| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Ras (inhibits SOS-mediated and EDTA-induced nucleotide exchange; binds to the effector binding groove between switch I and II, locking Ras in an open-like conformation) [1];
ARF6 (inhibits activation, blocks GPCR internalization) [1]; No IC50/Ki values reported for direct target binding; in cellular assays, inhibition of AT1R internalization IC50 = 10 μM, B2R internalization IC50 = 11 μM, β2AR internalization IC50 = 15 μM, AT1R-mediated ERK1/2 activation IC50 = 5 μM, EGFR-mediated ERK1/2 activation IC50 = 4 μM, EGFR-mediated Akt activation IC50 = 4-5 μM [1]. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Rasarfin 能有效抑制凝血剂诱导的 ERK1/2 信号通路（通过 GPCR）、MAPK 和 Akt 信号通路（通过 EGFR），并抑制缺血[1]。Rasarfin 抑制 ARF6 并抑制 GPCR 内化[1]。Rasarfin 可抑制 MDA-MB-231 细胞的增殖，Rasarfin 抑制 AP-2 募集至 β-arrestin2 以及受体内化，这两个过程均需要活性 ARF6[1]。Rasarfin 以剂量依赖的方式降低 MDA-MB-231 细胞的增殖[1]。
Rasarfin (50 μM) 可抑制 AngII 诱导的 AT1R 内化 90% 以上（BRET 和共聚焦显微镜），IC50 = 10 μM； Rasarfin抑制了BK诱导的β2R内吞作用（IC50 = 11 μM）和异丙肾上腺素诱导的β2AR内吞作用（IC50 = 15 μM）[1]。 Rasarfin不阻断β-arrestin1/2募集至质膜上的AT1R或B2R，但阻止了β-arrestin2随受体转运至内体，导致其在网格蛋白包被小窝处积累（共聚焦显微镜观察）[1]。 Rasarfin在AngII刺激后抑制ARF6活化（GST-GGA3-PBD下拉法）达70%以上；对ARF1无影响。在基于BRET的ARF活化检测中，Rasarfin（50 μM）阻断了AngII促进的信号达40-60%。显性负性ARF6-T27N的过表达模拟了Rasarfin对AT1R内吞动力学的影响[1]。 Rasarfin完全抑制了AngII、BK、异丙肾上腺素和EGF介导的ERK1/2磷酸化（Western blot），对AT1R和EGFR的IC50分别为5 μM和4 μM。它还抑制了EGF介导的Akt激活（IC50 4-5 μM）[1]。 激酶结合试验（KINOMEScan，384种激酶）显示出高选择性（S(10)=0.008）。 Rasarfin 不与 EGFR、BRAF、Akt、PI3K、MEK、ERK、GRKs、Src 或 AAK1 结合 [1]。 Rasarfin 可显著抑制 AngII 介导的 Ras 激活（GST-Raf1-RBD pull-down 和基于 BRET 的 Ras 生物传感器），浓度为 50 μM 时抑制效果尤为显著。在体外 mant-GTP 交换实验中，Rasarfin 以剂量依赖的方式抑制纯化的 H-Ras 上 SOS1 催化的核苷酸交换（10-50 μM），并且也抑制 EDTA 诱导的（Mg2+ 螯合）交换，表明其对 Ras 的作用不依赖于 GEF。该化合物还能抑制 K-Ras WT，但不能抑制 K-Ras-Y32A 突变体（其中 Tyr32 对结合至关重要）[1]。 Rasarfin 不抑制 AT1R 介导的 Gαq、Gαi3、Gα12/13、PKC、Rho 或 Rac 激活（BRET 传感器）[1]。 在 MDA-MB-231 乳腺癌细胞中，Rasarfin (10-50 μM) 可降低细胞增殖（IncuCyte 检测）并抑制 Ras 和 ARF6 活性（GST pull-down 检测）。在 A549 肺癌细胞中，Rasarfin (5-10 μM) 也能抑制细胞增殖。与阿霉素相比，细胞活力（MTT）受到的影响较小，没有明显的细胞毒性[1]。 与类似物的构效关系（SAR）表明，芳环上的氯取代基对于Ras抑制和MAPK阻断至关重要；化合物21.8（正丙基代替异丙基）保留了MAPK抑制作用，但失去了内化抑制作用，表明了功能选择性[1]。 |
| 酶活实验 |
GST下拉实验：将表达AT1R的HEK293细胞用AngII（1 μM）或EGF（100 ng/ml）刺激2分钟，裂解细胞，并与偶联于谷胱甘肽琼脂糖珠上的GST-GGA3-PBD（用于检测ARF6）、GST-Raf1-RBD（用于检测Ras）或GST-Rhotekin-RBD（用于检测Rho）孵育。洗脱结合的蛋白，并用抗HA、抗Ras、抗RhoA或抗ARF6抗体进行Western blot检测。激活程度以下拉蛋白/总蛋白比值进行量化[1]。
基于BRET的小GTP酶激活分析：将HEK293细胞转染生物传感器，该生物传感器由与RlucII融合的结合域（例如，ARF的GGA3-PBD、Ras的Raf1-RBD、Rho的Rhotekin-RBD、Rac的PAK-CRIB）以及rGFP-CAAX（质膜锚定蛋白）组成。经血清饥饿和化合物预处理后，用AngII（100 nM）刺激细胞，并使用腔肠素400a测量BRET（RlucII的发射波长为410/80 nm，rGFP的发射波长为515/30 nm）。分析了动力学和曲线下面积[1]。 体外mant-GTP交换实验：将纯化的H-Ras或K-Ras（1.66 μg）与DMSO或Rasarfin（0.1-50 μM）在2X交换缓冲液中于384孔板中孵育。每5秒记录一次mant-GTP荧光（激发波长360 nm/发射波长440 nm），持续30秒（基线），然后加入40 mM EDTA或纯化的SOS1（0.66 μg），每30秒测量一次荧光，持续30分钟。计算ΔRFU（添加后平均值减去添加前平均值）[1]。 激酶结合实验（KINOMEScan）：使用Eurofins/DiscoverX对10 μM Rasarfin与384种人类激酶进行结合分析。选择性评分 S(10) = 0.008（抑制率 >90% 的激酶比例）[1]。 分子动力学模拟：使用 MOE 将 Rasarfin 对接至 Ras-SOS 结合界面（PDB 1BKD）。选择最佳对接姿势，在 ACEMD 中使用 CHARMM36m 力场进行 3 × 4 μs 的分子动力学模拟，随后在 LigandScout 中进行药效团分析。此外，还进行了 3 × 2 μs 的自发缔合模拟，其中五个 Rasarfin 分子随机放置在 Ras 周围。Rasarfin 稳定结合于开关 I 和 II 之间的凹槽中，关键相互作用包括：酰胺羰基与 Asp57/Ile55 之间的氢键、与 Tyr40、Leu56 和 Thr20 的疏水接触，以及氯原子占据一个小空腔 [1]。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖试验（IncuCyte）：将 MDA-MB-231 或 A549 细胞（1500 个细胞/孔）接种于 96 孔板中，并用 DMSO 或 Rasarfin（0.1-50 μM）处理 96 小时。使用 IncuCyte S3 软件每 3 小时测量一次细胞汇合度，增殖以汇合度增加百分比表示 [1]。
细胞活力检测 (MTT)：将细胞用 Rasarfin 或阿霉素处理 24-72 小时，然后加入 10 μL 浓度为 5 mg/mL 的 MTT 溶液，孵育 4 小时，并在 590 nm 波长处测量吸光度 [1]。 ERK1/2 和 Akt 激活的 Western blot：将表达 AT1R、B2R、β2AR 或内源性 EGFR 的 HEK293 细胞进行血清饥饿处理，用 DMSO 或 Rasarfin (0.1-50 μM) 预处理 30 分钟，然后用 AngII (1 μM)、BK (1 μM)、异丙肾上腺素 (10 μM) 或 EGF (100 ng/ml) 刺激指定时间，用 Laemmli 缓冲液裂解细胞，并通过以下方法进行分离： SDS-PAGE电泳后，转移至硝酸纤维素膜，并用抗p-ERK1/2、抗ERK1/2、抗p-Akt和抗Akt抗体进行免疫印迹分析。使用ImageLab软件[1]进行密度分析。 受体和β-arrestin转运的共聚焦显微镜观察：表达AT1R-YFP或β-arrestin2-YFP以及Flag-AT1R/HA-B2R的HEK293细胞，用DMSO或Rasarfin（50 μM）预处理30分钟，然后用AngII（100 nM）或BK（1 μM）刺激15-30分钟，并使用蔡司LSM-510/710显微镜进行成像，激发波长为405 nm，发射波长为505-550 nm。受体内化通过质膜信号的消失和在内体中的积累进行评估[1]。 基于BRET的受体内化检测：表达AT1R-RlucII、B2R-RlucII或β2AR-RlucII以及rGFP-FYVE（内体锚定蛋白）的细胞经化合物预处理，用配体刺激，并测量BRET比值（rGFP/RlucII）。AT1R的IC50 = 10 μM；B2R的IC50 = 11 μM；β2AR的IC50 = 15 μM[1]。 β-arrestin/AP-2相互作用的BRET：使用表达β-arrestin2-RlucII和β2-adaptin-GFP10的细胞； Rasarfin (50 μM) 仅抑制 AngII 诱导的复合物形成约 20%，而 Barbadin (100 μM) 抑制率超过 50% [1]。 ARF 激活的 BRET：使用表达 GGA3-PBD-RlucII 和 rGFP-CAAX 的细胞；Rasarfin (50 μM) 抑制 AngII 促进的信号 40-60% [1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
明场显微镜观察显示，50 μM 的 Rasarfin 未引起 HEK293 细胞形态异常，表明其急性细胞毒性较低 [1]。在 MDA-MB-231 和 A549 细胞的细胞活力测定（MTT）中，10-50 μM 的 Rasarfin 轻微降低了细胞代谢活性，但其作用远小于阿霉素，表明其无强效细胞毒性 [1]。未报告全身毒性、LD50 或器官毒性数据 [1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Rasarfin（原化合物21）是通过基于内体BRET的AT1R转运分析，对约115,000个小分子进行高通量筛选而发现的。它是首个Ras和ARF6双重抑制剂。作用机制：Rasarfin结合于Ras蛋白上的SOS结合槽（位于开关I和II之间），将开关锁定在开放构象，从而阻止核苷酸交换和效应蛋白相互作用；同时抑制ARF6的激活，阻断网格蛋白介导的GPCR内吞作用。与催化型Ras抑制剂不同，Rasarfin并非靶向GTP结合口袋，而是靶向蛋白质-蛋白质相互作用界面[1]。
构效关系研究发现了具有功能选择性的类似物：化合物21.8（正丙基取代异丙基）保留了MAPK抑制活性，但失去了内吞抑制活性，表明ARF6和Ras抑制活性可以分离[1]。 Rasarfin是一种用于研究Ras和ARF6在GPCR信号传导、内吞作用和癌细胞增殖中作用的工具化合物。它尚未获得FDA批准，也未进入临床试验阶段[1]。 化学结构：文中未提供完整结构，但化合物21的结构如图1c所示；其类似物和CAS号674359-73-0与该化合物相对应[1]。 |
| 分子式 |
C23H24CLN3O3
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|---|---|
| 分子量 |
425.907964706421
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| 精确质量 |
425.15
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| 元素分析 |
C, 64.86; H, 5.68; Cl, 8.32; N, 9.87; O, 11.27
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| CAS号 |
674359-73-0
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| PubChem CID |
1396167
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
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| LogP |
4.6
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| tPSA |
65.8
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
623
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC(C)C(=O)N1CCN(CC1)C2=C(C=C(C=C2)NC(=O)C3=CC4=CC=CC=C4O3)Cl
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| InChi Key |
SRZCCUYFJZQLGE-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H24ClN3O3/c1-15(2)23(29)27-11-9-26(10-12-27)19-8-7-17(14-18(19)24)25-22(28)21-13-16-5-3-4-6-20(16)30-21/h3-8,13-15H,9-12H2,1-2H3,(H,25,28)
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| 化学名 |
N-[3-chloro-4-[4-(2-methylpropanoyl)piperazin-1-yl]phenyl]-1-benzofuran-2-carboxamide
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| 别名 |
Rasarfin
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~50 mg/mL (~117.4 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3479 mL | 11.7396 mL | 23.4791 mL | |
| 5 mM | 0.4696 mL | 2.3479 mL | 4.6958 mL | |
| 10 mM | 0.2348 mL | 1.1740 mL | 2.3479 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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