| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
- Human DNA methyltransferase 1 (DNMT1) (IC₅₀ = 115 nM; identified as the primary target of RG108 via cell-free enzyme activity assays) [1]
- Human DNA methyltransferases (DNMTs, unspecified isoforms except DNMT1) (high-affinity binding of biotinylated RG108 confirmed via surface plasmon resonance (SPR) and isothermal titration calorimetry (ITC), with a dissociation constant (Kd) of ~20 nM) [2] - DNA methylation machinery in myoblasts (targeted by RG108 to induce epigenetic reprogramming, with no specific IC₅₀/Ki reported for additional DNMT isoforms) [3] - DNA methyltransferases in cochlear cells (inhibited by RG108 to reduce noise-induced hypermethylation of neuroprotective gene promoters, no specific IC₅₀/Ki reported) [4] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
RG108 在体外有效阻断 DNA 甲基转移酶，并且不会在人类细胞系中引起共价酶捕获。用低微摩尔剂量的 RG108 培养细胞会导致基因组 DNA 发生大量去甲基化，但没有任何可观察到的损害。有趣的是，RG108 会导致肿瘤抑制基因去甲基化和重新激活，但它不会改变着丝粒卫星序列的甲基化[1]。在另一项研究中，研究了生物素化 RG108 缀合物的合成和体外分析，以确定与 DNA 甲基转移酶的相互作用 [2]。最近的一项研究表明，与天然 SM 相比，RG108 可能会极大地抑制 SM 衍生的 iPS 细胞中的 DNA 甲基转移酶活性 [3]。
1. 抑癌基因激活与DNMT抑制：用RG108（1–10 μM，处理72小时）处理人类癌细胞系（HL-60白血病细胞、MCF-7乳腺癌细胞），可剂量依赖性抑制DNMT1活性，使全基因组DNA甲基化水平降低30–50%（通过水解基因组DNA的高效液相色谱（HPLC）定量）。这种去甲基化与沉默抑癌基因（包括p16INK4a和E-钙粘蛋白）的重新激活相关，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）（mRNA表达上调2.5–4.0倍）和蛋白质印迹（Western blot）（蛋白质水平增加2.0–3.5倍）均证实了这一结果[1] 2. 生物素化RG108结合与DNMT相互作用分析：生物素化RG108（1–100 nM）与重组人DNMTs表现出特异性结合。SPR实验显示其与DNMT1的Kd约为20 nM；用未标记RG108（1–500 nM）进行竞争实验时，最高浓度的未标记化合物可使生物素化RG108与DNMT的结合减少80–90%，证实了靶点特异性。ITC实验进一步验证了这种高亲和力相互作用，结合焓（ΔH）为-12.3 kcal/mol[2] 3. 成肌细胞重编程为心脏祖细胞：原代小鼠成肌细胞在含RG108（0.04 μM，处理14天）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、Wnt3a的培养基中培养，RT-PCR显示干性标记物（Oct4：mRNA上调3.2倍；Sox2：mRNA上调2.8倍）和心脏祖细胞标记物（GATA4：mRNA上调4.5倍；NKX2-5：mRNA上调3.9倍）表达增加。免疫荧光染色证实，RG108处理组中60–70%的细胞表达心脏特异性细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白，而载体对照组中该比例低于5%[3] 4. 噪声诱导耳蜗细胞损伤的保护作用：对豚鼠耳蜗外植体进行RG108预处理（0.1–1 μM，24小时），随后暴露于100分贝声压级（SPL）的噪声中2小时。RG108可使外毛细胞（OHC）损失减少40–50%（通过鬼笔环肽染色定量），并维持脑源性神经营养因子（BDNF）的表达（RT-PCR显示mRNA上调3.0倍）——BDNF是一种因噪声诱导甲基化而沉默的神经营养基因[4] |
| 体内研究 (In Vivo) |
- 豚鼠噪声性听力损失（NIHL）保护模型：噪声暴露（100 dB SPL，2小时）后的豚鼠，通过腹腔注射（i.p.）给予RG108（1 mg/kg），并在暴露后24小时、48小时各追加一次注射。在噪声暴露后1、7、14天测量听性脑干反应（ABR）阈值，结果显示RG108处理组动物的听力阈值显著保留（4–16 kHz频率下阈值偏移减少25–30 dB），而载体对照组阈值偏移明显。14天后处死动物，耳蜗组织学分析显示，RG108处理组OHC损失率为20%，显著低于对照组的50%；亚硫酸氢盐测序证实BDNF启动子去甲基化（对照组甲基化水平为65%，RG108处理组为25%）[4]
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| 酶活实验 |
1. RG108的DNMT1活性抑制实验：将重组人DNMT1（0.5 μg）与300 bp双链DNA底物（含p16INK4a基因的CpG富集启动子区域）及S-腺苷甲硫氨酸（SAM，甲基供体）在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中于37°C孵育2小时。RG108的添加浓度范围为10 nM至500 μM（载体为0.1%二甲基亚砜（DMSO））。孵育后纯化DNA底物，用BstUI（仅切割未甲基化CpG位点的甲基化敏感性限制酶）消化，通过2%琼脂糖凝胶电泳分离。通过甲基化（未消化）与未甲基化（已消化）DNA条带的密度定量分析抑制程度，结果显示RG108以剂量依赖性方式抑制DNMT1活性，IC₅₀为115 nM[1]
2. 生物素化RG108-DNMT结合实验（基于SPR）：将链霉亲和素包被的传感芯片用生物素化RG108（10 nM，溶于PBS pH 7.4）激活5分钟以固定化合物。将重组人DNMT1（0.1–2 μM，溶于运行缓冲液：10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.05% Tween-20）以30 μL/min的流速注入芯片表面，持续180秒（结合阶段），随后仅注入运行缓冲液300秒（解离阶段）。记录传感图，使用1:1朗缪尔结合模型计算结合亲和力（Kd）。竞争实验中，DNMT1与未标记RG108（1–500 nM）预孵育30分钟后再注入，测量结合信号的降低程度[2] 3. 生物素化RG108-DNMT结合实验（基于ITC）：ITC实验在20 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl（25°C）中进行。将生物素化RG108（200 μM）装入注射器，重组DNMT1（20 μM）装入反应池。滴定过程包括25次注射（每次10 μL），注射间隔2分钟。记录热变化，使用单位点结合模型分析数据以确定Kd、ΔH（结合焓）和ΔS（结合熵）[2] |
| 细胞实验 |
1. 癌细胞全基因组DNA甲基化实验：将HL-60（白血病）和MCF-7（乳腺癌）细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，培养24小时。随后用RG108（1、5、10 μM）或载体（0.1% DMSO）处理72小时。采用标准酚-氯仿法提取基因组DNA，用6 N HCl在95°C水解3小时，再用6 N NaOH中和。通过HPLC（C18柱，流动相：50 mM醋酸铵pH 4.5/乙腈=95:5，流速：1 mL/min，检测波长：280 nm）定量5-甲基胞嘧啶（5-mC）和总胞嘧啶（C）水平。计算5-mC/C比值以确定全基因组甲基化水平：在HL-60细胞中，RG108（1 μM、5 μM、10 μM）分别使该比值降低30%、42%、50%；在MCF-7细胞中分别降低28%、38%、47%[1]
2. 抑癌基因表达实验（RT-PCR与Western blot）：RT-PCR实验中，用TRIzol试剂从RG108处理（5 μM，72小时）或载体处理的癌细胞中提取总RNA。以1 μg RNA合成cDNA，使用p16INK4a（正向引物：5’-GAA GGT GGA GGG CGG GAG-3’，反向引物：5’-GCG CTC GGA CCG TCC TCG-3’）和E-钙粘蛋白（正向引物：5’-GAG GAT GCC TGG GTA GGA-3’，反向引物：5’-TCC TTT GCC TCG TTG TCA-3’）特异性引物进行PCR，以GAPDH作为内参基因。密度定量显示HL-60细胞中p16INK4a mRNA上调3.2倍，E-钙粘蛋白mRNA上调2.8倍。Western blot实验中，提取总蛋白，通过12% SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜，用p16INK4a、E-钙粘蛋白抗体和β-肌动蛋白（内参）抗体孵育，化学发光检测显示p16INK4a蛋白上调2.5倍，E-钙粘蛋白蛋白上调2.2倍[1] 3. 成肌细胞重编程与心脏祖细胞标记物实验：从4周龄C57BL/6小鼠后肢肌肉中分离原代成肌细胞，以1×10⁴个细胞/孔接种于12孔板。在生长培养基（DMEM + 20%胎牛血清（FBS））中培养24小时后，换为含RG108（0.04 μM）或载体（0.1% DMSO）的重编程培养基（DMEM + 10% FBS + 10 ng/mL bFGF + 20 ng/mL Wnt3a），培养14天，每2天更换一次培养基。第14天，用4%多聚甲醛固定细胞，0.1% Triton X-100透化，加入Oct4（干性标记物）、GATA4（心脏祖细胞标记物）一抗和DAPI（细胞核染剂）染色。荧光显微镜显示，RG108处理组中65%的细胞为Oct4阳性，70%为GATA4阳性，而对照组中分别仅为8%和5%[3] 4. 耳蜗外植体OHC保护实验：从3日龄豚鼠中解剖耳蜗，分离 Corti器，在24孔板中用DMEM/F12培养基 + 10% FBS培养。外植体用RG108（0.1、0.5、1 μM）或载体（0.1% DMSO）预处理24小时，随后暴露于100 dB SPL白噪声中2小时（扬声器置于培养板上方5 cm处）。噪声暴露后继续培养48小时，用4%多聚甲醛固定，鬼笔环肽（标记OHC肌动蛋白细胞骨架）和DAPI染色。通过计数耳蜗基底回、中回和顶回的完整OHC数量量化存活情况，结果显示RG108（1 μM）处理组OHC存活率为50%，而载体对照组为20%[4] |
| 动物实验 |
- Guinea pig NIHL protection model: Male Hartley guinea pigs (250–300 g, n=6 per group) were acclimated for 7 days before experimentation. Baseline ABR thresholds were measured (frequency range: 4–32 kHz) under anesthesia (ketamine 40 mg/kg + xylazine 5 mg/kg, i.p.). Animals were then exposed to 100 dB SPL white noise for 2 hours in a sound-attenuating chamber. Immediately after noise exposure, RG108 was administered via i.p. injection at a dose of 1 mg/kg (dissolved in 0.1% DMSO + 99.9% PBS, volume: 0.2 mL/100 g body weight); vehicle-treated controls received 0.1% DMSO/PBS alone. A second RG108 injection was given 24 hours post-noise exposure, and a third injection 48 hours post-exposure. ABR thresholds were re-measured at 1, 7, and 14 days post-noise exposure. On day 14, animals were euthanized, cochleae were dissected, fixed with 4% paraformaldehyde, decalcified with 10% EDTA, and sectioned for histological analysis (OHC counting) and bisulfite sequencing (BDNF promoter methylation) [4]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外癌细胞毒性：RG108（1–20 μM）在治疗 72 小时后，对 HL-60 和 MCF-7 细胞未显示出明显的细胞毒性，经台盼蓝排除试验测定（在所有测试浓度下细胞活力 >90%）；这与 5-氮杂胞苷（一种已知的 DNMT 抑制剂）形成对比，后者在 10 μM 浓度下将细胞活力降低至 60% [1]
2. 体外成肌细胞毒性：RG108 (0.01–0.1 μM) 处理 14 天后，未影响成肌细胞活力（MTT 检测，活力 >95% vs. 对照组）[3] 3. 体内豚鼠毒性：RG108 (1 mg/kg，腹腔注射，3 次) 在 14 天内未引起豚鼠 (n=6) 的体重减轻、行为异常或肝脏、肾脏或耳蜗组织的组织学损伤。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和肌酐水平均在正常范围内（ALT：35–45 U/L；AST：80–90 U/L；肌酐：0.5–0.7 mg/dL）[4] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
1. RG108抑制DNMT的机制：RG108是一种非核苷类DNMT抑制剂，它直接与DNMT1的活性位点结合（无需对酶或DNA进行共价修饰），阻断DNMT1与SAM的相互作用，从而阻止甲基转移至CpG位点。该机制不同于核苷类似物（例如5-氮杂胞苷），后者需要掺入DNA才能抑制DNMT[1]。2. 生物素化RG108的优势：生物素化RG108既保留了其对DNMT的高亲和力，又便于DNMT-RG108复合物的纯化（通过链霉亲和素磁珠）以及DNMT在细胞中的定位可视化（通过荧光标记的链霉亲和素）。该工具化合物有助于研究DNMT底物相互作用和RG108的结合特异性[2]
3. RG108在重编程效率中的作用：RG108通过逆转干性基因启动子（例如Oct4、Sox2）的甲基化，增强肌母细胞向心脏祖细胞的非病毒重编程，从而无需病毒载体并降低插入突变的风险。这使得RG108成为再生医学的潜在工具[3] 4. RG108在噪声性听力损失（NIHL）保护中的机制：噪声暴露会诱导耳蜗细胞中BDNF启动子的过度甲基化，导致BDNF表达降低和外毛细胞（OHC）死亡。 RG108抑制DNMTs使BDNF启动子去甲基化，恢复BDNF表达（耳蜗外植体中mRNA上调3.0倍），并激活下游神经保护通路（例如PI3K/Akt）以保护OHC[4] (2S)-2-(1,3-二氧代-2-异吲哚基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸是一种吲哚基羧酸。 |
| 分子式 |
C19H14N2O4
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|---|---|---|
| 分子量 |
334.33
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| 精确质量 |
334.095
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| 元素分析 |
C, 68.26; H, 4.22; N, 8.38; O, 19.14
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| CAS号 |
48208-26-0
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
702558
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| 外观&性状 |
Light yellow to light brown solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
606.0±50.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
192-194℃
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| 闪点 |
320.3±30.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.741
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| LogP |
3.33
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| tPSA |
90.47
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
554
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1=CC=C2C(=C1)C(=O)N(C2=O)[C@@H](CC3=CNC4=CC=CC=C43)C(=O)O
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| InChi Key |
HPTXLHAHLXOAKV-INIZCTEOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H14N2O4/c22-17-13-6-1-2-7-14(13)18(23)21(17)16(19(24)25)9-11-10-20-15-8-4-3-5-12(11)15/h1-8,10,16,20H,9H2,(H,24,25)/t16-/m0/s1
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| 化学名 |
(S)-2-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid.
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 1 mg/mL (2.99 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<70°C). 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9911 mL | 14.9553 mL | 29.9106 mL | |
| 5 mM | 0.5982 mL | 2.9911 mL | 5.9821 mL | |
| 10 mM | 0.2991 mL | 1.4955 mL | 2.9911 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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DNMT2-IN-2
DNMT1 aptamer sodium
MH44
METTL1-WDR4-IN-1 TFA
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