β-Amyloid (1-42), human TFA

别名: Amyloid β-peptide (1-42) (human) TFA
目录号: V87771 纯度: ≥98%
β-淀粉样蛋白(1-42),人类 TFA(淀粉样蛋白 β-肽(1-42)(人类)TFA)是一种由 42 个氨基酸组成的肽,在阿尔茨海默病的发病机制中起关键作用。
β-Amyloid (1-42), human TFA 产品类别: Beta Amyloid
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
β-淀粉样蛋白(1-42),人TFA(淀粉样β肽(1-42)(人)TFA)是一种42个氨基酸的肽,在阿尔茨海默病的发病机制中起着关键作用。
beta-淀粉样蛋白(1-42),人TFA(淀粉样beta肽(1-42)人TFA)是一种由42个氨基酸组成的合成肽,对应于全长人beta-淀粉样蛋白(Abeta)肽。Abeta1-42是阿尔茨海默病(AD)患者脑内淀粉样斑块的主要成分,也是AD发病机制中的关键因素。它具有高度疏水性,易于聚集,形成神经毒性的寡聚体和原纤维。三氟乙酸(TFA)盐形式是合成肽的行业标准,可提高其操作性和溶解度。
生物活性&实验参考方法
靶点
beta-Amyloid (1-42) targets various neuronal surface receptors that mediate its neurotoxic effects. Abeta42 oligomers bind to several receptors, including the cellular prion protein (PrPc), metabotropic glutamate receptor 5 (mGluR5), NMDA receptors, Ephrin receptors, and the receptor for advanced glycation end products (RAGE). The monomeric form of Abeta1-42 exhibits antioxidant and neuroprotective properties, while the oligomeric and fibrillar forms are neurotoxic and contribute to synaptic dysfunction and neuronal death in Alzheimer‘s disease.
体外研究 (In Vitro)
淀粉样蛋白β聚集指南(以下是我们推荐的方案。本方案仅提供指导,应根据您的具体需求进行修改)。1. 将固体Aβ肽溶解于冷的六氟异丙醇(HFIP)中。在室温下孵育肽至少1小时,以使其单体化和结构随机化。2. 通过蒸发去除HFIP,并将所得肽以薄膜形式储存于-20或-80°C。3. 将所得薄膜溶解于5mM无水DMSO中,然后涡旋混匀至合适的浓度和缓冲液(不含血清和酚红的培养基)。4. 接下来,将溶液在4-8°C下孵育48小时。然后将样品在4-8°C下以14,000g离心10分钟;可溶性寡聚体存在于上清液中。将上清液稀释10-200倍用于实验。方法因下游应用而异。注意:聚合形式在溶液中不稳定,建议立即使用。
体外实验表明,人β-淀粉样蛋白(1-42)是研究阿尔茨海默病发病机制的关键肽段。单体Aβ1-42(新鲜溶解于合适的溶剂中)具有抗氧化和神经保护作用。然而,当Aβ1-42发生聚集时,会形成具有神经毒性的寡聚体和原纤维,而这些正是阿尔茨海默病研究的主要目标。这些聚集体能够与多种神经元表面受体(如PrPc、mGluR5、NMDA受体等)结合,导致神经元功能障碍和死亡。该肽段可用于筛选能够抑制聚集或解聚已形成原纤维的抗淀粉样蛋白化合物。
体内研究 (In Vivo)
β-淀粉样蛋白(1-42)、人类TFA可用于动物模型构建阿尔茨海默病模型。
人β-淀粉样蛋白(1-42)(TFA)在体内可诱导神经毒性和突触功能障碍。当将聚集的Aβ1-42寡聚体/原纤维注射到啮齿动物脑内时,会导致记忆缺陷、神经元丢失、突触损伤和神经炎症,模拟阿尔茨海默病病理的关键方面。它被广泛用于构建小鼠和大鼠的急性或亚急性阿尔茨海默病模型。TFA盐形式一直是肽生产的行业标准,并用于此类体内研究。搜索结果中未提供具体的剂量或疗效数据。
酶活实验
通常使用纯化的重组受体(例如 PrPc、mGluR5)通过表面等离子共振 (SPR) 或酶联免疫吸附试验 (ELISA) 来测定 Aβ1-42 寡聚体与神经元受体的结合。Aβ 寡聚体的制备方法是将单体 Aβ1-42(1 mg/mL,溶于 HFIP,干燥后用 DMSO 重溶,再用 PBS 稀释)在 4℃ 下孵育 24-48 小时。将 Aβ 寡聚体固定在传感器芯片或板上,然后将受体蛋白流过寡聚体,反之亦然。计算结合亲和力 (KD)。或者,也可以使用放射性标记的 Aβ,在表达受体的细胞膜制备物中测定受体结合。通过硫黄素 T (ThT) 荧光监测聚集动力学。
细胞实验
在体外神经毒性试验中,将原代皮层或海马神经元(从胚胎第16-18天的大鼠或小鼠胚胎中分离)接种于96孔板中,并在体外培养7-14天。Aβ1-42寡聚体(5-20 uM)的制备方法为:将单体Aβ(溶于HFIP/DMSO)在PBS缓冲液中于4℃孵育24-48小时,或使用市售的预制纤维(PFFs)。将成熟神经元用Aβ1-42寡聚体处理24-72小时。采用MTT、LDH或Calcein-AM染色法评估神经元活力。通过Western blot检测突触蛋白(PSD-95、突触素)的丢失来评估突触毒性。采用cleaved caspase-3免疫染色法评估神经元凋亡。 ROS 水平通过 DCFH-DA 荧光法测定。
动物实验
为了进行体内神经毒性和认知功能障碍的评估,我们使用雄性Sprague-Dawley大鼠或C57BL/6小鼠(8-12周龄)。如上所述,将Aβ1-42寡聚体(每只动物5-10 μg,溶于5 μL PBS)聚集。然后将Aβ肽通过立体定位手术进行脑室内(ICV)注射,或双侧注射至海马或侧脑室。手术对照组注射载体(PBS)。注射后7-28天,使用Morris水迷宫(空间记忆)、Y迷宫(工作记忆)和被动回避测试评估认知功能。在研究终点,收集脑组织进行组织学分析(Abeta 免疫组织化学、硫黄素 S 染色检测斑块)、Western blot 检测突触标志物和神经炎症标志物(Iba1 检测小胶质细胞,GFAP 检测星形胶质细胞),以及 ELISA 检测细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)。
药代性质 (ADME/PK)
人β-淀粉样蛋白(1-42) TFA(C203H311N₅₅O₆0S·TFA,肽段分子量为4514.1,含TFA反离子)为白色至类白色冻干粉末。冻干粉末应密封保存于-20℃或-80℃,避光防潮。体外实验中,肽段通常先溶于六氟异丙醇(HFIP)使其单体化,干燥后再溶于DMSO或PBS缓冲液中。避免反复冻融。TFA盐是合成Aβ肽的行业标准。细胞培养时,如有需要,可通过稀盐酸反复冻干将TFA盐替换为HCl或乙酸盐。由于该肽段仅用于体外和离体研究,因此不提供药代动力学(PK)数据。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
β-淀粉样蛋白(1-42)本身就是正在研究的毒性物质;其聚集体具有神经毒性。据报道,单体Aβ1-42具有抗氧化和神经保护作用,而寡聚体和原纤维则具有神经毒性。三氟乙酸(TFA)反离子在高浓度下可能具有毒性,但在典型检测中含量较低。作为一种研究化合物,它不适用于人类或兽医用途。处理神经毒性肽时应遵循标准的实验室安全预防措施,包括佩戴手套、实验服和护目镜。应遵循危险生物材料的适当处置程序。
参考文献

[1]. Impact of amyloid-β peptide (1-42) on voltage-gated ion currents in molluscan neurons. Bull Exp Biol Med. 2011 Oct;151(6):671-4.

[2]. Nuclear translocation uncovers the amyloid peptide Aβ42 as a regulator of gene transcription. J Biol Chem. 2014 Jul 18;289(29):20182-91.

[3]. Capillary electrophoresis studies on the aggregation process of beta-amyloid 1-42 and 1-40 peptides. Electrophoresis. 2004 Oct;25(18-19):3186-94.

其他信息
β-淀粉样蛋白(1-42),即人源三氟乙酸(TFA),是阿尔茨海默病研究中最广泛使用的合成肽。Aβ1-42是Aβ的较长且更易聚集的亚型(另一种主要亚型是Aβ1-40)。Aβ1-42是阿尔茨海默病中淀粉样斑块的主要成分,被认为是阿尔茨海默病发病机制的起始因素(淀粉样蛋白级联假说)。该肽可用于研究Aβ聚集机制,筛选Aβ聚集和毒性抑制剂,开发Aβ抗体和成像探针,以及通过直接脑内注射构建阿尔茨海默病急性动物模型。三氟乙酸(TFA)反离子可提高这种高度疏水性肽的溶解度和操作性。需要注意的是,Aβ1-42的单体形式无毒。该毒性源于可溶性寡聚体和原纤维的形成。该肽仅供研究使用,不具有任何治疗用途。它尚未获得任何适应症的监管批准。TFA盐的CAS号通常为107761-42-2(或类似编号,具体取决于供应商)。非TFA形式(乙酸盐或HCl)也可用。β-淀粉样蛋白(1-42)也称为Aβ42、Aβ42或淀粉样β肽(1-42)。该肽序列为:DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C205H312F3N55O62S
分子量
4628.06
外观&性状
Solid powder
别名
Amyloid β-peptide (1-42) (human) TFA
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: (1). 该产品在溶液状态不稳定,请现配现用。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : 33.33 mg/mL (7.20 mM; with sonication)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.54 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO 40% PEG300 5% Tween-80 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加),澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀;再向上述体系中加入 50 μL Tween-80,混合均匀;然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (0.54 mM) in 10% DMSO 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加),悬浊液; 超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中,混合均匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.54 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加),澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中,混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.2161 mL 1.0804 mL 2.1607 mL
5 mM 0.0432 mL 0.2161 mL 0.4321 mL
10 mM 0.0216 mL 0.1080 mL 0.2161 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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