Bemcentinib (R428; BGB-324; R-428)   中文名称: 比美替尼

Axl eceptor tyrosine kinase (IC50 = 14 nM)
Axl Receptor Tyrosine Kinase (IC50 = 1.6 nM for recombinant human Axl kinase); no significant activity against MET, VEGFR2, EGFR (IC50 > 1000 nM) [2]
- Confirmed Axl as primary target (melanoma model; no additional IC50 values) [1]
- Confirmed Axl targeting (adipocyte differentiation model; consistent with [2]’s IC50) [3]

R428 （也称为 BGB324）阻断 Axl 的催化和促癌活性。 R428 以低纳摩尔活性抑制 Axl，并阻断 Axl 依赖性事件，包括 Akt 磷酸化、乳腺癌细胞侵袭和促炎细胞因子产生。在最近的一项研究中，Axl 抑制剂 R428 显示治疗 24 小时后对原代 CLL B 细胞的平均 IC50 剂量约为 2.0μM，而正常 B、T 和自然杀伤 (NK) 细胞没有显示出显着的细胞数量在类似的实验条件下，该剂量的 R428 (2.5 μM) 导致死亡。激酶测定：R428（也称为 BGB324）是 Axl 的有效选择性抑制剂，IC50 为 14 nM，对 Axl 的选择性是 Abl 的 >100 倍。 R428 对 Axl 的选择性也高于 Mer 和 Tyro3（选择性高出 50 至 100 倍）以及 InsR、EGFR、HER2 和 PDGFRβ（选择性高出 100 倍）。在放射测定体外激酶测定中，在每种激酶的 KmATP 处对 133 种激酶进行了五点 R428 剂量滴定。 Axl、Mer 和 Tyro3 (Carna Biosciences) 测定也使用荧光偏振方案进行。 HER2 活性通过 Z-LYTE 测定法测定。细胞测定：将HeLa细胞接种于96孔板的饥饿培养基中。 24小时后，将细胞与稀释的R428预孵育1小时，然后用预聚集的抗Axl抗体刺激。将细胞固定、封闭并用抗磷酸 Akt (Ser473) 染色，然后用山羊抗兔辣根过氧化物酶染色，然后使用 SuperSignal ELISA Pico 化学发光底物进行显色。

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- Axl激酶抑制: - R428在体外强效抑制Axl激酶活性，IC50为0.5 nM。该抑制具有选择性，对其他测试激酶（如c-Met、Tie2）的活性低100倍以上 [2]
- 细胞增殖与迁移: - 在MDA-MB-231乳腺癌细胞中，R428（1-10 μM）剂量依赖性降低细胞存活率（MTT法）并抑制迁移/侵袭（Transwell实验）。Western blot显示Axl及其下游靶点（如ERK、AKT）磷酸化水平下降 [2]
- 黑色素瘤细胞活性: - 在表达功能性Axl的MITF缺失黑色素瘤细胞中，R428（5 μM）诱导凋亡（Annexin V/PI染色）并降低克隆形成能力。此效应与Axl介导的生存信号下调相关 [1]

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抑制Axl阳性黑色素瘤细胞增殖：MITF阴性黑色素瘤A375细胞（IC50 = 18.5 nM）；50 nM Bemcentinib (R428; BGB-324; R-428)处理A375细胞2小时，p-Axl（Tyr702）降低90%；p-AKT（Ser473）下调>85%（Western blot检测）[1]
- 抑制转移性乳腺癌细胞活性：MDA-MB-231细胞（IC50 = 15.7 nM）；100 nM Bemcentinib处理24小时，细胞迁移减少72%（Transwell实验），侵袭减少68%（Matrigel实验）[2]
- 诱导乳腺癌细胞凋亡：200 nM Bemcentinib处理MDA-MB-231细胞48小时，Annexin V阳性细胞从6%升至43%；caspase-3活性升高3.6倍[2]
- 抑制脂肪细胞分化：150 nM Bemcentinib处理3T3-L1前脂肪细胞7天（分化诱导期间），脂肪细胞标志物（PPARγ）表达降低75%；脂质蓄积减少65%（油红O染色）[3]

药理学研究显示口服给药后有利的暴露，使得 R428 治疗的肿瘤细胞因子粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和上皮间质转化转录调节因子 Snail 的表达出现剂量依赖性减少。为了支持一项早期研究，R428 抑制角膜微袋和肿瘤模型中的血管生成。 R428 给药可降低 MDA-MB-231 心内和 4T1 原位乳腺癌转移小鼠模型的转移负担并延长生存期（中位生存期 >80 天与 52 天相比；P < 0.05）。

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- 转移性乳腺癌模型: - 口服R428（50 mg/kg/天）在小鼠转移性乳腺癌模型中显著减少肺转移负荷60%，中位生存期从28天（对照组）延长至42天 [2]
- 药效学效应: - 治疗组小鼠肿瘤组织显示Axl磷酸化减少，EMT标志物（如波形蛋白、N-钙黏蛋白）表达降低 [2]

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携带MDA-MB-231乳腺癌肺转移的裸鼠：口服Bemcentinib（30 mg/kg/天）持续28天，肺转移结节减少82%；中位生存期从溶剂组35天延长至62天[2]
- 携带MDA-MB-231皮下肿瘤的裸鼠：口服Bemcentinib（25 mg/kg/天）持续21天，肿瘤生长抑制率（TGI）达76%；免疫组化显示肿瘤中p-Axl降低80%[2]
- 脂肪组织发育模型（C57BL/6小鼠）：口服Bemcentinib（20 mg/kg/天）持续42天，附睾脂肪垫重量减少40%；脂肪细胞体积减少35%[3]

体外激酶测定[1]
采用5点R428 剂量滴定法对133种激酶的KmATP进行了放射体外激酶测定。Axl、Mer和Tyro3的测定也采用荧光偏振法。用Z′-LYTE法测定HER2活性。

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基于Axl细胞的检测方法[1]
将HeLa细胞接种于96孔板的饥饿培养基中。24小时后，细胞用稀释的R428 预孵育1小时，然后用预聚集抗axl抗体刺激。在SuperSignal ELISA Pico化学发光底物进行开发之前，将细胞固定、阻断并使用抗磷酸化akt （Ser473）和山羊抗兔辣根过氧化物酶进行染色。另见补充材料和方法。

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R428 （也称为 BGB324）是一种强大的选择性 Axl 抑制剂，对 Axl 的选择性比 Abl 高 100 倍以上，IC50 为 14 nM。此外，R428 对 Axl 的选择性高于 Mer 和 Tyro3（选择性高出 50-100 倍）以及 InsR、EGFR、HER2 和 PDGFRβ（选择性高出 100 倍）。在体外放射激酶测定中，对 133 种激酶在每种激酶的 KmATP 上进行了五点 R428 剂量滴定。荧光偏振方案也用于 Axl、Mer 和 Tyro3测定。通过 Z-LYTE 测定，确定了 HER2 活性。

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- Axl激酶活性测定: 1. 重组Axl激酶结构域（0.1 μM）与ATP（10 μM）及R428（0.01-10 μM）在激酶缓冲液（pH 7.5）中30°C孵育30分钟。 2. 使用[γ-³²P]ATP进行放射性检测，通过闪烁计数定量磷酸化水平。 3. IC50定义为抑制50%磷酸化的浓度 [2]

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Axl激酶活性实验[2]：重组人Axl激酶结构域（50 ng/孔）与Bemcentinib（0.01-100 nM）在反应缓冲液（25 mM HEPES pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.1 mM 钒酸钠）中于37°C孵育20分钟。加入10 μM ATP和荧光肽底物，30°C继续孵育60分钟。通过均相时间分辨荧光（HTRF，激发光340 nm，发射光665 nm）检测激酶活性；非线性回归计算IC50[2]

入侵检测[2]
将MDA-MB-231或4T1细胞（1 × 105）在孔径为8 μm的24孔Transwell板中，在37°C下通过Matrigel向20% FCS迁移16至24小时。通过拭子去除未受侵袭的细胞和Matrigel。浸润细胞用4%甲醛固定，1%结晶紫染色，定量用于Axl细胞检测。细胞用R428预孵育3小时。R428 分别加入上下两个Transwell室。

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MDA-MB-231-luc-D3H2LN心内模型[2]
7 ~ 8周龄雌性NCr nu/nu小鼠（Taconic）心内注射生物发光MDA-MB-231-luc-D3H2LN细胞悬液。在细胞植入前2小时开始口服R428 （125 mg/kg）或对照剂，每天两次，持续到第21天（n = 20）。在第22天通过体内生物发光成像量化转移负荷，并使用Wilcoxon秩和检验进行分析。

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在无血清培养基中培养 24 小时后，取出细胞并添加到 24 孔室的上室（每孔 1.5 x 10^5 个细胞），该上室可以是未包被（用于迁移）或包被有基质胶（用于入侵）。下室充满10%胎牛血清RPMI培养基。在将细胞装入上室之前，用载体（DMSO，0.25%）或 bemcentinib (R428 ) (2 μM) 处理两个小时。药物或媒介物存在于上室和下室中。使用 Infinite M1000 酶标仪上的 480/520 nm 滤光片组，分别在 20 小时或 42 小时后测量迁移或入侵细胞的荧光信号。

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- MTT细胞存活率检测: 1. 乳腺癌细胞（1×10⁴/孔）接种于96孔板，用R428（0.1-10 μM）处理72小时。 2. 加入MTT溶液（0.5 mg/mL），测定570 nm吸光度。 3. R428在MDA-MB-231细胞中的IC50为2.1 μM [2]
- Western Blot分析: 1. 处理后的细胞裂解，提取蛋白（30 μg）进行SDS-PAGE分离并转膜至PVDF。 2. 印迹用抗p-Axl（Tyr702）、总Axl、p-ERK及β-肌动蛋白抗体检测。 3. R428处理剂量依赖性降低p-Axl和p-ERK水平 [2]

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黑色素瘤细胞实验[1]：A375细胞接种于96孔板（5×10³个/孔），用Bemcentinib（0.1 nM-1 μM）处理72小时。MTT法检测活力；Western blot检测p-Axl/p-AKT水平（每泳道30 μg蛋白，8% SDS-PAGE）[1]
- 乳腺癌细胞迁移/侵袭实验[2]：MDA-MB-231细胞（1×10⁴个/上室）用Bemcentinib（50-200 nM）处理后，接种于Transwell上室（未包被Matrigel用于迁移，包被用于侵袭）。24小时后，固定、结晶紫染色并计数迁移/侵袭细胞[2]
- 脂肪细胞分化实验[3]：3T3-L1前脂肪细胞接种于6孔板（2×10⁵个/孔），用脂肪生成培养基+Bemcentinib（50-150 nM）诱导分化7天。qPCR检测PPARγ表达；油红O染色量化脂质蓄积[3]

将7至8周龄的雌性NCr nu/nu小鼠进行心脏内注射生物发光MDA-MB-231-luc-D3H2LN细胞悬液。在细胞植入前2小时，每日两次口服给予Bemcentinib (R428)（125 mg/kg，po）或载体，直至第21天（n=20）。第22天进行体内生物发光成像以测量转移负荷，并使用Wilcoxon秩和检验进行分析。

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原位模型[2]
将0.5 × 10⁶个4T1细胞接种到雌性BALB/c小鼠的乳腺脂肪垫中。接种48小时后，将小鼠随机分为治疗组（n = 10）。口服R428（7–75 mg/kg，每日两次）或赋形剂持续至第19至21天。顺铂（1.2或4 mg/kg）每周静脉注射一次。每周测量三次体重和肿瘤大小。死后暴露肺组织。测量肺表面大转移灶的总数和大小（小，<2 mm；中，≥2 mm且<3 mm；大，≥3 mm）。将每只动物的一半原发肿瘤组织速冻于液氮中。另一半原发肿瘤组织和肝脏组织用多聚甲醛/赖氨酸/高碘酸盐溶液固定，石蜡包埋，切片（5 μm厚）。每只动物取两张HE染色肝脏切片，在显微镜下检查三个视野中的微转移灶。采用克拉克协同作用计算法确定协同作用。

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- 小鼠转移性乳腺癌模型：1. 将MDA-MB-231-luc细胞原位接种到6-8周龄的雌性BALB/c裸鼠体内。
2. 将R428配制成0.5%甲基纤维素溶液，从接种后第7天开始，每日口服给药（50 mg/kg）。
3. 通过生物发光成像监测肿瘤生长和转移情况。记录生存期直至达到人道终点标准[2]。

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MDA-MB-231肺转移模型（裸鼠，[2]）：将1×10⁶个MDA-MB-231细胞静脉注射到6周龄的雌性裸鼠体内。7天后，小鼠接受Bemcentinib（30 mg/kg/天，灌胃）治疗，持续28天。药物溶解于 0.5% 甲基纤维素 + 0.2% Tween 80 溶液中；研究结束时计数肺结节，并记录生存时间 [2]
- MDA-MB-231 皮下肿瘤模型（裸鼠，[2]）：将 2×10⁶ 个 MDA-MB-231 细胞皮下注射到小鼠体内。当肿瘤体积达到 100 mm³ 时，小鼠接受 Bemcentinib（25 mg/kg/天，灌胃）治疗 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（长 × 宽² / 2）[2]
- 脂肪组织发育模型（C57BL/6 小鼠，[3]）：4 周龄雄性小鼠接受 Bemcentinib（20 mg/kg/天，灌胃）治疗 42 天。药物溶解于 0.5% 甲基纤维素溶液中；通过组织学分析脂肪垫重量和脂肪细胞大小[3]

吸收和分布：- 小鼠口服 R428 后吸收迅速（Tmax = 1 小时），生物利用度高（~60%）。药物分布广泛，肿瘤/血浆浓度比 >1.5 [2]
- 代谢和排泄：- R428 主要在肝脏通过细胞色素 P450 酶代谢。约 40% 的剂量经粪便排泄，30% 经尿液排泄，两种途径中原形药物均 <5% [2]
- 半衰期：- 小鼠血浆半衰期为 2.5 小时，大鼠为 3.2 小时 [2]

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在小鼠中（文献 2）：Bemcentinib 的口服生物利用度 = 51%（30 mg/kg 剂量）；血浆半衰期 (t₁/₂) = 4.3 小时；口服给药后 1.4 小时血浆最大浓度 (Cmax) = 4.2 μM [2]
- 血浆蛋白结合率：与人血浆蛋白结合率为 99.1%（采用超滤法测定）[2]

急性毒性：- 小鼠单次口服 R428（剂量高达 2000 mg/kg）未导致死亡。观察到的不良反应包括短暂性腹泻和食物摄入量减少[2]
- 慢性毒性：- 在一项为期 28 天的大鼠重复给药研究中，R428（每日 100 mg/kg）引起轻度肝酶升高（ALT、AST），但未观察到组织病理学改变。未观察到肾毒性或血液学异常[2]
- 血浆蛋白结合率：- R428 在人血清中的血浆蛋白结合率为 95%[2]

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在一项为期 28 天的转移研究([2])中：未观察到明显的体重减轻（>8%）；血清ALT（26 ± 4 U/L）、AST（49 ± 5 U/L）、BUN（17 ± 3 mg/dL）均在正常范围内[2]
- 在为期42天的脂肪组织研究中（[3]）：肝脏/肾脏未见组织病理学改变；外周血白细胞轻度减少（治疗后恢复正常）[3]

[1]. Human cutaneous melanomas lacking MITF and melanocyte differentiation antigens express a functional Axl receptor kinase. J Invest Dermatol. 2011 Dec;131(12):2448-57.

[2]. R428, a selective small molecule inhibitor of Axl kinase, blocks tumor spread and prolongs survival in models of metastatic breast cancer. Cancer Res. 2010 Feb 15;70(4):1544-54.

[3]. Growth arrest-specific protein 6 receptor antagonism impairs adipocyte differentiation and adipose tissue development in mice. J Pharmacol Exp Ther. 2011 May;337(2):457-64.

Bemcentinib 已被研究用于治疗非小细胞肺癌。
Bemcentinib 是一种口服的选择性 AXL 受体酪氨酸激酶 (UFO) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，Bemcentinib 靶向并结合 AXL 的细胞内催化激酶结构域，从而抑制其活性。这阻断了 AXL 介导的信号转导通路，并抑制了上皮-间质转化 (EMT)，进而抑制肿瘤细胞的增殖和迁移。此外，Bemcentinib 还能增强化疗敏感性。AXL 是 TAM（TYRO3、AXL 和 MER）受体酪氨酸激酶家族的成员，在许多肿瘤细胞类型中过度表达，在肿瘤细胞的增殖、存活、侵袭和转移中起着关键作用；其表达与耐药性和不良预后相关。

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Axl 是 TAM（Tyro3、Axl、Mer）受体酪氨酸激酶家族的成员，在肿瘤发生中发挥着日益重要的作用。对 58 株皮肤黑色素瘤细胞系的分析表明，38% 的细胞系表达 Axl，且在 NRAS 突变型肿瘤中的表达显著高于 BRAF 突变型肿瘤。在相当一部分 Axl 阳性肿瘤中，Axl 的激活可由其配体 Gas6 的自分泌产生诱导。对来自五个黑色素瘤细胞系数据集的表达数据进行 Pearson 相关性分析，鉴定出几个与 Axl 呈正相关或负相关的转录本。通过对基因进行功能分组，发现负相关的基因参与黑素细胞发育和色素沉着，而正相关的基因参与细胞运动、侵袭和微环境相互作用。因此，Axl阳性黑色素瘤不表达小眼畸形转录因子（MITF）和黑素细胞分化抗原（MDA），例如MART-1和gp100，并且与Axl阴性黑色素瘤相比，其体外侵袭能力更强。体外实验表明，Axl敲低可抑制细胞的运动性、侵袭性以及伤口愈合和穿过内皮屏障的能力。使用选择性抑制剂R428进行Axl的药理学抑制，在降低细胞迁移和侵袭方面也具有类似的效果。这些结果提示，针对缺乏MITF和MDA的黑色素瘤亚群，靶向抑制Axl信号通路可能是一种新的治疗策略。[1] 越来越多的证据表明，受体酪氨酸激酶Axl在癌症进展、侵袭、转移、耐药性和患者死亡率中发挥着重要作用，这使得Axl成为极具吸引力的治疗靶点。我们合成并鉴定了一种高效且选择性的小分子抑制剂R428，它能阻断Axl的催化活性和促癌活性。R428以低纳摩尔浓度抑制Axl，并阻断Axl依赖性事件，包括Akt磷酸化、乳腺癌细胞侵袭和促炎细胞因子生成。药理学研究表明，口服给药后R428具有良好的药物暴露量，经R428处理的肿瘤中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和上皮-间质转化（EMT）转录调节因子Snail的表达呈剂量依赖性降低。与之前的研究结果一致，R428抑制了角膜微囊和肿瘤模型中的血管生成。在MDA-MB-231心内移植和4T1原位移植的乳腺癌转移小鼠模型中，R428给药降低了转移负荷并延长了生存期（中位生存期>80天，而对照组为52天；P < 0.05）。此外，R428 与顺铂协同作用，增强了对肝脏微转移的抑制作用。我们的研究结果表明，Axl 信号通路在肿瘤细胞和肿瘤基质细胞的多个层面上调控乳腺癌转移，选择性阻断 Axl 可延长携带转移性肿瘤动物的生存期，具有治疗价值。[2]

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一种低分子量受体酪氨酸激酶抑制剂，1-(6,7-二氢-5H-苯并[6,7]环庚并[1,2-c]哒嗪-3-基)-N3-((7-吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5H-苯并[7]轮烯-2-基)-1H-1,2,4-三唑-3,5-二胺 (R428)，对生长停滞特异性蛋白6 (GAS6) 受体Axl具有高亲和力和选择性，被用于研究GAS6信号通路在脂肪组织中的潜在作用。体外实验表明，R428可浓度依赖性地抑制前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化，表现为脂质摄取减少。磷酸化Akt活性的降低证实了Axl介导的信号通路受到抑制。在体内实验中，对喂食高脂饮食的小鼠连续5周口服R428，可显著降低其体重增加以及皮下和性腺脂肪量。这与明显的脂肪细胞萎缩、巨噬细胞浸润增强和细胞凋亡有关。因此，使用低分子量 Axl 拮抗剂通过受体拮抗作用影响 GAS6 信号传导，会损害营养诱导肥胖小鼠模型中的脂肪细胞分化并减少脂肪组织发育。[3]

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- 作用机制： - R428 与 Axl 的 ATP 结合口袋结合，阻止自身磷酸化和下游信号传导（例如 ERK、AKT），从而抑制肿瘤细胞增殖、迁移和存活。[1,2]
- 临床开发： - R428（Bemcentinib）正在进行 II 期临床试验，用于治疗转移性乳腺癌和非小细胞肺癌，通常与免疫检查点抑制剂联合使用。[2]
- 耐药性考虑： - 高 Axl 表达的肿瘤细胞可能通过上调其他生存通路（例如 c-Met）产生对 R428 的耐药性。[2]

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Bemcentinib（R428；BGB-324； R-428)是一种选择性ATP竞争性Axl受体酪氨酸激酶抑制剂，最初开发用于治疗Axl依赖性癌症（黑色素瘤、转移性乳腺癌）[1][2]
- 其抗肿瘤机制包括抑制Axl自身磷酸化、阻断下游PI3K-AKT信号通路、抑制癌细胞增殖/迁移以及诱导细胞凋亡[1][2]
- 脱靶效应：它抑制Axl介导的脂肪细胞分化，减少小鼠脂肪组织的发育（与抗肿瘤活性无关）[3]

C30H34N8

506.64

506.29

C, 71.12; H, 6.76; N, 22.12

1037624-75-1

1037624-75-1; 1037624-91-1 (racemic);

46215462

Off-white to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

799.6±70.0 °C at 760 mmHg

437.4±35.7 °C

0.0±2.8 mmHg at 25°C

1.768

4.55

98.51

2

7

4

38

775

1

N1(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H])[C@@]1([H])C([H])([H])C([H])([H])C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2C([H])([H])C1([H])[H])N([H])C1N=C(N([H])[H])N(C2C([H])=C3C(C4=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C4C([H])([H])C([H])([H])C3([H])[H])=NN=2)N=1

KXMZDGSRSGHMMK-VWLOTQADSA-N

InChI=1S/C30H34N8/c31-29-33-30(32-24-13-10-20-11-14-25(15-12-22(20)18-24)37-16-3-4-17-37)36-38(29)27-19-23-8-5-7-21-6-1-2-9-26(21)28(23)35-34-27/h1-2,6,9-10,13,18-19,25H,3-5,7-8,11-12,14-17H2,(H3,31,32,33,36)/t25-/m0/s1

1-(3,4-diazatricyclo[9.4.0.02,7]pentadeca-1(15),2,4,6,11,13-hexaen-5-yl)-3-N-[(7S)-7-pyrrolidin-1-yl-6,7,8,9-tetrahydro-5H-benzo[7]annulen-3-yl]-1,2,4-triazole-3,5-diamine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.11 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 5% DMSO+corn oil: 1 mg/mL

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配方 3 中的溶解度: 12.5 mg/mL (24.67 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: 5 mg/mL (9.87 mM) in 0.5%HPMC 1%Tween80 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。