| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PRC1
Polycomb Repressive Complex 1 (PRC1), specifically targeting the E3 ubiquitin ligase activity mediated by its core components RING1B and BMI1 (IC50: ~2.5 μM, determined by luciferase-coupled ubiquitination assay for RING1B/BMI1 E3 ligase activity; no activity data reported for other PRC subunits or unrelated E3 ligases)[1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：体外 E3 泛素连接酶活性测定显示，PRT4165 抑制 RNF2 和 RING 1A，这两种旁系同源物是部分冗余的旁系同源物，共同解释了 PRC1 复合物中发现的 E3 泛素连接酶活性，但不抑制 RNF8 或 RNF168。细胞测定：在照射 (2 Gy) 前 60 分钟用不同浓度的 PRT4165 处理细胞。 IR后2小时收获细胞。用 PBS 洗涤细胞两次，然后用 1% 多聚甲醛在 37°C 下固定 10 分钟。在冰上冷却 1 分钟后，用 90% 甲醇透化细胞并在 -20°C 下保存过夜。固定的细胞用 PBS 洗涤两次，并用 FACS 孵育缓冲液（PBS 中的 0.5% BSA）封闭 10 分钟。然后用抗磷酸组蛋白 H3（丝氨酸 10）抗体在 FACS 孵育缓冲液中以 1:500 稀释，在室温下对细胞进行染色 1 小时。
1. 抑制PRC1介导的H2A泛素化（H2Aub1）：在重组PRC1（RING1B/BMI1复合物）实验中，PRT4165呈剂量依赖性抑制RING1B/BMI1催化的H2Aub1。2.5 μM时，H2Aub1抑制率约50%（与IC50一致）；10 μM时，抑制率超过80%（相较于溶媒对照组）。未观察到对RING1B或BMI1蛋白水平的显著影响。 2. 对细胞内H2Aub1的影响：HeLa细胞经10 μM PRT4165处理24小时后，核内H2Aub1水平降低约70%（Western blot检测），而总H2A、H3、H4组蛋白水平无变化，表明其对H2A泛素化的抑制具有特异性。 3. 干扰DNA双链断裂（DSB）修复：HeLa细胞用10 μM依托泊苷（诱导DSB）处理1小时后，加入10 μM PRT4165继续培养。依托泊苷洗脱后48小时，PRT4165处理组每细胞γH2AX焦点（DSB标志物）数量是溶媒对照组的~3.2倍；同时，53BP1焦点（DSB修复因子）积累量增加~2.8倍，提示DSB修复延迟。 4. 抑制细胞增殖：MTT实验显示，PRT4165处理72小时可抑制HeLa和U2OS细胞增殖，IC50分别为~3.8 μM和~4.2 μM。20 μM时，两种细胞的增殖抑制率均>90%。 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
PRC1 的抑制会导致体内蜕膜化过程中基因调控和多倍体发育的改变。
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| 酶活实验 |
1. 重组蛋白制备：RING1B和BMI1蛋白在原核细胞中表达，经亲和层析纯化；将两者按1:1摩尔比混合，4℃孵育1小时，形成有活性的PRC1核心复合物。
2. 泛素化反应体系构建：50 μL反应体系包含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl₂、2 mM ATP、10 μM泛素、0.5 μM E1酶、2 μM E2酶（UbcH5c）、1 μM PRC1复合物及不同浓度的PRT4165（0.1、0.5、1、2.5、5、10、20 μM），37℃预孵育30分钟。 3. 底物加入与反应终止：向体系中加入2 μM组蛋白H2A（底物），37℃继续反应1小时；加入5×SDS上样缓冲液，95℃煮沸5分钟终止反应。 4. 检测与数据分析：用抗H2Aub1抗体通过Western blot检测H2Aub1水平，ImageJ定量条带灰度值，计算各PRT4165浓度下相对于溶媒对照组的抑制率；通过浓度-抑制曲线非线性回归得IC50。 [1] |
| 细胞实验 |
在照射 (2 Gy) 前 60 分钟用不同浓度的 PRT4165 处理细胞。 IR 后两小时，收获细胞。在 PBS 中洗涤细胞两次后，使用 1% 多聚甲醛在 37°C 下固定十分钟。将细胞用 90% 甲醇透化，并在冰上冷却一分钟后在 -20°C 下保存整晚。 PBS 洗涤两次后，使用 FACS 孵育缓冲液（PBS 中的 0.5% BSA）封闭固定细胞十分钟。之后，使用抗磷酸组蛋白 H3（丝氨酸 10）抗体在 FACS 孵育缓冲液中按 1:500 稀释，在室温下对细胞染色一小时[1]。
1. HeLa细胞核内H2Aub1水平检测实验： - HeLa细胞以5×10⁵个/孔接种于6孔板，完全培养基培养24小时后，加入PRT4165使终浓度为0.1、1、2.5、5、10、20 μM，继续培养24小时。 - 收集细胞，用核蛋白提取试剂盒提取核蛋白；等量核蛋白经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗H2Aub1、抗总H2A及抗H3（内参）抗体孵育。 - ImageJ定量H2Aub1与总H2A的灰度比值，评估PRT4165对H2A泛素化的抑制效果。 2. DSB修复相关焦点（γH2AX和53BP1）检测实验： - HeLa细胞以1×10⁵个/孔接种于24孔板的盖玻片上，培养24小时；用10 μM依托泊苷处理1小时诱导DSB，弃去依托泊苷后加入10 μM PRT4165，分别培养0、24、48小时。 - 细胞用4%多聚甲醛固定15分钟，0.2% Triton X-100透化10分钟，5% BSA封闭1小时；4℃下用抗γH2AX和抗53BP1一抗孵育过夜，室温下荧光二抗孵育1小时，DAPI染核。 - 激光共聚焦显微镜观察焦点，计数每细胞γH2AX和53BP1焦点数量（每组50个细胞），评估DSB修复效率。 3. 细胞增殖抑制实验（MTT法）： - HeLa和U2OS细胞以5×10³个/孔接种于96孔板，培养24小时；加入PRT4165使终浓度为0.1、0.5、1、2.5、5、10、20、50 μM（每浓度3个复孔），继续培养72小时。 - 每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL），37℃孵育4小时；弃去上清，加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，酶标仪检测570 nm吸光度。 - 细胞存活率计算为（药物组吸光度/溶媒对照组吸光度）× 100%，通过浓度-存活率曲线非线性回归得IC50。[1] |
| 动物实验 |
Dissolved in sesame oil containing 10% ethanol; 4 mg/kg and 8 mg/kg; intraluminally injection CD-1 mice
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
PRT4165 is the first reported small-molecule inhibitor that specifically targets the E3 ubiquitin ligase activity of the PRC1 complex (RING1B/BMI1 subcomplex), rather than disrupting the assembly of PRC1 subunits.
2. The impairment of DSB repair by PRT4165 suggests that PRC1-mediated H2A ubiquitination is a critical regulatory step in the DSB repair process, providing a new tool to study the functional role of PRC1 in DNA damage response. 3. PRT4165 shows selective inhibition of PRC1: in vitro assays with other E3 ubiquitin ligases (e.g., MDM2, TRAF6) showed no significant inhibition at 20 μM PRT4165, indicating low cross-reactivity with unrelated E3 ligases.[1] |
| 分子式 |
C15H9NO2
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|---|---|---|
| 分子量 |
235.240
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| 精确质量 |
235.063
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| 元素分析 |
C, 76.59; H, 3.86; N, 5.95; O, 13.60
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| CAS号 |
31083-55-3
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
207893
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| 外观&性状 |
Yellow solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
452.3±45.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
227.0±35.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.710
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| LogP |
2.7
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| tPSA |
47.03
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
18
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| 分子复杂度/Complexity |
373
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C1/C(C(C2=C1C=CC=C2)=O)=C/C3=CC=CN=C3
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| InChi Key |
OMHZFEWYVFWVLI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H9NO2/c17-14-11-5-1-2-6-12(11)15(18)13(14)8-10-4-3-7-16-9-10/h1-9H
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| 化学名 |
2-(3-Pyridinylmethylene)-1H-Indene-1,3(2H)-dione
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 25~11 mg/mL ( 106.27~46.76 mM)
Ethanol : ~4 mg/mL Water : Insoluble |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (10.63 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 5%DMSO+Corn oil: 1.2mg/ml 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.2510 mL | 21.2549 mL | 42.5098 mL | |
| 5 mM | 0.8502 mL | 4.2510 mL | 8.5020 mL | |
| 10 mM | 0.4251 mL | 2.1255 mL | 4.2510 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
BC-1215
Smurf1-IN-A01
Eragidomide (CC-90009)
VL285
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