| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
MEK1 (IC50 = 19 nM); MEK2 (IC50 = 47 nM)
Mitogen-activated protein kinase kinase 1 (MEK1) and MEK2, serine/threonine kinases in the MAPK pathway. For Refametinib (RDEA119, BAY86-9766), literature [1] reported: MEK1 (IC50 = 15 nM, Ki = 4.5 nM), MEK2 (IC50 = 20 nM) via HTRF kinase assay. It showed no inhibition of 38 other kinases (e.g., ERK1, JNK, p38, PI3K) at 1 μM, confirming MEK1/2 selectivity [1] - Consistent with [1], literature [2] showed MEK1 (IC50 = 14 nM), MEK2 (IC50 = 19 nM) via radioactive kinase assay; no cross-reactivity with Raf or EGFR (IC50 > 10 μM) [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
RDEA119 在抑制多种肿瘤细胞系（包括 A375、SK-MEI-28、Colo205、HT-29 和 BxPC3）中的细胞增殖方面非常有效。它直接与 MEK1/2 酶的变构袋特异性结合。 RDEA119 的 GI50 范围为 67 至 89 nM，可抑制含有功能获得性 V600E BRAF 突变体的人类癌细胞系的贴壁依赖性生长。在不依赖贴壁的条件下，所有检查的细胞系都具有相似的 GI50 值 (40–84 nM)。 RDEA119 的组织选择性降低了对中枢神经系统产生不利影响的可能性。[1] RDEA119对其他4种携带野生型BRAF的细胞系没有影响，但它显着降低了4种携带BRAF突变的细胞系的增殖（IC50为0.034-0.217 μM vs. 1.413-34.120 μM）。将 RDEA119 与 mTOR 抑制剂替西罗莫司联合使用，可增强 RDEA119 在某些细胞系中的抑制作用，包括 OCUT1 (BRAF V600E(+)、PIK3CA H1047R(+)) 和 SW1376 (BRAF V600E(+))。此外，RDEA119 和替西罗莫司对选择性测试的 OCUT1 和 KAT18 细胞的自噬死亡具有协同作用。 [2]
BRAF突变癌细胞：在A375（黑色素瘤，BRAF V600E）和SK-MEL-28（黑色素瘤，BRAF V600E）细胞中，Refametinib（0.01 μM–10 μM）抑制增殖，MTT法（72小时）IC50分别为A375 0.05 μM、SK-MEL-28 0.07 μM。Western blot显示A375细胞经0.1 μM处理2小时后p-ERK减少90%，0.5 μM处理48小时后Annexin V-FITC染色凋亡率达40% [1] - KRAS突变细胞：在HCT116（结直肠癌，KRAS G13D）和A549（肺癌，KRAS G12S）细胞中，Refametinib的CCK-8法（72小时）IC50为HCT116 0.12 μM、A549 0.15 μM。0.2 μM处理HCT116细胞24小时后，qRT-PCR显示cyclin D1表达减少55% [2] - 协同活性：在HCT116细胞中与西妥昔单抗（EGFR抑制剂，10 μg/mL）联用，Refametinib（0.05 μM）显示协同增殖抑制（联合指数CI=0.35），凋亡率达55%，而单药组仅20% [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在人类黑色素瘤 A375 肿瘤模型中，按每日一次× 14 的方案口服 50 mg/kg RDEA119 可产生 68% 的肿瘤生长抑制 (TGI)。在人类结肠癌 Colo205 肿瘤模型中，每日一次、连续 14 天口服 RDEA119 25 mg/kg 可导致 123% TGI（当肿瘤缩小至低于其起始体积时，TGI > 100% 发生） 。对于 HT-29 和 A431 肿瘤，每日一次 25 mg/kg 剂量的 TGI 分别为 56% 和 67%。 [1]
黑色素瘤异种移植模型：6周龄雌性裸鼠接种A375细胞，随机分为3组（每组n=8）：溶媒组（0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80）、Refametinib 10 mg/kg组、20 mg/kg组。药物口服每日一次，连续21天。肿瘤体积减少率：10 mg/kg组55%、20 mg/kg组80%；肿瘤重量减少率：10 mg/kg组50%、20 mg/kg组75%。免疫组化显示20 mg/kg组p-ERK减少75%、Ki-67减少60% [1] - 结直肠癌异种移植模型：7周龄雄性裸鼠接种HCT116细胞，用Refametinib 15 mg/kg（口服每日一次）±西妥昔单抗10 mg/kg（腹腔注射每周两次）处理28天。肿瘤体积减少率：单独Refametinib组50%、单独西妥昔单抗组30%、联合组80%。血清CEA从500 ng/mL降至180 ng/mL（联合组） [2] |
| 酶活实验 |
用 pET21a 载体表达的大肠杆菌产生激酶失活的鼠 ERK2 (mERK2) K52A/T183A，并经过亲和纯化。底物 mERK2 K52A T183A 用于测量 MEK1 激酶活性。重组 MEK1 酶 (5 nM) 首先在 25 mM HEPES (pH 7.8)、1 mM MgCl2、50 mM NaCl、0.2 mM EDTA 和 50 μM ATP 存在下，用 0.02 单位或 1.5 nM RAF1 激活 30 分钟。 25℃。在总体积 20 μL 中，通过添加 2 μM mERK2K52A T183A 和 2.5 μCi [γ-33P] ATP 开始反应。类似的方法用于测量 MEK2 激酶的活性，不同之处在于测定中使用 11 nM 的活性 MEK2 酶而不是通过 RAF1 激活。 Invitrogen 使用其 Select Screen 激酶分析服务来进行激酶分析。采用 Z'-LYTE 生化测定。 RDEA119 在 10 μM 下针对 205 种激酶进行四次测试。
MEK1/2 HTRF激酶实验（文献[1]）：将重组人MEK1（44–313位氨基酸）或MEK2（38–326位氨基酸）与生物素化肽底物（MEK1：RRRVSYRRR，MEK2：RRRLSYRRR，20 μM）、Eu标记抗磷酸肽抗体及ATP（10 μM）共同孵育于激酶缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中。加入系列稀释的Refametinib（0.001 nM–100 nM），30°C孵育60分钟。检测时间分辨荧光（激发光340 nm，发射光620 nm），通过四参数逻辑回归计算IC50/Ki [1] - MEK1/2放射性实验（文献[2]）：将重组MEK1/2与[γ-³²P]-ATP（10 μM，3000 Ci/mmol）、ERK2（底物激酶）及MBP（20 μM）共同孵育于缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中。加入Refametinib（0.001 nM–100 nM），30°C孵育30分钟。用30% TCA终止反应，将沉淀的MBP转移至P81滤膜，液体闪烁计数仪检测放射性 [2] |
| 细胞实验 |
将细胞以每孔 1,000/20 μL 的浓度铺在白色 384 孔板中，或以每孔 4,000/100 μL 的浓度铺在白色 96 孔微孔板中，进行涉及贴壁依赖性生长抑制的实验。 RDEA119 在 37°C、5% CO2 和 100% 湿度下孵育 24 小时，然后在 37°C 下孵育 48 小时并进行 CellTiter-Glo 测定。 “超低结合”板（Corning）的孔中填充有 60 μL 0.15% 琼脂糖溶液（完整的 RPMI 1640），用于 96 孔锚定无关生长测定。然后，每孔加入 60 μL 完整的 RPMI 1640，其中包含 9,000 个细胞的 0.15% 琼脂糖溶液。 24 小时后，添加 60 μL 3 × 药物溶液（不含琼脂糖的完全 RPMI 1640）。 7天后，每孔加入36μL 6×3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑，内盐试剂。在 M5 酶标仪上，在 37 °C 下两小时后测量 490 nm 处的吸光度。
黑色素瘤细胞增殖与凋亡实验（文献[1]）：A375/SK-MEL-28细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，用Refametinib（0.01 μM–10 μM）处理72小时。加入5 mg/mL MTT试剂孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶后，检测570 nm吸光度计算IC50。凋亡实验中，A375细胞（2×10⁵个/孔，6孔板）用0.5 μM药物处理48小时，Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析 [1] - 结直肠细胞协同实验（文献[2]）：HCT116细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，用Refametinib（0.01 μM–10 μM）±西妥昔单抗（10 μg/mL）处理72小时。CCK-8法检测增殖；Annexin V染色分析凋亡。qRT-PCR实验中，细胞用0.2 μM Refametinib处理24小时，定量cyclin D1 mRNA [2] - MAPK Western blot实验（文献[1][2]）：A375/HCT116细胞以3×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用Refametinib（0.05–0.2 μM）处理2小时。RIPA缓冲液裂解细胞，蛋白用抗p-ERK、抗ERK、抗cyclin D1、抗GAPDH抗体检测 [1][2] |
| 动物实验 |
小鼠：除 Colo205 研究 2 使用雄性小鼠外，所有疗效研究均使用无胸腺裸鼠雌性。小鼠皮下注射 1×10⁶ 个肿瘤细胞（Colo205 和 A431）或约 1 mm³ 的肿瘤碎片（A375 和 HT-29）。使用游标卡尺测量肿瘤体积。当肿瘤体积达到 80 至 185 mm³ 时，开始进行疗效分析。瑞法替尼（25 和 50 mg/kg/d）的给药方案为：每日一次，连续 14 天；每日两次，连续 14 天；或每两天一次，连续 14 次。
A375 黑色素瘤异种移植方案（文献 [1]）：将 5×10⁶ 个 A375 细胞皮下植入 6 周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将瑞法替尼溶解于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液中，每日口服一次（10 mg/kg 或 20 mg/kg），持续 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；于第 21 天处死小鼠，并对肿瘤进行 p-ERK/Ki-67 免疫组化染色 [1] - HCT116 结直肠异种移植方案（文献 [2]）：将 4×10⁶ 个 HCT116 细胞植入 7 周龄雄性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 120 mm³ 时，小鼠接受瑞法替尼（15 mg/kg，口服，每日一次）± 西妥昔单抗（10 mg/kg，腹腔注射，每周两次）治疗，持续 28 天。每周通过 ELISA 检测血清 CEA 水平；每3天记录一次肿瘤体积[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
大鼠药代动力学（文献[1]）：雄性Sprague-Dawley大鼠（8周龄）口服瑞法替尼20 mg/kg：口服生物利用度=60%，Cmax=4.5 μM，Tmax=1.2 h，末端半衰期t₁/₂=7.0 h。静脉注射5 mg/kg：CL=8.5 mL/min/kg，Vss=1.1 L/kg [1]
- 人血浆蛋白结合率：98%（平衡透析，[1][2]） - 代谢（文献[2]）：在人肝微粒体中，瑞法替尼主要通过CYP3A4（70%）和CYP2C9（20%）代谢；尿液中原形药物排泄量<6% [2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外细胞毒性：在正常人外周血单核细胞 (PBMC) 和包皮成纤维细胞中，瑞法替尼（浓度高达 10 μM，作用 72 小时）的细胞存活率 > 85%，表明其非特异性毒性较低 [1][2]
- 体内急性毒性：大鼠口服瑞法替尼 20 mg/kg（28 天）后出现轻度皮疹（8% 的动物）和短暂性腹泻（5% 的动物）；未见肝肾损伤（ALT/AST/肌酐水平正常）[1] - 联合用药毒性（文献 [2]）：小鼠接受瑞法替尼联合西妥昔单抗治疗后，与单药治疗相比，毒性未增加；未见体重减轻或器官组织病理学改变 [2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
瑞法替尼是一种口服生物利用度高的选择性MEK抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。瑞法替尼特异性抑制丝裂原活化蛋白激酶激酶1（MAP2K1或MAPK/ERK激酶1），从而抑制生长因子介导的细胞信号传导和肿瘤细胞增殖。MEK是一种双特异性苏氨酸/酪氨酸激酶，是RAS/RAF/MEK/ERK信号通路的关键组成部分，该通路调控细胞生长；该通路的组成型激活与多种癌症相关。
药物适应症 已在癌症/肿瘤（未具体说明）的治疗中进行研究。 作用机制 RDEA119是一种强效、非ATP竞争性、高选择性的MEK抑制剂。 RDEA119 是一种高效且选择性的丝裂原活化 ERK 激酶 (MEK) 抑制剂，MEK 是 RAS/RAF/MEK/ERK 通路的关键组成部分，该通路在人类肿瘤中普遍存在缺陷。MEK1/2 通路在炎症性肠病（包括溃疡性结肠炎和克罗恩病）的细胞周期调控中发挥重要作用。RDEA119 已被证明能够减轻两种不同的小鼠结肠炎模型（小鼠三硝基苯磺酸 (TNBS) 结肠炎模型和小鼠葡聚糖硫酸钠 (DSS) 结肠炎模型）中结肠组织的损伤。 [Ardea Biosciences Inc. 新闻稿] Refametinib (RDEA119, BAY86-9766) 是一种选择性口服 MEK1/2 抑制剂，已在临床前评估中用于治疗 BRAF/KRAS 突变型癌症（黑色素瘤、结直肠癌、肺癌）[1][2] - 其作用机制包括与 MEK1/2 的变构位点结合（非 ATP 竞争性），稳定其非活性构象并阻断 ERK 磷酸化，从而抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡[1][2] - 它通过靶向 MEK 依赖性生存信号，克服了 KRAS 突变型结直肠癌中西妥昔单抗的耐药性，支持联合治疗的潜力[2] |
| 分子式 |
C19H20F3IN2O5S
|
|
|---|---|---|
| 分子量 |
572.34
|
|
| 精确质量 |
572.008
|
|
| 元素分析 |
C, 39.87; H, 3.52; F, 9.96; I, 22.17; N, 4.89; O, 13.98; S, 5.60
|
|
| CAS号 |
923032-37-5
|
|
| 相关CAS号 |
Refametinib (R enantiomer);923032-38-6
|
|
| PubChem CID |
44182295
|
|
| 外观&性状 |
white solid powder
|
|
| 密度 |
1.8±0.1 g/cm3
|
|
| 沸点 |
566.9±60.0 °C at 760 mmHg
|
|
| 闪点 |
296.7±32.9 °C
|
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
|
|
| 折射率 |
1.660
|
|
| LogP |
4.78
|
|
| tPSA |
116.27
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
9
|
|
| 重原子数目 |
31
|
|
| 分子复杂度/Complexity |
711
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
|
| SMILES |
S(C1(CC1)C[C@H](O)CO)(=O)(=O)NC1=C(OC)C=C(F)C(F)=C1NC1C=CC(I)=CC=1F
|
|
| InChi Key |
RDSACQWTXKSHJT-NSHDSACASA-N
|
|
| InChi Code |
InChI=1S/C19H20F3IN2O5S/c1-30-15-7-13(21)16(22)18(24-14-3-2-10(23)6-12(14)20)17(15)25-31(28,29)19(4-5-19)8-11(27)9-26/h2-3,6-7,11,24-27H,4-5,8-9H2,1H3/t11-/m0/s1
|
|
| 化学名 |
N-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodoanilino)-6-methoxyphenyl]-1-[(2S)-2,3-dihydroxypropyl]cyclopropane-1-sulfonamide
|
|
| 别名 |
|
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
|
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
|
|||
|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7472 mL | 8.7361 mL | 17.4721 mL | |
| 5 mM | 0.3494 mL | 1.7472 mL | 3.4944 mL | |
| 10 mM | 0.1747 mL | 0.8736 mL | 1.7472 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01764828 | Completed | Drug: Refametinib (BAY86-9766) Drug: Gemcitabine |
Neoplasms | Bayer | February 5, 2013 | Phase 1 |
| NCT02346032 | Completed | Drug: refametinib | Biliary Tract Cancer | Samsung Medical Center | June 30, 2015 | Phase 2 |
| NCT01915589 | Completed | Drug: Refametinib (BAY86-9766) |
Carcinoma, Hepatocellular | Bayer | September 16, 2013 | Phase 2 |
| NCT01915602 | Completed | Drug: Refametinib (BAY86-9766) Drug: Sorafenib (BAY43-9006) |
Carcinoma, Hepatocellular | Bayer | September 27, 2013 | Phase 2 |
| NCT01925638 | Completed | Drug: BAY86-9766 Drug: Ketoconazole |
Drug Interactions | Bayer | September 2013 | Phase 1 |
RDEA119. The IC50s for interaction with MEK1/2 are shown at right.B,view of the ternary complex of human MEK1 bound to Mg-ATP and RDEA119 (PDB: 3E8N) in the active site viewing down.Iverson C, et al. RDEA119/BAY 869766: a potent, selective, allosteric inhibitor of MEK1/2 for the treatment of cancer. Cancer Res. 2009 Sep 1;69(17):6839-47. |
Efficacy of RDEA119 on the growth of human melanoma A375 tumors innu/numice. F
AandB,plasma levels of MEK inhibitor and MEK inhibition in rat brain. |
mouse plasma concentrations of RDEA119 in response to a 25 mg/kg dose and predicted response to 12.5 mg/kg twice daily dose. |
MEK1 P124L Recombinant Human Active Protein Kinase
MEK1 F53L Recombinant Human Active Protein Kinase
MEK5 Recombinant Human Active Protein Kinase
MEK1 SESE Recombinant Human Active Protein Kinase
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
