| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Histone deacetylase 3 (HDAC3) ( IC50 = 80 nM )
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| 体外研究 (In Vitro) |
采用基于底物的生化分析实验发现，RGFP966可抑制HDAC3，IC50为80 nM，且在浓度高达15μM时对其他HDACs无明显抑制作用。在皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL）细胞系上进行测试时，RGFP966可通过靶向HDAC3显著抑制细胞生长，其机制与促进细胞凋亡相关 [1]
体外活性：RGFP966 是一种缓慢启动/缓慢关闭、竞争性紧密结合 HDAC 抑制剂，对 HDAC3 的 IC50 为 0.08μM，在浓度高达 15μM 时对任何其他 HDAC 没有有效抑制作用。在进行蛋白质印迹分析之前，RGFP966 对两种 CTCL 细胞系进行 24 小时处理，导致 H3K9/K14、H3K27 和 H4K5 的乙酰化增加，但 H3K56ac 则没有。 RGFP966 由于与 DNA 损伤和 S 期进展受损相关的细胞凋亡增加而降低 CTCL（皮肤 T 细胞淋巴瘤）细胞系的细胞生长。 RGFP966 在药物治疗的第一个小时内导致 DNA 复制叉速度显着降低。激酶测定：脱乙酰化测定基于均相荧光释放测定。将纯化的重组酶与图中所示浓度的系列稀释抑制剂一起在标准 HDAC 缓冲液中孵育，预孵育时间范围为 0 至 3 小时。预孵育期后添加乙酰基-Lys(Ac)-AMC 底物（10 μM，对应于 HDAC1 和 HDAC3 的 Km）。让反应进行1小时。 1小时后添加终浓度为5mg/ml的胰蛋白酶肽酶显色剂，然后使用Tecan M200 96孔板读数器测量荧光发射。细胞测定：对细胞进行计数并以 26105 个细胞/mL 分装到 T25 (Corning) 烧瓶中。然后在第 0 小时用 DMSO 或 HDIs 处理细胞一次。处理后 0 小时、24 小时、48 小时和 72 小时从每个烧瓶中一式三份取出 100 ml 等分试样，分配到平底 96 孔板中，并向每个孔中添加10ml阿尔玛蓝。孵育 4 小时后，使用 Biotek Synergy MX 酶标仪测量荧光。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
- 在雄性C57BL/6J小鼠中，给予RGFP966后，对小鼠进行物体识别（ORM）和基于位置的物体识别（OLM）训练。结果表明，RGFP966可显著提高小鼠对新物体的偏好，呈剂量依赖性，并且可增强长期OLM记忆 [1]
- RGFP966可减轻大鼠心脏长时间低温保存引起的心脏功能障碍。它能抑制低温保存诱导的磷酸化（p）-MST1/MST1和p-YAP/YAP比值的升高，阻止总YAP蛋白表达的减少，并增加核YAP蛋白水平。还能增加超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶的表达，抑制促凋亡蛋白Bax和裂解的半胱天冬酶-3的过表达，增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，减少心肌细胞凋亡。其机制可能涉及YAP通路的失活 [2] RGFP966 处理（10 毫克/千克）可增强物体记忆的长期记忆。 RGFP966（3 或 10 mg/kg，皮下注射）可促进灭绝并防止可卡因条件性位置偏好的恢复。 |
| 酶活实验 |
采用基于底物的生化分析实验检测RGFP966对HDACs的抑制作用。制备反应体系，将HDAC3酶、底物和不同浓度的RGFP966加入反应孔中，在合适温度下孵育一段时间，然后通过特定的检测方法（文献未描述具体检测方法）检测反应产物，从而得到RGFP966对HDAC3的抑制曲线并计算IC50值 [1]
乙酰化测定源自均相荧光释放方法。经过 0 至 3 小时的预孵育期后，将纯化的重组酶与按图中所示浓度连续稀释的抑制剂一起在标准 HDAC 缓冲液中孵育。预孵育后，添加乙酰基-Lys(Ac)-AMC 底物（10 μM，对应于 HDAC1 和 HDAC3 的 Km）。给予反应一个小时以继续进行。以 5 mg/ml 的终浓度添加胰蛋白酶肽酶显色剂一小时后，使用 Tecan M200 96 孔板读数器测量荧光发射。 |
| 细胞实验 |
对于皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL）细胞系：将细胞在合适的培养基中培养并接种到培养板中。细胞贴壁后，加入不同浓度的RGFP966。在一段时间内监测细胞生长情况，并使用相关方法评估细胞活力。此外，通过检测凋亡标志物等技术评估其对细胞凋亡的影响 [1]
以 26105 个细胞/mL 对细胞进行计数并分入 T25 (Corning) 烧瓶中。此后，在第 0 小时用 DMSO 或 HDIs 处理细胞一次。处理后 0、24、48 和 72 小时，从每个烧瓶中一式三份取出 100 ml 等分试样，分配到平底 96 孔板中，并向每个孔中添加 10 ml 阿尔玛蓝。使用 Biotek Synergy MX 酶标仪，在 4 小时孵育期后测量荧光。 |
| 动物实验 |
小鼠：N171-82Q转基因小鼠饲养于笼内，自由摄食饮水，并遵循典型的12小时光照/黑暗循环（从早上6:00开始）。从8周龄开始，小鼠每周皮下注射3次RGFP966（10或25 mg/kg），持续10周。RGFP966溶于75%聚乙二醇200/25%乙酸钠溶液（6.25 mM）中；对照组小鼠注射等体积的药物溶剂。每周记录两次小鼠体重。18周龄时，在最后一次注射后6小时，用过量异氟烷麻醉处死小鼠。取出脑组织后，进行4%多聚甲醛的心内灌注固定，或分离皮层和纹状体用于基因表达实验。
大鼠：本实验使用33只成年雄性Sprague Dawley大鼠，体重在275至350克之间。每日训练结束后，立即对每只大鼠进行全身注射，注射药物为RGFP966（10 mg/kg，皮下注射）或载体（注射体积与药物处理相似）。 - 在记忆相关实验中：使用雄性C57BL/6J小鼠，并给小鼠注射RGFP966。然后，对小鼠进行ORM和OLM测试训练。具体训练方法为：首先，让小鼠熟悉实验环境；然后在测试区域放置一个熟悉的物体，让小鼠探索；最后放置一个新物体，记录小鼠探索新物体和熟悉物体的时间，以计算其对新物体的偏好。在 OLM 测试中，改变物体位置，记录小鼠的探索时间，以评估其长期 OLM 记忆。设置不同剂量的 RGFP966，并根据测试结果分析剂量反应关系 [1] - 在心脏功能障碍实验中：将大鼠心脏置于含或不含 RGFP966 的 Celsior 溶液中低温保存 12 小时，随后进行 60 分钟的再灌注。评估再灌注期间的血流动力学参数。采用蛋白质印迹法检测 MST1 和 YAP 的表达和磷酸化水平，并采用 TUNEL 法检测细胞凋亡 [2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
DAC3是HDAC家族的一种亚型，在DNA转录调控中发挥重要作用。HDAC参与多种生物学过程，例如DNA修复、复制、转录和染色质结构。RGFP966是一种高效且选择性的HDAC3抑制剂，可通过调节HDAC3的功能，在相关疾病的治疗中具有潜在的应用价值[1]。N-(2-氨基-4-氟苯基)-3-[1-(3-苯基丙-2-烯基)-4-吡唑基]-2-丙烯酰胺是一种芳香酰胺和芳香胺。
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| 分子式 |
C21H19FN4O
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|---|---|---|
| 分子量 |
362.4
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| 精确质量 |
362.154
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| 元素分析 |
C, 69.60; H, 5.28; F, 5.24; N, 15.46; O, 4.41
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| CAS号 |
1357389-11-7
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
56650312
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| 外观&性状 |
White solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
630.4±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
335.0±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.607
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| LogP |
3.95
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| tPSA |
76.43
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
532
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(NC1=CC=C(F)C=C1N)/C=C/C2=CN(C/C=C/C3=CC=CC=C3)N=C2.[E]
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| InChi Key |
BLVQHYHDYFTPDV-VCABWLAWSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H19FN4O/c22-18-9-10-20(19(23)13-18)25-21(27)11-8-17-14-24-26(15-17)12-4-7-16-5-2-1-3-6-16/h1-11,13-15H,12,23H2,(H,25,27)/b7-4+,11-8+
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| 化学名 |
(E)-N-(2-amino-4-fluorophenyl)-3-[1-[(E)-3-phenylprop-2-enyl]pyrazol-4-yl]prop-2-enamide
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| 别名 |
RGFP966; RGFP-966; 1396841-57-8; (E)-N-(2-amino-4-fluorophenyl)-3-(1-cinnamyl-1H-pyrazol-4-yl)acrylamide; RGFP 966; RGFP-966; (E,E)-RGFP966; CHEMBL4078477; RGFP 966
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30mg/mL 配方 4 中的溶解度: 7.69 mg/mL (21.22 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7594 mL | 13.7969 mL | 27.5938 mL | |
| 5 mM | 0.5519 mL | 2.7594 mL | 5.5188 mL | |
| 10 mM | 0.2759 mL | 1.3797 mL | 2.7594 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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HDAC6-IN-18
Mz325
WW437
PI3Kα/HDAC6-IN-1
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COA
粤公网安备 44011102003439号
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