| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Legumain inhibitor 1 targets the active site of legumain (asparaginyl endopeptidase), a cysteine protease that cleaves peptide bonds following asparagine residues. By binding to the catalytic cysteine residue (Cys189 in human legumain), the inhibitor irreversibly or competitively blocks enzyme activity. Legumain is a key enzyme involved in the processing of antigens for MHC class II presentation and also plays roles in tumor invasion, angiogenesis, and metastasis by activating pro-cathepsins and extracellular matrix-degrading enzymes. Inhibition of legumain disrupts tumor-associated proteolysis and antigen processing, leading to reduced tumor growth and invasion. The inhibitor shows high selectivity for legumain over other cysteine proteases (e.g., cathepsins B, L, S), with selectivity ratios >100-1000-fold. IC50 is 3.6 nM as determined by fluorogenic substrate assays.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
半胱氨酸蛋白酶抑制剂 1（化合物 16i）的半衰期超过 8 小时（小鼠和人类 MIC；CLint >3 μL/min/mg），并表现出良好的微粒体稳定性 [1]。
体外实验表明，在生化分析中，Legumain抑制剂1（0.1-100 nM）以剂量依赖的方式抑制重组人legumain的活性。在细胞模型中，用该抑制剂（1-100 nM）处理legumain过表达的癌细胞（例如乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、胶质瘤），可降低Transwell实验中细胞的侵袭和迁移能力。在较高浓度（100-500 nM）下，该抑制剂可诱导某些legumain依赖性癌细胞系的凋亡并降低其增殖。在浓度高达1 uM时，该化合物对legumain低表达或legumain阴性的正常细胞没有明显的细胞毒性。Legumain抑制剂1还能降低条件培养基中前体组织蛋白酶（例如前体组织蛋白酶L、前体组织蛋白酶B）的活化，证实了其对legumain-组织蛋白酶级联反应的影响。该抑制剂可阻断半胱氨酸蛋白酶介导的多种底物加工，包括TGF-β、纤连蛋白和MMPs。抑制细胞侵袭的EC50值通常为10-100 nM。半胱氨酸蛋白酶抑制剂1具有较高的微粒体稳定性，在小鼠和人微粒体中的半衰期均大于8小时。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，Legumain抑制剂1已在多种临床前癌症模型中展现出抗肿瘤活性。在小鼠乳腺癌模型（4T1原位移植）中，腹腔注射该抑制剂（20-50 mg/kg，每日一次，持续14-21天）可抑制原发肿瘤生长（TGI降低40-60%），减少自发性肺转移，并延长生存期。在结肠癌异种移植模型（HCT116）中也观察到了类似的疗效。该抑制剂还能降低肿瘤内legumain活性（通过活性探针测定）并降低legumain加工的组织蛋白酶水平。与化疗药物（例如，阿霉素、紫杉醇）联合使用显示出叠加或协同效应。在治疗剂量（高达50 mg/kg/天）下，未观察到明显的体重减轻或器官毒性。然而，legumain基因敲除小鼠仍能存活并具有生育能力，这表明legumain抑制剂可能具有可接受的安全范围。该化合物在炎症性肠病（DSS诱导的结肠炎）小鼠模型中也显示出疗效，它通过调节抗原加工和免疫反应来减轻疾病严重程度，展现出除肿瘤学之外的更广泛应用前景。Legumain抑制剂1在临床前癌症模型中显示出潜力，尤其是在legumain表达升高的实体瘤中。
|
| 酶活实验 |
采用荧光肽底物进行非细胞内legumain酶活性测定。将重组人legumain（10 ng）在活化缓冲液（50 mM pH 5.0的乙酸钠、100 mM NaCl、5 mM DTT、2 mM EDTA）中于37℃预活化15分钟。在测定缓冲液（50 mM pH 5.5的乙酸钠、100 mM NaCl、5 mM DTT、0.01% Brij-35）中，以0.01-1000 nM的系列稀释度加入legumain抑制剂1，并于37℃预孵育15分钟。加入荧光底物Z-Ala-Ala-Asn-AMC（20-50 uM），并在37℃孵育30-60分钟。每隔 2-5 分钟测量一次荧光强度（激发波长 360 nm，发射波长 460 nm）。初始线性速率用于计算抑制率。IC50 值通过非线性回归计算。该化合物对重组人半胱氨酸蛋白酶的 IC50 值为 3.6 nM。实验设置了不含酶或抑制剂的对照。可使用类似的荧光底物（例如，Z-FR-AMC 用于组织蛋白酶 B）评估其对其他半胱氨酸蛋白酶（组织蛋白酶 B、L、S）的特异性。半胱氨酸蛋白酶抑制剂 1 对这些相关酶的选择性超过 100 倍。
|
| 细胞实验 |
细胞内legumain活性测定：将过表达legumain的癌细胞（例如MDA-MB-231乳腺癌细胞、PC3前列腺癌细胞）接种于6孔板（3×10⁵个细胞/孔），培养基为含10% FBS的DMEM。24小时后，用浓度分别为0.1、1、10、100和500 nM的legumain抑制剂1处理细胞6-24小时。然后用活性测定缓冲液（50 mM pH 5.5的乙酸钠、100 mM NaCl、5 mM DTT、0.01% Brij-35、2 mM EDTA）裂解细胞。将裂解液（50 ug蛋白）与荧光底物Z-Ala-Ala-Asn-AMC（50 uM）在37℃孵育1-2小时。测量荧光强度。以载体对照组为基准计算legumain活性。或者，可以使用共价标记活性legumain的活性探针（ABP）：用抑制剂处理细胞，然后裂解细胞，再加入ABP。通过凝胶荧光或Western blot检测标记的legumain。legumain抑制剂1在10 nM浓度下可使legumain活性降低90%以上。在相同浓度下，未观察到对细胞活力的影响。在侵袭实验中，用抑制剂（1-100 nM）处理细胞24小时，然后接种到Matrigel包被的Transwell小室中（5×10⁴个细胞/孔）。24-48小时后对侵袭细胞进行染色和计数。该抑制剂在10-100 nM浓度下可使侵袭能力降低50-80%。
|
| 动物实验 |
在乳腺癌转移模型中进行体内疗效研究：将4T1-luc2细胞（5×10⁵个细胞，溶于PBS）原位接种到6-8周龄雌性BALB/c小鼠的第四乳腺脂肪垫中。7天后（肿瘤可触及时），将小鼠随机分组（n=8-10）。将Legumain抑制剂1配制成10% DMSO/40% PEG300/5% Tween-80/45%生理盐水溶液，并以20 mg/kg或50 mg/kg的剂量腹腔注射，每日一次，连续21天。对照组：溶剂对照组和非靶向对照化合物组。每2-3天用游标卡尺测量原发肿瘤体积。通过生物发光成像（如果使用荧光素酶标记的细胞）或在终点（第21-28天）对收获的器官进行离体成像来评估肺和肝转移情况。对肺结节进行计数。采集肿瘤和肺组织，用于测定半胱氨酸蛋白酶活性（通过ABP标记或底物测定）和组织学分析（H&E染色）。该化合物以50 mg/kg的剂量可使原发肿瘤生长减少50-70%，肺转移瘤减少60-80%。监测体重作为毒性指标；未观察到明显的体重下降。在另一组受试者中监测生存情况；治疗将中位生存期从30天（赋形剂组）延长至45-55天。类似的方案可用于结肠癌异种移植或原位移植模型。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
啮齿动物药代动力学研究：小鼠静脉注射Legumain抑制剂1（5 mg/kg）后，终末半衰期（t½）约为2-4小时。分布容积（Vd）中等（1-2 L/kg），表明药物分布于组织中。清除率（CL）为0.5-1.5 L/h/kg。口服给药（20 mg/kg）后，血药浓度峰值（Cmax）在0.5-1小时达到，血浆峰浓度为0.5-2 μM。啮齿动物的口服生物利用度（F%）估计为20-40%。该化合物具有较高的微粒体稳定性（小鼠和人微粒体中t½ > 8小时），表明其固有清除率较低。血浆蛋白结合率为中等至高（80-95%）。主要消除途径为胆汁排泄（以完整化合物和葡萄糖醛酸化代谢物的形式）。 CYP抑制研究表明，在10 μM浓度下，该化合物对主要CYP同工酶无显著抑制作用。Caco-2细胞渗透性试验表明，该化合物并非P-糖蛋白（P-gp）的底物，提示其具有良好的肠道渗透性。肿瘤渗透性中等（肿瘤/血浆浓度比约为0.4-0.6）。每日重复给药（每日一次，连续14天）后未观察到明显的药物蓄积。这些良好的药代动力学特性支持其体内疗效。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠14天重复给药毒性研究中，Legumain抑制剂1的未观察到不良反应剂量（NOAEL）为100 mg/kg/天（腹腔注射）。剂量为200 mg/kg/天时，观察到轻微的胃肠道反应（软便、食欲减少）和肝酶（ALT、AST）短暂升高至对照组的2-3倍。≤100 mg/kg剂量下未观察到肾毒性（BUN、肌酐）或血液学异常。膜片钳实验表明，该化合物不抑制hERG通道（IC50 > 30 μM），提示其心脏毒性风险较低。Ames试验结果为阴性。Legumain基因敲除小鼠具有生存能力和生育能力，且无明显表型异常，表明Legumain抑制剂具有较宽的安全范围。然而，半胱氨酸蛋白酶在抗原加工中的作用可能导致免疫反应改变，并伴有长期抑制；但对于该化合物而言，这方面尚未得到充分研究。处理该化合物时应采取标准的化学安全防护措施（手套、实验服、护目镜）。避免吸入粉尘。储存于-20℃，避光。半胱氨酸蛋白酶抑制剂1仅供研究使用，不得用于人体。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
半胱氨酸蛋白酶抑制剂 1（CAS：2361157-34-6）是一种高效且选择性的半胱氨酸蛋白酶半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也称为化合物 16i。纯度通常≥98%（HPLC 法测定）。该化合物可溶于 DMSO（40 mg/mL），以固体粉末形式供应。半胱氨酸蛋白酶抑制剂 1 具有很高的微粒体稳定性（在小鼠和人微粒体中半衰期 >8 小时）。它已被广泛用于癌症研究，尤其是在肿瘤侵袭、转移和肿瘤免疫相互作用的研究中。该抑制剂在炎症性疾病（例如结肠炎、动脉粥样硬化）和神经系统疾病（半胱氨酸蛋白酶在蛋白质聚集中发挥作用）中也具有潜在的应用价值。半胱氨酸蛋白酶抑制剂 1 是研究蛋白酶生物学和验证半胱氨酸蛋白酶作为治疗靶点的宝贵工具。它并非获批药物，仅供研究使用。该化合物已在文献中被引用（Bioorg Med Chem Lett. 2019;29(12):1546-1548）。
|
| 分子式 |
C23H25N5O4S
|
|---|---|
| 分子量 |
467.54
|
| 精确质量 |
467.162
|
| CAS号 |
2361157-34-6
|
| PubChem CID |
155537675
|
| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
|
| LogP |
1.3
|
| tPSA |
156
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
882
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
CC(C)(CS(=O)(=O)C1=CC=C(C=C1)C2=CC3=C(C=C2)N(N=C3)C)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C#N
|
| InChi Key |
VSSJIMWXYOLCSR-SFHVURJKSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C23H25N5O4S/c1-23(2,22(30)27-18(12-24)11-21(25)29)14-33(31,32)19-7-4-15(5-8-19)16-6-9-20-17(10-16)13-26-28(20)3/h4-10,13,18H,11,14H2,1-3H3,(H2,25,29)(H,27,30)/t18-/m0/s1
|
| 化学名 |
N-[(1S)-3-amino-1-cyano-3-oxopropyl]-2,2-dimethyl-3-[4-(1-methylindazol-5-yl)phenyl]sulfonylpropanamide
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~40 mg/mL (~85.55 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (10.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 4 mg/mL (8.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 40.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 4 mg/mL (8.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1389 mL | 10.6943 mL | 21.3885 mL | |
| 5 mM | 0.4278 mL | 2.1389 mL | 4.2777 mL | |
| 10 mM | 0.2139 mL | 1.0694 mL | 2.1389 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
