| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ASCT2 (alanine-serine-cysteine transporter 2, encoded by SLC1A5) - primary transporter of glutamine in cancer cells. IC50 for glutamine uptake inhibition = 9.6 μM. [1]
SNAT2 (sodium-neutral amino acid transporter 2) - potential off-target. [2][3] LAT1 (large neutral amino acid transporter 1) - potential off-target. [2][3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
V-9302 盐酸盐的有效性是 γ-L-谷氨酰-对硝基苯胺的 100 倍，并以浓度依赖性方式抑制人体细胞中 ASCT2 介导的谷氨酰胺吸收 [1]。使用 V-9302 盐酸盐从药理上阻断 ASCT2 会导致氧化应激增强、癌细胞生长和增殖减少以及细胞死亡增加 [1]。
- V-9302以浓度依赖性方式抑制HEK-293细胞中ASCT2介导的谷氨酰胺摄取，IC50为9.6 μM，效力比GPNA（IC50 = 1,000 μM）提高100倍。[1] - 在高达其IC50十倍（100 μM）的浓度下，V-9302优先抑制谷氨酰胺转运，也抑制另一种ASCT2底物亮氨酸的摄取。[1] - DARTS实验显示，V-9302以浓度依赖性方式（50、100、200 μM）保护ASCT2免受嗜热菌蛋白酶降解，表明存在稳定的V-9302-ASCT2相互作用。ASCT2的旁系同源物ASCT1在V-9302存在下未被稳定。[1] - 计算机对接研究表明，V-9302与位于人ASCT2跨膜区的正构氨基酸结合口袋兼容。保守的α-氨基酸头部基团与两性离子识别位点形成关键相互作用。[1] - 在HCC1806细胞中，V-9302（25 μM，48小时）处理导致磷酸化S6（p-S6）水平降低，p-ERK水平适度降低，与ASCT2 shRNA敲低类似。[1] - V-9302处理导致HCC1806和HT29细胞中氧化型谷胱甘肽（GSSG）水平升高，还原型谷胱甘肽（GSH）水平降低，并相应增加细胞内活性氧（ROS）。[1] - V-9302（10或25 μM，48小时）处理导致HCC1806细胞中LC3B（自噬标志物）表达升高，并降低光学氧化还原比（[FAD]/[NAD(P)H]）。[1] - 在29种人类癌细胞系（肺癌、乳腺癌、结直肠癌）中，V-9302（25 μM，48小时）使超过一半的细胞系中ATP依赖性活力降低至少20%。四种结直肠癌细胞系的EC50值约为9-15 μM。[1] - 在谷氨酰胺依赖性肝癌细胞系（SNU398、HepG2）中，V-9302与GLS1抑制剂CB-839的联合用药显示出协同抗增殖作用，消耗谷胱甘肽并诱导致死水平的活性氧和DNA损伤（γ-H2AX）。NAC可挽救细胞活力和增殖。[2] - 在三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、HCC1806、4T1、E0771）中，V-9302以剂量依赖性方式诱导细胞死亡。[3] - V-9302（10 μM）不影响活化CD8+ T细胞或CD4+ T细胞的活力，也不影响T细胞中的mTORC1信号传导。[3] - V-9302增加了CD8+ T细胞中的谷氨酰胺摄取（通过代偿性上调ATB⁰⁺/Slc6a14），同时减少了TNBC细胞中的谷氨酰胺摄取。[3] - V-9302增加了活化CD8+ T细胞中的谷胱甘肽水平、细胞内半胱氨酸、GCLC表达，并降低了ROS。[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在 HCT-116 和 HT29 异种移植模型中，V-9302 盐酸盐（75 mg/kg；腹腔注射；每天一次，持续 21 天）抑制肿瘤生长 [1]。在 BALB/c 裸鼠中作为肿瘤异种移植物产生的 SNU398 和 MHCC97H 细胞；分别培养 20 或 15 天）与 CB-839 和 V-9302 盐酸盐（30 mg/kg；ip）组合。在移植模型中引起显着的生长抑制；然而，单一药物治疗的抗肿瘤作用仅为中等[2]。施用 V-9302 盐酸盐（50 mg/kg；腹腔注射；每天一次，持续 5 天）时，肿瘤生长显着减少 [3]。
- 药效学PET成像： 在携带HCC1806异种移植瘤的无胸腺裸鼠中，单次给予V-9302（75 mg/kg体重，腹腔注射，4小时）使肿瘤对[4-¹⁸F]氟谷氨酰胺的摄取减少约50%，降至低于健康肌肉的背景摄取水平。肌肉摄取不受影响，而肝脏摄取略有升高（P = 0.05）。[1] - HCT-116异种移植瘤慢性疗效： 携带HCT-116（KRAS-G13D）异种移植瘤的无胸腺裸鼠接受V-9302治疗（75 mg/kg/天，腹腔注射，每日一次，共21天）。与赋形剂相比，V-9302抑制了肿瘤生长，肿瘤组织中p-S6表达显著降低，cleaved caspase-3升高。[1] - HT29异种移植瘤慢性疗效： 携带HT29（BRAF-V600E）异种移植瘤的无胸腺裸鼠接受V-9302治疗（75 mg/kg/天，腹腔注射，每日一次，共21天），结果显示肿瘤生长受抑，p-S6降低，cleaved caspase-3升高。[1] - 患者来源异种移植瘤（PDX）疗效： 在携带A-008 PDX（KRAS-G12V；p53-R248Q；PTEN-L140Y）的无胸腺裸鼠中，V-9302（75 mg/kg/天，腹腔注射，每日一次，共31天）导致肿瘤体积相比赋形剂组减小。[1] - HCC1806和COLO 205异种移植瘤： V-9302治疗10天可抑制肿瘤生长，特征为LC3B、cleaved caspase-3升高，p-Akt（Ser473）和p-S6降低。在COLO 205异种移植瘤中，观察到p-ERK和BrdU摄取降低，p-GSK-3β、p-PRAS40、p38和p53升高。[1] - 在自发性小鼠TNBC模型（C3(1)-TAg）中，乳腺上皮特异性GLS缺失（遗传模型）延迟了肿瘤发生并改善了T细胞活化。在携带E0771肿瘤的C57BL/6小鼠中使用V-9302（50 mg/kg，腹腔注射，每日一次，共5天）进行药理学治疗，减少了肿瘤生长，增加了瘤内CD8+ T细胞浸润和效应功能（GZMB、CD107a、IFN-γ）。[3] - 在SNU398和MHCC97H肝癌异种移植瘤（BALB/c裸鼠）中，V-9302（30 mg/kg，腹腔注射，每日一次）与CB-839（150 mg/kg，口服灌胃，每日两次）联合治疗20或15天，导致显著的生长抑制，肿瘤组织中Ki67减少，cleaved caspase-3和γ-H2AX增加。未观察到体重下降。[2] |
| 酶活实验 |
- ³H标记氨基酸摄取实验： 使用HEK-293细胞在96孔板中进行活细胞氨基酸摄取实验。用测定缓冲液洗涤细胞。同时加入³H标记的氨基酸（500 nM）和V-9302，在37°C孵育15分钟。对于ASCT2介导的³H谷氨酰胺摄取实验，加入5 mM BCH并将缓冲液pH调节至6.0。对于选择性研究，不加入BCH，在pH 7.4下进行实验。细胞用1 M NaOH裂解，加入闪烁液后计数。[1]
- DARTS实验： 使用四环素诱导表达ASCT2的T-REx-293细胞。裂解液与不同浓度的V-9302（50、100、200 μM）在室温振摇孵育35-45分钟，然后与嗜热菌蛋白酶孵育30分钟。通过免疫印迹检测ASCT2。[1] - 计算机对接： 使用人ASCT2的同源模型作为配体对接的靶标。2D结构转化为3D结构，并使用RosettaLigand进行对接。使用片段约束以促进氨基酸类似物主链原子的放置。对于ASCT2和LAT1的比较研究，使用MOE生成同源模型。每个模拟包括500次迭代，对蛋白质-配体界面能量进行评分。[1] - LC-MS代谢组学： 细胞用DMSO或CB-839处理4和24小时。代谢物用甲醇/乙腈/dH₂O提取，离心后上清液在Exactive质谱仪上分析。使用SeQuant ZIC-pHILIC色谱柱进行分离。基于精确质量（5 ppm以内）和保留时间与标准品的一致性鉴定和定量代谢物。[2] - 共培养系统中的谷氨酰胺摄取实验： 将E0771或HCC1806细胞接种在96孔板中。将CD8+ T细胞加入肿瘤细胞中（1:1比例），加入含有V-9302（10 μM）、MeAIB（10 mM）、BCH（500 μM）或αMT（100 μM）的摄取缓冲液。37°C孵育15分钟后，加入1 μCi L-[2,3,4-³H]-谷氨酰胺，再孵育15分钟。洗涤细胞，用1N NaOH裂解，通过闪烁计数器测量放射性。[3] |
| 细胞实验 |
- 细胞活力测定（ATP依赖性）： 细胞在96孔板中用V-9302（25 μM，48小时）处理。加入CellTiter-Glo试剂，用读板器读取。[1]
- CellTiter-Blue活力测定： 细胞以每孔2,000-5,000个细胞的密度接种在96孔板中。12小时后加入药物。72小时后测量细胞活力。相对活力归一化至对照条件。[2] - 长期集落形成实验： 细胞以每孔2-10 × 10⁴个细胞接种在6孔板中，用指定药物培养10-14天。细胞用4%甲醛固定，用0.1%结晶紫染色。[1][2] - IncuCyte细胞增殖实验： 细胞以每孔1,000-8,000个细胞接种在96孔板中。12小时后加入药物，每4小时成像一次。基于细胞融合度分析相衬图像以检测细胞增殖。[1][2] - IncuCyte凋亡实验： 向培养基中加入Caspase-3/7绿色凋亡检测试剂。基于凋亡细胞的绿色荧光染色分析凋亡。[2] - 谷胱甘肽和ROS测定： 使用商品化试剂盒测定谷胱甘肽水平。使用CM-H₂DCFDA结合流式细胞术测定ROS。[1] - T细胞活化的流式细胞术分析： 收获肿瘤，在含5% FBS、1 mg/mL胶原酶IA和0.25 mg/mL DNase I的RPMI-1640中于37°C解离30分钟。获得单细胞悬液，裂解红细胞。对于细胞内细胞因子检测，细胞用PMA（50 ng/mL）、离子霉素（1 μg/mL）和GolgiPlug刺激4小时。细胞用Ghost Dye染色以检测活力，Fc封闭，然后用CD45、CD3e、CD4、CD8a、CD25、CD69、CD44、CD62L、CD127、CD107a抗体染色。使用Cytofix/Cytoperm进行GZMB、IFN-γ、IL-4、IL-17A和GCLC的细胞内染色。FoxP3染色使用FoxP3/转录因子染色试剂盒。数据在BD Fortessa上采集，用FlowJo分析。[3] - 细胞毒性实验（LDH释放）： 将E0771(OVA)或E0771细胞（每孔1 × 10⁴个）与SIINFEKL活化的CD8+ OT-1 T细胞（每孔2 × 10⁵个；5:1比例）在存在或不存在V-9302（10 μM）的情况下共培养48小时。使用LDH细胞介导的细胞毒性测定试剂盒测量细胞毒性。[3] - 定量实时PCR： 使用RNeasy试剂盒收集RNA，使用iScript cDNA合成试剂盒合成cDNA。使用SYBR Green PCR预混液和针对Slc1a5、Slc38a1、Slc38a2、Slc7a5、Slc3a2、Slc6a14和GCLC的引物，以三重复扩增样本。使用ΔΔCt方法进行定量。[3] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 6周龄雌性无胸腺裸鼠（携带HCT-116 (KRASG13D)或HT29 (BRAFV600E)细胞系）[1]
剂量： 75 mg/kg 给药途径： 腹腔注射（ip）；每日一次，持续21天 实验结果： 抑制肿瘤生长。 - 异种移植瘤体内药效研究： 携带HCT-116、HT29、HCC1806或COLO 205细胞系异种移植瘤的无胸腺裸鼠接受V-9302治疗（75 mg/kg体重/天，腹腔注射，每日一次，共21天或10天）。对于PDX模型A-008，治疗31天。V-9302用含2% DMSO的PBS配制。[1] - PET成像研究： 携带HCC1806异种移植瘤的小鼠通过静脉注射给予[4-¹⁸F]氟谷氨酰胺，并使用microPET扫描仪成像。在给予赋形剂或V-9302（75 mg/kg，腹腔注射）后3小时开始成像。动态数据集采集60分钟，使用OSEM3D/MAP算法重建。示踪剂摄取量量化为每克组织注射剂量的百分比（%ID/g）。[1] - 肝癌异种移植瘤慢性联合用药研究： 携带SNU398或MHCC97H异种移植瘤的BALB/c裸鼠（肿瘤体积约50-100 mm³）随机分配到每周5天治疗组，分别给予赋形剂、CB-839（150 mg/kg，口服灌胃，每日两次）、V-9302（30 mg/kg，腹腔注射）或联合用药，共20或15天。肿瘤体积使用改良椭球公式计算：体积 = ½（长 × 宽²）。[2] - 原位TNBC模型中的V-9302治疗： 携带E0771肿瘤（约100 mm³，接种后约11天）的C57BL/6小鼠接受V-9302治疗（50 mg/kg，腹腔注射，每日一次，共5天）。收获肿瘤用于流式细胞术和免疫组织化学。[3] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
- 在健康小鼠中，V-9302在给药后4小时达到稳态血浆浓度，半衰期约为6小时。[1]
- 单次急性V-9302暴露（4小时）后，血浆谷氨酰胺水平升高约50%，而血浆葡萄糖水平不变。在21天方案中慢性暴露于V-9302的小鼠中，血浆谷氨酰胺水平略有下降。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在携带异种移植瘤的无胸腺裸鼠的慢性暴露研究（21天）中，与赋形剂处理的对照组相比，V-9302治疗组（75 mg/kg/天）未观察到显著的体重下降。[1]
- 慢性接受V-9302或赋形剂治疗的小鼠肝脏病理学相似。[1] - 在肝癌异种移植瘤的联合用药研究（V-9302 30 mg/kg/天，CB-839 150 mg/kg/天）中，任何治疗组均未观察到体重下降。[2] - 在体外，V-9302（10 μM）不影响活化CD8+ T细胞或CD4+ T细胞的活力。[3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
- V-9302是一种竞争性ASCT2介导的谷氨酰胺转运小分子拮抗剂，化学结构为2-氨基-4-双(芳氧基苄基)氨基丁酸。[1]
- DARTS实验证实了稳定的V-9302-ASCT2相互作用，而ASCT1未被稳定，表明其对ASCT2具有选择性。[1] - V-9302与GLS1抑制剂CB-839的联合用药在谷氨酰胺依赖性肝癌细胞中通过消耗 |
| 分子式 |
C34H39CLN2O4
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|---|---|
| 分子量 |
575.137468576431
|
| 精确质量 |
574.259
|
| 元素分析 |
C, 71.00; H, 6.84; Cl, 6.16; N, 4.87; O, 11.13
|
| CAS号 |
2416138-42-4
|
| 相关CAS号 |
V-9302;1855871-76-9
|
| PubChem CID |
145710038
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
85
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
14
|
| 重原子数目 |
41
|
| 分子复杂度/Complexity |
687
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
CC1=CC(=CC=C1)COC2=CC=CC=C2CN(CC[C@@H](C(=O)O)N)CC3=CC=CC=C3OCC4=CC=CC(=C4)C.Cl
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| InChi Key |
LUQMUDMPRZSZTJ-YNMZEGNTSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C34H38N2O4.ClH/c1-25-9-7-11-27(19-25)23-39-32-15-5-3-13-29(32)21-36(18-17-31(35)34(37)38)22-30-14-4-6-16-33(30)40-24-28-12-8-10-26(2)20-28;/h3-16,19-20,31H,17-18,21-24,35H2,1-2H3,(H,37,38);1H/t31-;/m0./s1
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| 化学名 |
(2S)-2-amino-4-[bis[[2-[(3-methylphenyl)methoxy]phenyl]methyl]amino]butanoic acid;hydrochloride
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| 别名 |
2416138-42-4; V-9302 hydrochloride; V9302 hydrochloride; V-9302 HCl; V-9302 (hydrochloride); (S)-2-Amino-4-(bis(2-((3-methylbenzyl)oxy)benzyl)amino)butanoic acid hydrochloride;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~100 mg/mL (~173.87 mM )
H2O :~50 mg/mL (~86.94 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7387 mL | 8.6935 mL | 17.3871 mL | |
| 5 mM | 0.3477 mL | 1.7387 mL | 3.4774 mL | |
| 10 mM | 0.1739 mL | 0.8694 mL | 1.7387 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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