasis in the rat. Hepatology. 1998 Feb;27(2):520-5.

[2]. Comparative cytotoxic and cytoprotective effects of taurohyodeoxycholic acid (THDCA) and tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) in HepG2 cell line. Biochim Biophys Acta. 2002 Jan 30;1580(1):31-9.

[3]. Dissolution of human cholesterol gallstones in bile salt/lecithin mixtures: effect of bile salt hydrophobicity and various pHs. Scand J Gastroenterol. 1995 Dec;30(12):1178-85.

[4]. Effect of taurohyodeoxycholic acid, a hydrophilic bile salt, on bile salt and biliary lipid secretion in the rat. Dig Dis Sci. 1994 Nov;39(11):2389-97.

In this study we have compared the cytotoxic and cytoprotective effects of two hydrophilic bile acids, TUDCA and THDCA/Taurohyodeoxycholic acid, using HepG2 cell cultures, a suitable model of human hepatocytes. Low concentrations of either bile acid resulted to be not cytotoxic, however as concentrations and time of exposure increase, a trend to increased enzyme release into the medium becomes evident, being greater with THDCA as compared to TUDCA. In mixing experiments using a fixed concentration of DCA and increasing that of either TUDCA or THDCA, the effects of the two bile acids appeared to differ to a greater extent, in that enzyme release induced by THDCA plus DCA was always greater than that caused by TUDCA plus DCA. The mixing experiments show that an equimolar dose of the hydrophobic bile acid DCA alone is by far more toxic than a mixture of THDCA or TUDCA plus DCA as shown in Fig. 2. The different behavior of THDCA as compared to TUDCA might be explained on the basis of its physical–chemical characteristics. Having a retention time very close to that of TUDCA on HPLC, Taurohyodeoxycholic acid/THDCA behaves as a hydrophilic bile acid; on the other hand its CMC is similar to that of the hydrophobic bile acids. Given that cytotoxicity of the bile acids has been related to their relative hydrophobicity the effect of THDCA on HepG2 cells reflects the balance between the hydrophilic and hydrophobic properties. Hydrophobic bile salts at concentrations lower than their CMC can induce alterations in membrane permeability of large unilamellar vesicles whereas for hydrophilic bile salts such an effect can be detected only at concentrations far higher than that reached in physiological conditions. The view is supported also by our data on bile acid-induced hemolysis, which show that at high concentrations even very hydrophilic bile acids may be damaging for membranes. Thus in the conditions of our study THDCA was not cytotoxic on HepG2 cells, at low concentrations, and showed, at higher concentrations, a moderate cytolytic effect that was not observed yet with the more hydrophilic TUDCA.[2]

C26H44NO6S-.NA+

521.68546

521.278

38411-85-7

2958-04-5

90478527

White to off-white solid powder

135

3

6

7

35

864

10

C[C@H](CCC(=O)NCCS(=O)(=O)[O-])[C@H]1CC[C@@H]2[C@@]1(CC[C@H]3[C@H]2C[C@@H]([C@H]4[C@@]3(CC[C@H](C4)O)C)O)C.[Na+]

VNQXUJQHLHHTRC-WMWRQJSFSA-M

InChI=1S/C26H45NO6S.Na/c1-16(4-7-24(30)27-12-13-34(31,32)33)19-5-6-20-18-15-23(29)22-14-17(28)8-10-26(22,3)21(18)9-11-25(19,20)2;/h16-23,28-29H,4-15H2,1-3H3,(H,27,30)(H,31,32,33);/q;+1/p-1/t16-,17-,18+,19-,20+,21+,22+,23+,25-,26-;/m1./s1

sodium;2-[[(4R)-4-[(3R,5R,6S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-3,6-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]ethanesulfonate

Sodium taurohyodeoxycholate; 38411-85-7; Taurohyodeoxycholic acid sodium salt hydrate; TAUROHYODEOXYCHOLIC ACID SODIUM SALT; UNII-4N9535CHEK; 4N9535CHEK; Taurohyodeoxycholic acid (sodium); Ethanesulfonic acid, 2-(((3alpha,5beta,6alpha)-3,6-dihydroxy-24-oxocholan-24-yl)amino)-, monosodium salt;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~62.5 mg/mL (~119.80 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。