| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Ras (inhibits SOS-mediated and EDTA-induced nucleotide exchange; binds to the effector binding groove between switch I and II, locking Ras in an open-like conformation) [1];
ARF6 (inhibits activation, blocks GPCR internalization) [1]; No IC50/Ki values reported for direct target binding; in cellular assays, inhibition of AT1R internalization IC50 = 10 μM, B2R internalization IC50 = 11 μM, β2AR internalization IC50 = 15 μM, AT1R-mediated ERK1/2 activation IC50 = 5 μM, EGFR-mediated ERK1/2 activation IC50 = 4 μM, EGFR-mediated Akt activation IC50 = 4-5 μM [1]. Rasarfin targets both Ras and ARF6, two small GTPases involved in various cellular processes, including receptor trafficking and signaling. By inhibiting these targets, it blocks receptor internalization and affects downstream signaling pathways. The dual inhibition of Ras and ARF6 is a unique feature of this compound. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Rasarfin 能有效抑制凝血剂诱导的 ERK1/2 信号通路（通过 GPCR）、MAPK 和 Akt 信号通路（通过 EGFR），并抑制缺血[1]。Rasarfin 抑制 ARF6 并抑制 GPCR 内化[1]。Rasarfin 可抑制 MDA-MB-231 细胞的增殖，Rasarfin 抑制 AP-2 募集至 β-arrestin2 以及受体内化，这两个过程均需要活性 ARF6[1]。Rasarfin 以剂量依赖的方式降低 MDA-MB-231 细胞的增殖[1]。
Rasarfin (50 μM) 可抑制 AngII 诱导的 AT1R 内化 90% 以上（BRET 和共聚焦显微镜），IC50 = 10 μM； Rasarfin抑制了BK诱导的β2R内吞作用（IC50 = 11 μM）和异丙肾上腺素诱导的β2AR内吞作用（IC50 = 15 μM）[1]。 Rasarfin不阻断β-arrestin1/2募集至质膜上的AT1R或B2R，但阻止了β-arrestin2随受体转运至内体，导致其在网格蛋白包被小窝处积累（共聚焦显微镜观察）[1]。 Rasarfin在AngII刺激后抑制ARF6活化（GST-GGA3-PBD下拉法）达70%以上；对ARF1无影响。在基于BRET的ARF活化检测中，Rasarfin（50 μM）阻断了AngII促进的信号达40-60%。显性负性ARF6-T27N的过表达模拟了Rasarfin对AT1R内吞动力学的影响[1]。 Rasarfin完全抑制了AngII、BK、异丙肾上腺素和EGF介导的ERK1/2磷酸化（Western blot），对AT1R和EGFR的IC50分别为5 μM和4 μM。它还抑制了EGF介导的Akt激活（IC50 4-5 μM）[1]。 激酶结合试验（KINOMEScan，384种激酶）显示出高选择性（S(10)=0.008）。 Rasarfin 不与 EGFR、BRAF、Akt、PI3K、MEK、ERK、GRKs、Src 或 AAK1 结合 [1]。 Rasarfin 可显著抑制 AngII 介导的 Ras 激活（GST-Raf1-RBD pull-down 和基于 BRET 的 Ras 生物传感器），浓度为 50 μM 时抑制效果尤为显著。在体外 mant-GTP 交换实验中，Rasarfin 以剂量依赖的方式抑制纯化的 H-Ras 上 SOS1 催化的核苷酸交换（10-50 μM），并且也抑制 EDTA 诱导的（Mg2+ 螯合）交换，表明其对 Ras 的作用不依赖于 GEF。该化合物还能抑制 K-Ras WT，但不能抑制 K-Ras-Y32A 突变体（其中 Tyr32 对结合至关重要）[1]。 Rasarfin 不抑制 AT1R 介导的 Gαq、Gαi3、Gα12/13、PKC、Rho 或 Rac 激活（BRET 传感器）[1]。 在 MDA-MB-231 乳腺癌细胞中，Rasarfin (10-50 μM) 可降低细胞增殖（IncuCyte 检测）并抑制 Ras 和 ARF6 活性（GST pull-down 检测）。在 A549 肺癌细胞中，Rasarfin (5-10 μM) 也能抑制细胞增殖。与阿霉素相比，细胞活力（MTT法）受到的影响较小，且无明显的细胞毒性[1]。 与类似物的构效关系（SAR）研究表明，芳环上的氯取代基对于Ras抑制和MAPK阻断至关重要；化合物21.8（正丙基取代异丙基）保留了MAPK抑制活性，但失去了内吞抑制活性，表明其具有功能选择性[1]。 体外实验表明，Rasarfin可剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞的生长。与DMSO处理的细胞相比，Rasarfin在处理48小时和72小时后，可剂量依赖性地适度降低癌细胞的代谢活性。这些结果表明其具有作为抗癌药物的潜力。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
所提供的参考文献中并未详细介绍Rasarfin的体内研究。然而，作为一种Ras和ARF6的双重抑制剂，它在癌症模型中进行体内疗效研究具有重要意义。
|
| 酶活实验 |
GST下拉实验：将表达AT1R的HEK293细胞用AngII（1 μM）或EGF（100 ng/ml）刺激2分钟，裂解细胞，并与偶联于谷胱甘肽琼脂糖珠上的GST-GGA3-PBD（用于检测ARF6）、GST-Raf1-RBD（用于检测Ras）或GST-Rhotekin-RBD（用于检测Rho）孵育。洗脱结合的蛋白，并用抗HA、抗Ras、抗RhoA或抗ARF6抗体进行Western blot检测。激活程度以下拉蛋白/总蛋白比值进行量化[1]。
基于BRET的小GTP酶激活分析：将HEK293细胞转染生物传感器，该生物传感器由与RlucII融合的结合域（例如，ARF的GGA3-PBD、Ras的Raf1-RBD、Rho的Rhotekin-RBD、Rac的PAK-CRIB）以及rGFP-CAAX（质膜锚定蛋白）组成。经血清饥饿和化合物预处理后，用AngII（100 nM）刺激细胞，并使用腔肠素400a测量BRET（RlucII的发射波长为410/80 nm，rGFP的发射波长为515/30 nm）。分析了动力学和曲线下面积[1]。 体外mant-GTP交换实验：将纯化的H-Ras或K-Ras（1.66 μg）与DMSO或Rasarfin（0.1-50 μM）在2X交换缓冲液中于384孔板中孵育。每5秒记录一次mant-GTP荧光（激发波长360 nm/发射波长440 nm），持续30秒（基线），然后加入40 mM EDTA或纯化的SOS1（0.66 μg），每30秒测量一次荧光，持续30分钟。计算ΔRFU（添加后平均值减去添加前平均值）[1]。 激酶结合实验（KINOMEScan）：使用Eurofins/DiscoverX对10 μM Rasarfin与384种人类激酶进行结合分析。选择性评分 S(10) = 0.008（抑制率 >90% 的激酶比例）[1]。 分子动力学模拟：使用 MOE 将 Rasarfin 对接至 Ras-SOS 结合界面（PDB 1BKD）。选择最佳对接姿势，在 ACEMD 中使用 CHARMM36m 力场进行 3 × 4 μs 的分子动力学模拟，随后在 LigandScout 中进行药效团分析。此外，还进行了 5 个 Rasarfin 分子随机放置在 Ras 周围的自发结合模拟（3 × 2 μs）。 Rasarfin稳定地结合在开关I和II之间的凹槽中，其关键相互作用包括：酰胺羰基与Asp57/Ile55之间的氢键、与Tyr40、Leu56和Thr20的疏水接触，以及氯原子占据的一个小空腔[1]。体外实验将包括测量该化合物抑制纯化Ras和ARF6蛋白活性的能力，或阻断其与下游效应分子相互作用的能力。该化合物对受体内化的影响可通过细胞实验进行测量。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖试验（IncuCyte）：将 MDA-MB-231 或 A549 细胞（1500 个细胞/孔）接种于 96 孔板中，并用 DMSO 或 Rasarfin（0.1-50 μM）处理 96 小时。使用 IncuCyte S3 软件每 3 小时测量一次细胞汇合度，增殖以汇合度增加百分比表示 [1]。
细胞活力检测 (MTT)：将细胞用 Rasarfin 或阿霉素处理 24-72 小时，然后加入 10 μL 浓度为 5 mg/mL 的 MTT 溶液，孵育 4 小时，并在 590 nm 波长处测量吸光度 [1]。 ERK1/2 和 Akt 激活的 Western blot：将表达 AT1R、B2R、β2AR 或内源性 EGFR 的 HEK293 细胞进行血清饥饿处理，用 DMSO 或 Rasarfin (0.1-50 μM) 预处理 30 分钟，然后用 AngII (1 μM)、BK (1 μM)、异丙肾上腺素 (10 μM) 或 EGF (100 ng/ml) 刺激指定时间，用 Laemmli 缓冲液裂解细胞，并通过以下方法进行分离： SDS-PAGE电泳后，转移至硝酸纤维素膜，并用抗p-ERK1/2、抗ERK1/2、抗p-Akt和抗Akt抗体进行免疫印迹分析。使用ImageLab软件[1]进行密度分析。 受体和β-arrestin转运的共聚焦显微镜观察：表达AT1R-YFP或β-arrestin2-YFP以及Flag-AT1R/HA-B2R的HEK293细胞，用DMSO或Rasarfin（50 μM）预处理30分钟，然后用AngII（100 nM）或BK（1 μM）刺激15-30分钟，并使用蔡司LSM-510/710显微镜进行成像，激发波长为405 nm，发射波长为505-550 nm。受体内化通过质膜信号的消失和在内体中的积累进行评估[1]。 基于BRET的受体内化检测：表达AT1R-RlucII、B2R-RlucII或β2AR-RlucII以及rGFP-FYVE（内体锚定蛋白）的细胞经化合物预处理，用配体刺激，并测量BRET比值（rGFP/RlucII）。AT1R的IC50 = 10 μM；B2R的IC50 = 11 μM；β2AR的IC50 = 15 μM[1]。 β-arrestin/AP-2相互作用的BRET：使用表达β-arrestin2-RlucII和β2-adaptin-GFP10的细胞； Rasarfin (50 μM) 仅抑制 AngII 诱导的复合物形成约 20%，而 Barbadin (100 μM) 则抑制超过 50% [1]。 ARF 激活的 BRET：使用表达 GGA3-PBD-RlucII 和 rGFP-CAAX 的细胞；Rasarfin (50 μM) 抑制 AngII 促进的信号传导 40-60% [1]。 用 Rasarfin 处理 MDA-MB-231 等细胞，并测量细胞活力或代谢活性。其他检测方法可以测量其对受体内化和下游信号传导的影响。这些细胞检测对于表征该化合物的活性至关重要。 |
| 动物实验 |
将在小鼠异种移植模型中进行体内疗效研究，以评估雷沙芬的抗肿瘤活性。将测量Ras和ARF6抑制的药效学标志物。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
药代动力学特性将在临床前动物模型中测定。口服生物利用度、半衰期和清除率等参数对于解读体内疗效和毒性数据至关重要。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
明场显微镜观察显示，50 μM 的 Rasarfin 未引起 HEK293 细胞形态异常，表明其急性细胞毒性较低 [1]。在 MDA-MB-231 和 A549 细胞的细胞活力测定（MTT）中，10-50 μM 的 Rasarfin 可轻微降低代谢活性，但其作用远小于阿霉素，提示其无强效细胞毒性 [1]。目前尚无关于 Rasarfin 的全身毒性、LD50 或器官毒性的数据报道 [1]。毒理学研究将评估 Rasarfin 的安全性。作为一种关键信号蛋白的双重抑制剂，其潜在的脱靶效应和毒性需要仔细评估。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Rasarfin（原化合物21）是通过基于内体BRET的AT1R转运分析，对约115,000个小分子进行高通量筛选而发现的。它是首个Ras和ARF6双重抑制剂。作用机制：Rasarfin结合于Ras蛋白上的SOS结合槽（位于开关I和II之间），将开关锁定在开放构象，从而阻止核苷酸交换和效应蛋白相互作用；同时抑制ARF6的激活，阻断网格蛋白介导的GPCR内吞作用。与催化型Ras抑制剂不同，Rasarfin并非靶向GTP结合口袋，而是靶向蛋白质-蛋白质相互作用界面[1]。
构效关系研究发现了具有功能选择性的类似物：化合物21.8（正丙基取代异丙基）保留了MAPK抑制活性，但失去了内吞抑制活性，表明ARF6和Ras抑制活性可以分离[1]。 Rasarfin是一种用于研究Ras和ARF6在GPCR信号传导、内吞作用和癌细胞增殖中作用的工具化合物。它尚未获得FDA批准，也未进入临床试验[1]。 化学结构：文中未提供完整结构，但化合物21的结构如图1c所示；其类似物和CAS号674359-73-0与化合物21相对应[1]。 Rasarfin是一种用于研究Ras和ARF6在受体转运和信号传导中作用的研究工具。它也是开发靶向这些通路治疗药物的潜在先导化合物。它是通过一种新型筛选方法发现的。 |
| 分子式 |
C23H24CLN3O3
|
|---|---|
| 分子量 |
425.907964706421
|
| 精确质量 |
425.15
|
| 元素分析 |
C, 64.86; H, 5.68; Cl, 8.32; N, 9.87; O, 11.27
|
| CAS号 |
674359-73-0
|
| PubChem CID |
1396167
|
| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
|
| LogP |
4.6
|
| tPSA |
65.8
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
623
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CC(C)C(=O)N1CCN(CC1)C2=C(C=C(C=C2)NC(=O)C3=CC4=CC=CC=C4O3)Cl
|
| InChi Key |
SRZCCUYFJZQLGE-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C23H24ClN3O3/c1-15(2)23(29)27-11-9-26(10-12-27)19-8-7-17(14-18(19)24)25-22(28)21-13-16-5-3-4-6-20(16)30-21/h3-8,13-15H,9-12H2,1-2H3,(H,25,28)
|
| 化学名 |
N-[3-chloro-4-[4-(2-methylpropanoyl)piperazin-1-yl]phenyl]-1-benzofuran-2-carboxamide
|
| 别名 |
Rasarfin
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~50 mg/mL (~117.4 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3479 mL | 11.7396 mL | 23.4791 mL | |
| 5 mM | 0.4696 mL | 2.3479 mL | 4.6958 mL | |
| 10 mM | 0.2348 mL | 1.1740 mL | 2.3479 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|
|
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
