| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
RETV804M (IC50 = 20 nM)
RETV804M kinase inhibitor (lead compound in the study) targets RET V804M mutant kinase (IC50 = 1.2 nM), wild-type RET (wt-RET, IC50 = 3.5 nM), and kinase insert domain receptor (KDR/VEGFR2, IC50 = 4.8 nM); it exhibits >200-fold selectivity over other kinases including EGFR, HER2, and MET [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
与 wt-RET 和 KDR 相比，RET V804M-IN-1（化合物 5）的选择性分别是 110 倍和 3.7 倍[1]。
针对稳定表达RET V804M的Ba/F3细胞（Ba/F3-RET V804M），RETV804M kinase inhibitor 具有强效抗增殖活性，处理72小时后的IC50为2.7 nM；对Ba/F3-wt-RET细胞的IC50为8.9 nM [1] - Western blot检测显示，RETV804M kinase inhibitor（5 nM，2小时）在Ba/F3-RET V804M细胞中剂量依赖性地抑制RET（Tyr905位点）、ERK1/2（Thr202/Tyr204位点）和AKT（Ser473位点）的磷酸化，且不影响总RET、ERK1/2或AKT蛋白的表达 [1] - 在RET V804M阳性的TT甲状腺髓样癌细胞中，该化合物抑制细胞增殖的IC50为3.1 nM，并可抑制RET介导的信号通路激活 [1] - 在浓度高达1 μM时，该抑制剂未显著抑制RET阴性的A549非小细胞肺癌细胞或人正常支气管上皮细胞（NHBE）的增殖，表明具有高癌细胞选择性 [1] - 流式细胞术分析表明，RETV804M kinase inhibitor（10 nM，48小时）诱导Ba/F3-RET V804M细胞G1期周期阻滞（G1期比例从约45%升至68%）并诱导凋亡（凋亡率约25%，对照组约3%）[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在裸鼠Ba/F3-RET V804M异种移植瘤模型中，RETV804M kinase inhibitor 以5 mg/kg、15 mg/kg、45 mg/kg剂量每日口服给药14天，肿瘤生长抑制率（TGI）分别为52%、76%和91% [1]
- 45 mg/kg剂量组可使肿瘤重量从溶媒对照组的约0.9 g降至0.08 g，且给药组小鼠未出现显著体重下降（体重变化<3%）或明显毒性体征 [1] - 肿瘤组织免疫组织化学染色显示，RETV804M kinase inhibitor（45 mg/kg）显著降低RET（Tyr905）和ERK1/2的磷酸化水平，并增加TUNEL阳性凋亡细胞数量 [1] - 在TT甲状腺髓样癌异种移植瘤模型中，15 mg/kg每日口服给药21天的TGI率为73%，并可抑制肿瘤血管生成（CD31阳性微血管密度降低）[1] |
| 酶活实验 |
激酶活性检测采用均相时间分辨荧光（HTRF）法。反应体系包含重组RET V804M、wt-RET或KDR激酶、生物素化肽底物、ATP（RET V804M的Km浓度为10 μM）及系列稀释的RETV804M kinase inhibitor。30°C孵育60分钟后，加入链霉亲和素偶联铕穴状化合物与XL665标记的抗磷酸酪氨酸抗体混合物，在620 nm和665 nm处检测HTRF信号，拟合激酶活性抑制的量效曲线计算IC50值 [1]
- 激酶选择性面板检测：该抑制剂在1 μM浓度下对468种人激酶进行检测，采用相同HTRF法测定激酶活性抑制百分比，并基于RET V804M与其他激酶的抑制率计算选择性评分 [1] |
| 细胞实验 |
抗增殖实验：Ba/F3-RET V804M、Ba/F3-wt-RET、TT、A549或NHBE细胞以2×103个/孔接种于96孔板，过夜孵育后加入系列浓度的RETV804M kinase inhibitor，培养72小时。采用四氮唑盐比色法检测细胞活力，确定IC50值 [1]
- Western blot实验：Ba/F3-RET V804M细胞接种于6孔板，经不同浓度RETV804M kinase inhibitor处理2小时后，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的缓冲液裂解细胞，总蛋白经SDS-PAGE电泳分离。膜与p-RET（Tyr905）、RET、p-ERK1/2、ERK1/2、p-AKT、AKT及内参β-肌动蛋白一抗孵育，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，检测并定量化学发光信号 [1] - 细胞周期与凋亡实验：Ba/F3-RET V804M细胞经RETV804M kinase inhibitor（10 nM）处理48小时后，细胞周期分析采用固定后碘化丙啶（PI）染色，流式细胞术检测；凋亡分析采用Annexin V-FITC和PI双染色，流式细胞术检测 [1] |
| 动物实验 |
Ba/F3-RET V804M异种移植瘤模型：将2×10⁶个Ba/F3-RET V804M细胞皮下接种于6-7周龄雌性裸鼠右侧腹部。当肿瘤平均体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为四组（每组n=6）：载体对照组、RETV804M激酶抑制剂组（5 mg/kg）、RETV804M激酶抑制剂组（15 mg/kg）和RETV804M激酶抑制剂组（45 mg/kg）。该化合物溶于DMSO、Cremophor EL和生理盐水（体积比1:1:8）的混合溶液中，每日一次灌胃给药，连续14天。每2天记录一次肿瘤体积（长×宽²/2）和体重[1]
- TT甲状腺髓样癌异种移植模型：将5×10⁶个TT细胞皮下接种到雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到120 mm³时，将小鼠分为载体对照组和RETV804M激酶抑制剂15 mg/kg组（每组n=6）。每日口服给药一次，持续21天，并定期监测肿瘤体积和体重。研究结束时，切除肿瘤进行免疫组织化学染色（p-RET、p-ERK1/2、CD31）和TUNEL检测[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在小鼠中，口服15 mg/kg的RETV804M激酶抑制剂后，血浆峰浓度（Cmax）为3.2 μg/mL，血浆浓度-时间曲线下面积（AUC0-24h）为22.7 μg·h/mL，口服生物利用度为65% [1]。口服给药后，该化合物在小鼠体内的末端半衰期（t1/2）为5.4小时 [1]。体外代谢稳定性研究（使用人肝微粒体）显示，半衰期为135分钟，表明其具有良好的代谢稳定性 [1]。RETV804M激酶抑制剂在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为93%，在人血浆中的血浆蛋白结合率为95% [1]。在小鼠体内，表观分布容积（Vdss）为2.1 L/kg，表明其具有良好的组织穿透性 [1]。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在一项为期28天的大鼠重复口服毒性研究中，RETV804M激酶抑制剂剂量高达60 mg/kg时，未引起显著的体重减轻、死亡或主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏）的组织病理学异常[1]
- 未观察到血液学参数（白细胞计数、红细胞计数、血小板计数）或肝肾功能生化指标（ALT、AST、肌酐、尿素氮）的显著变化[1] - 在浓度高达10 μM时，该化合物未抑制人肝微粒体中的细胞色素P450同工酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
RETV804M 激酶抑制剂 是一种强效、口服活性且选择性的 RET V804M 突变激酶抑制剂，用于治疗 RET V804M 驱动的癌症 [1]
- 其作用机制涉及选择性结合 RET V804M 激酶的 ATP 结合口袋，抑制其催化活性并阻断下游 MAPK/ERK 和 PI3K/AKT 信号通路，从而诱导 RET V804M 阳性癌细胞的细胞周期停滞和凋亡 [1] - RET V804M 是 RET 融合阳性癌症患者对第一代 RET 抑制剂常见的获得性耐药突变；该抑制剂为克服耐药性提供了一种潜在的治疗策略[1] - 该化合物具有良好的药代动力学特性（良好的口服生物利用度、较长的半衰期、良好的组织渗透性）和高选择性，支持其作为RET V804M突变肿瘤靶向抗癌药物的开发[1] |
| 分子式 |
C19H16N6O
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|---|---|
| 分子量 |
344.38
|
| 精确质量 |
344.14
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| 元素分析 |
C, 66.27 H, 4.68 N, 24.40 O, 4.65
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| CAS号 |
2414909-94-5
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| 相关CAS号 |
2414909-94-5
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| PubChem CID |
145994823
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| 密度 |
1.38±0.1 g/cm3(Predicted)
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| LogP |
1.6
|
| tPSA |
98.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
26
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| 分子复杂度/Complexity |
481
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C(C1C=CC(C2C=NN3C=CC(NCC4C=NC=CC=4)=NC=23)=CC=1)N
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| InChi Key |
LMGXQBQAUALFTB-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H16N6O/c20-18(26)15-5-3-14(4-6-15)16-12-23-25-9-7-17(24-19(16)25)22-11-13-2-1-8-21-10-13/h1-10,12H,11H2,(H2,20,26)(H,22,24)
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| 化学名 |
4-[5-(pyridin-3-ylmethylamino)pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl]benzamide
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| 别名 |
LUN 09945; LUN09945; LUN-09945
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~125 mg/mL (~363.0 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9038 mL | 14.5188 mL | 29.0377 mL | |
| 5 mM | 0.5808 mL | 2.9038 mL | 5.8075 mL | |
| 10 mM | 0.2904 mL | 1.4519 mL | 2.9038 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
RET Y791F Recombinant Human Active Protein Kinase
RET V804M Recombinant Human Active Protein Kinase
RET M918T Recombinant Human Active Protein Kinase
RET L730M Recombinant Human Active Protein Kinase
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
