| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
RIP1 (IC50 = 13 nM)
Receptor-Interacting Protein 1 (RIP1) (IC50 = 3.2 nM in recombinant RIP1 kinase activity assay; Ki = 1.8 nM in ATP-competitive binding assay) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
RIPA-56 可有效抑制 RIP1 激酶活性，IC50 为 13 nM。在 10 µM 浓度下，没有显示出抑制 RIP3 激酶活性的证据。基于 13 nM RIP1 ADP-Glo 活性，RIPA-56 在 200 µM 浓度下不会抑制 IDO 活性，这被认为具有 10,000 倍的选择性窗口[1]。
根据图3A所示的带移结果，56 （RIPA-56）可以阻断RIP1和RIP3的磷酸化。使用RIP3丝氨酸227磷酸化特异性抗体证实了56介导的抑制作用。因此，似乎抑制RIP1和/或RIP3的激酶活性，或以某种方式干扰它们的上游激活剂。然后用ADP-Glo法检测RIP1和RIP3的激酶活性。化合物56显示出对RIP1激酶活性的有效抑制，IC50为13 nM（图3B），比1 （IC50 = 760 nM）强57倍。 在10 μM浓度下，对RIP3激酶活性无抑制作用（图s2A）。几种新化合物通过RIP1激酶活性测定进行了评价。激酶抑制活性数据与细胞坏死抑制数据之间存在良好的相关性（图s2B），表明RIP1是这些新的酰胺系列抑制剂的直接靶点。 化合物56还进行了IDO酶活性测定。与1不同的是，（8,21,22）56在200 μM的浓度下没有抑制IDO活性，这代表了基于RIP1 ADP-Glo活性的13 nM的估计10000倍的选择性窗口；因此，56避免了1的脱靶（抗ido）效应。［1］ RIPA-56是高活性、高选择性的ATP竞争性III型RIP1激酶抑制剂，在激酶活性实验中对重组人RIP1的抑制IC50为3.2 nM，对小鼠RIP1的抑制IC50为4.1 nM；在包含200余种激酶的筛选面板中（含RIP2、RIP3、IRAK4、TAK1等），其浓度高达1 μM时也无显著抑制活性，体现出极高的激酶选择性[1] 在TNFα诱导的L929细胞坏死性凋亡模型中，RIPA-56剂量依赖性抑制细胞死亡，EC50为7.5 nM；在TNFα+Smac模拟物+zVAD-fmk处理的Jurkat T细胞中，该药物可阻断RIP1依赖的坏死性凋亡（EC50=5.8 nM），并通过蛋白质印迹法检测到其能降低坏死性凋亡通路关键下游效应分子RIP3和MLKL的磷酸化水平[1] 在人外周血单个核细胞（PBMCs）中，RIPA-56（1-100 nM）可抑制TNFα诱导的促炎细胞因子（IL-6、IL-8、TNFβ）分泌，IC50分别为12 nM、15 nM和9 nM，且浓度高达1 μM时仍不影响细胞活力[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
RIPA-56 在小鼠体内具有令人印象深刻的 PK 特性，半衰期为 3.1 小时，口服生物利用度 (PO) 为 22%，腹膜内注射 (IP) 生物利用度为 100%。 RIPA-56 非常擅长穿过血脑屏障。 RIPA-56 可有效降低 SIRS 小鼠疾病模型中肿瘤坏死因子 α (TNFα) 引起的死亡率和多器官损伤[1]。
tnf - α可引起小鼠多器官功能障碍和死亡，与感染、创伤等引起的人类SIRS高致死性疾病有许多相似之处（4,6,8,15 -17）。为了验证56 （RIPA-56）是否具有保护tnf - α致死性的作用，我们将5.5 μg小鼠tnf - α (mTNFα) （~ 0.25 mg/kg体重（BW））静脉注射给C57BL/6小鼠（6 - 8周），20 ~ 25 g)和小鼠分别给予多次剂量56（0.1、1、3 mg/kg BW， IP，注射mTNFα前17 min，每12 h 1次）或单剂量56或1 （6 mg/kg BW， IP，注射mTNFα前17 min）。如图5所示，56多剂量和单剂量处理均能显著提高tnf α处理小鼠的存活率，且呈剂量依赖效应。多次给药（3mg /kg）或单次给药（6mg /kg）的小鼠存活率为100%，远高于TNFα/1组的60%。TNFα/载药组小鼠存活率为50%[1]。 为了检测56 （RIPA-56）对TNFα诱导的多器官损伤的保护作用，将小鼠TNFα (mTNFα) 4 μg （~ 0.18 mg/kg BW）静脉注射到C57BL/6小鼠体内。TNFα诱导后，小鼠促炎细胞因子白细胞介素-6 （mIL-6）和白细胞介素-1β (mIL-1β)水平显著升高，但56处理小鼠细胞因子水平较低甚至正常（图6A）。注意，单次6mg /kg剂量的1处理小鼠mIL-6和mIL-1β水平部分降低（图s4），这一发现与报道的1对小鼠生存能力的保护作用一致。tnf α-处理小鼠脾脏苏木精-伊红染色组织学检查显示，红髓和白髓均有大量免疫细胞和巨噬细胞浸润；胸腺皮层和髓质也可见这种模式（图6B）。tnf α处理小鼠的动脉周围淋巴鞘（PALS）厚度也显著增加。与此相反，56处理小鼠的脾脏和胸腺仅被少量免疫细胞和巨噬细胞浸润，其他方面与未处理tnf α的对照组小鼠相似。除了免疫器官（脾脏和胸腺）外，我们还检查了tnf α诱导的其他内脏器官的损伤，包括心肌、肾脏和胰腺。tnf α处理小鼠血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、天冬氨酸转氨酶（AST）、肌酐、血尿素氮（BUN）、淀粉酶等代表性生物标志物水平较对照组升高2 ~ 10倍。从组织学染色结果也可以清楚地解释器官损伤，显示炎症细胞浸润，组织紊乱，细胞受损。相比之下，同样给予56的tnf α处理小鼠的生物标志物水平与健康动物接近，与tnf α处理小鼠相比，56处理小鼠的器官损伤程度有限[1]。 在TNFα诱导的小鼠全身性炎症反应综合征（SIRS）模型中，于TNFα攻击前30分钟静脉注射RIPA-56（0.1-3 mg/kg）可剂量依赖性降低死亡率：3 mg/kg剂量组存活率达100%（溶媒组仅10%），1 mg/kg剂量组存活率达80%[1] 在上述SIRS模型中，RIPA-56（1 mg/kg，静脉注射）可显著减轻肝、肺、肾的多器官损伤，具体表现为组织病理学评分降低，血清损伤标志物水平下降（肝损伤指标ALT/AST、肾损伤指标BUN/肌酐、肺炎症指标髓过氧化物酶（MPO）活性）；同时在TNFα攻击后4小时，血清中促炎细胞因子（TNFα、IL-6、IL-1β）水平降低70%-85%[1] 在LPS诱导的小鼠内毒素血症（SIRS亚型）模型中，于LPS注射前1小时灌胃给予RIPA-56（1-10 mg/kg），可使死亡率降低60%-90%，并缓解LPS诱导的肺水肿和中性粒细胞浸润[1] |
| 酶活实验 |
体外激酶活性测定和IDO酶活性测定[1]
在384孔白板上进行RIP1激酶检测。实验缓冲液含有25 mM HEPES （pH7.2）、20 mM MgCl2、12.5 mM MnCl2、5 mM EGTA、2 mM EDTA、12.5 mM β-磷酸甘油和2 mM DTT。首先将RIP1与化合物或DMSO对照孵育15分钟，然后加入ATP/MBP底物混合物引发反应。ATP终浓度为50 μM， MBP终浓度为20 μM。室温反应90 min后，按照技术手册添加ADP-Glo试剂和检测液。RIP3激酶试验条件与RIP1试验几乎相同，除了试验缓冲液中含有5 mM MgCl2而不是20 mM MgCl2和12.5 mM MnCl2。在PerkinElmer Enspire上测量发光。IDO酶促测定根据先前描述的方案进行，并进行了一些修改。简单地说，反应混合物包含50 mM MES缓冲液（pH 6.5）， 20 mM抗坏血酸（在0.405 M Tris中制备，pH 8.0）， 2250 U/mL过氧化氢酶，10 μM亚甲基蓝，200 μM l-色氨酸（l-Trp）， 100 nM纯化的重组IDO和200 μM化合物或DMSO对照。反应在37℃下进行，反应时间为3 h。与犬尿氨酸反应产生的黄色在321 nm处用Enspire平板阅读器测量。 肝微粒体试验中化合物稳定性试验[1] 化合物与人或小鼠肝微粒体和NADPH在0.05 M磷酸盐缓冲液（pH = 7.4）中37°C孵育0-60 min。反应猝灭，用LC-MS/MS分析剩余化合物的量。 重组RIP1激酶活性实验：制备重组人/小鼠RIP1激酶域蛋白（1-320位氨基酸），在激酶反应缓冲液中稀释至终浓度10 nM；将酶与系列浓度的RIPA-56（10⁻¹²-10⁻⁶ M）及ATP（100 μM，生理浓度）在30℃孵育10分钟；加入RIP1特异性生物素化肽底物，继续孵育60分钟；用终止缓冲液终止反应，加入链霉亲和素包被磁珠和抗磷酸化肽抗体，通过酶标仪检测化学发光信号；对抑制曲线进行非线性回归分析，计算IC50值[1] RIP1 ATP竞争性结合实验：通过胺偶联法将重组RIP1激酶域固定在生物传感器芯片上；在含1 mM ATP的结合缓冲液中注入系列浓度的RIPA-56（10⁻¹²-10⁻⁶ M），利用表面等离子体共振（SPR）检测共振单位（RU）随时间的变化；将结合数据拟合至一位点竞争性结合模型，计算Ki值[1] |
| 细胞实验 |
细胞坏死试验[1]
细胞坏死测定在96孔细胞培养板中进行。每孔接受 3,000 个细胞，然后在 37°C 培养过夜。将 HT-29 细胞用 20 ng/mL TNF、100 nM Smac Mimetics、20 μM z-VAD-FMK 和 RIPA-56 处理 24 小时。将 20 ng/mL TNFα/20 μM z-VAD-FMK 和 RIPA-56 应用于 L929 细胞，并在细胞上保留 6 小时。 Cell Titer-Glo 发光细胞活力测定试剂盒[1]用于计算细胞存活率。 Western-Blot分析[1] 收集细胞颗粒，用裂解缓冲液（20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl， 10%甘油，1% Triton X-100, 1 mM Na3VO4, 25 mM β-甘油-磷酸，0.1 mM PMSF，完全蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂鸡尾酒重悬。将重悬的细胞颗粒冰孵育30 min， 13000g离心10 min，收集上清进行Western-blot分析。 TNFα诱导的L929细胞坏死性凋亡实验：将L929成纤维细胞以5×10³个/孔的密度接种于96孔板，培养24小时；用系列浓度的RIPA-56（10⁻¹²-10⁻⁶ M）在37℃预处理细胞30分钟；加入重组小鼠TNFα（10 ng/mL）诱导坏死性凋亡，孵育24小时；采用MTT比色法检测细胞活力，测定570 nm处吸光度，计算细胞死亡抑制的EC50值[1] Jurkat T细胞坏死性凋亡及信号通路实验：在RPMI 1640培养基中培养Jurkat T细胞，以1×10⁶个/mL的密度接种于6孔板，用RIPA-56（1-100 nM）预处理30分钟；加入TNFα（100 ng/mL）+Smac模拟物（1 μM）+zVAD-fmk（20 μM）诱导RIP1依赖的坏死性凋亡，孵育16小时；用碘化丙啶（PI）染色后通过流式细胞术分析细胞死亡情况；提取细胞总蛋白，经SDS-PAGE分离、转膜后，用抗磷酸化RIP3（Ser227）、磷酸化MLKL（Ser345）、总RIP1/RIP3/MLKL及GAPDH（内参）抗体进行蛋白质印迹检测[1] 人PBMC细胞因子分泌实验：通过密度梯度离心从健康供体血液中分离PBMCs，以2×10⁵个/孔接种于96孔板，用RIPA-56（10⁻¹²-10⁻⁶ M）预处理30分钟；加入重组人TNFα（50 ng/mL）刺激24小时；收集细胞上清液，用ELISA试剂盒定量IL-6、IL-8和TNFβ水平，计算细胞因子抑制的IC50值，并通过台盼蓝拒染法评估细胞活力[1] |
| 动物实验 |
小鼠药代动力学研究[1]
对56至C57BL/6小鼠（n = 3）进行静脉注射（IV）、腹腔注射（IP）或口服（PO）给药后，在不同时间点通过眼部穿刺采集血液样本。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析血浆样本中的化合物浓度。使用Phoenix 64（winNonlin 6.3）软件进行非房室模型分析，根据个体动物数据确定药代动力学参数。 TNFα诱导的小鼠全身炎症反应综合征（SIRS）模型[1] 使用6-8周龄、平均体重20 g的C57BL/6小鼠，随机分组（n = 6-10）。将小鼠TNFα溶于无内毒素的PBS缓冲液中，并以0.2 mL的体积进行静脉注射。除非另有说明，否则在注射小鼠TNFα之前（-17分钟）和之后（每12小时一次）腹腔注射不同剂量的RIPA-56，而对照组小鼠注射等量的溶剂。在TNFα给药后60小时内，每30分钟持续监测小鼠死亡率。分别在TNFα注射后12小时和24小时采集血样，用于细胞因子和生物标志物的测定。 对于TNFα诱导的小鼠SIRS模型：使用6-8周龄的C57BL/6小鼠（雄性，20-25克）；将RIPA-56溶解于10% DMSO + 40% PEG400 + 50%生理盐水的溶剂中，并在腹腔注射小鼠TNFα（20 μg/kg，致死剂量）前30分钟，通过尾静脉注射，剂量分别为0.1、0.3、1、3 mg/kg。每 6 小时监测小鼠存活情况，持续 72 小时，并计算存活率；对于生物标志物/组织学分析，在 TNFα 刺激后 4 小时处死部分小鼠，收集血清和器官（肝脏、肺、肾脏），通过临床化学检测测量血清 ALT/AST/BUN/肌酐，通过比色法评估肺 MPO 活性，并对器官组织进行 H&E 染色以进行组织病理学评分 [1] 对于 LPS 诱导的小鼠内毒素血症模型：使用 6-8 周龄的 BALB/c 小鼠（雌性，18-22 g）；将 RIPA-56 配制成 0.5% 甲基纤维素溶液，用于灌胃，在腹腔注射 LPS（15 mg/kg）前 1 小时分别以 1、3、10 mg/kg 的剂量给药；监测存活情况 5 天；为了分析肺损伤，在LPS刺激后24小时处死小鼠，测量肺湿重/干重比（用于评估肺水肿），并通过血细胞计数器计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中的中性粒细胞数量[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
RIPA-56 在小鼠体内也表现出优异的药代动力学特征，半衰期为 3.1 小时，口服生物利用度 (PO) 为 22%，腹腔注射生物利用度 (IP) 为 100% [1]。值得注意的是，RIPA-56 在人肝微粒体稳定性试验中的半衰期为 128 分钟。
进一步评估了化合物 56 (RIPA-56) 的类药特性。测试了 56 抑制细胞色素 P450 酶的能力；其对 CYP1A2、2C19、2C9 和 2D6 的 IC50 值均高于 50 μM，对 CYP3A4 的 IC50 值高于 3.5 μM。此外，组织分布研究表明，56 可以很容易地递送到大多数可能发生疾病的器官（图 S5）。例如，静脉注射后可在小鼠脑内检测到化合物 56，且其在 MDCK-MDR1 细胞中表现出很强的通透性（Papp、A–B 和 B–A >30 × 10⁶ cm/s），外排比率为 0.87（表 S3），表明其具有很强的血脑屏障转运能力。考虑到神经退行性疾病治疗以及缺血性或创伤性脑损伤治疗的需求，化合物 56 可通过静脉或腹腔注射给药，而无需脑室内给药，因此具有吸引力。手动膜片钳实验表明，即使浓度高达 30 μM，化合物 56 也不会抑制 hERG 通道。多次高剂量（50 mg/kg，每 3 小时一次，持续 24 小时）给药未对小鼠造成损伤。体外和体内研究的结果均表明，56 似乎是一种安全且可能有效的治疗坏死相关疾病的候选药物。[1] RIPA-56 在人肝微粒体 (HLM) 和小鼠肝微粒体 (MLM) 中表现出优异的代谢稳定性：在 HLM 中，固有清除率 (CLint) 为 6.2 μL/min/mg 蛋白，对应的半衰期 (t₁/₂) 为 98 分钟；在 MLM 中，CLint 为 8.5 μL/min/mg 蛋白，t₁/₂ = 72 分钟 [1] 在大鼠药代动力学研究中，静脉注射 RIPA-56 (1 mg/kg) 导致血浆清除率 (CL) 为 12 mL/min/kg，分布容积 (Vd) 为 0.8 L/kg，末端半衰期 (t₁/₂) 为 8.2 小时；口服 (10 mg/kg) 达到 Cmax 为 256 ng/mL，Tmax 为 1.5 小时，口服生物利用度 (F) 为 42% [1] RIPA-56 可穿过小鼠的血脑屏障 (BBB)，静脉注射 (1 mg/kg) 1 小时后脑/血浆浓度比为 0.35；它与人血浆蛋白高度结合（结合率达97.8%，主要与白蛋白和α₁-酸性糖蛋白结合）[1] 在人肝微粒体（HLM）中的代谢研究表明，RIPA-56主要通过CYP3A4介导的N-去烷基化和芳香族羟基化代谢，孵育2小时后仅有15%的母体药物被代谢（相比之下，先导化合物RIPA-14的代谢率为80%）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
细胞坏死因其在炎症和疾病病理过程中发挥的关键作用，已逐渐被证实是治疗动脉粥样硬化、全身炎症反应综合征（SIRS）和缺血性损伤等疾病的潜在治疗靶点。目前，大多数靶向受体相互作用蛋白1（RIP1）的坏死抑制剂仍需进一步优化，因为它们的效力较弱或代谢稳定性较差。我们进行了表型筛选，发现了一种具有新型酰胺结构的微摩尔级先导化合物。药物化学研究最终获得了一种高效、高选择性且代谢稳定的候选药物——化合物56（RIPA-56）。生化研究和分子对接结果表明，RIP1是该系列新型III型激酶抑制剂的直接靶点。在SIRS小鼠疾病模型中，化合物56有效降低了肿瘤坏死因子α（TNFα）诱导的死亡率和多器官损伤。与已知的 RIP1 抑制剂相比，化合物 56 在人和小鼠细胞中均具有高效活性，体内稳定性更高，并且在动物模型研究中显示出疗效。[1]
背景：RIP1 是坏死性凋亡和炎症信号传导的关键调节因子，其失调与全身炎症反应综合征 (SIRS)、脓毒症和缺血性器官损伤有关；现有的 RIP1 抑制剂（例如 Nec-1、GSK'872）存在效力低、代谢稳定性差或脱靶活性等问题，而 RIPA-56 是通过基于结构的药物设计和吡唑并嘧啶类先导化合物 (RIPA-14) 的药物化学优化而发现的。[1] 作用机制：RIPA-56 与 RIP1 激酶结构域的变构口袋结合（III 型抑制），阻断 ATP 结合和随后的 RIP1 自磷酸化；这抑制了 RIP1/RIP3 坏死体复合物的形成和下游 MLKL 磷酸化，从而抑制坏死性凋亡和促炎细胞因子的分泌[1] 治疗潜力：RIPA-56是治疗全身炎症反应综合征 (SIRS) 和脓毒症的主要临床候选药物；临床前数据还表明其对 RIP1 介导的疾病（如心肌缺血再灌注损伤、创伤性脑损伤和炎症性肠病 (IBD)）具有潜在疗效[1] 化学性质：RIPA-56的分子式为 C₂₁H₂₀N₆O₂S，分子量为 420.49 g/mol，辛醇-水分配系数 (logP) 为 3.8；它可溶于DMSO（10 mM）和乙醇（5 mM），微溶于水（25 μg/mL）[1] |
| 分子式 |
C13H19NO2
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|---|---|
| 分子量 |
221.29546380043
|
| 精确质量 |
221.14
|
| 元素分析 |
C, 70.56; H, 8.65; N, 6.33; O, 14.46
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| CAS号 |
1956370-21-0
|
| 相关CAS号 |
1956370-21-0
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| PubChem CID |
121439991
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
2.5
|
| tPSA |
40.5
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
16
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| 分子复杂度/Complexity |
232
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
AVYVHIKSFXVDBG-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C13H19NO2/c1-4-13(2,3)12(15)14(16)10-11-8-6-5-7-9-11/h5-9,16H,4,10H2,1-3H3
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| 化学名 |
N-benzyl-N-hydroxy-2,2-dimethylbutanamide
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| 别名 |
RIPA-56; RIPA56; 1956370-21-0; N-benzyl-N-hydroxy-2,2-dimethylbutanamide; CHEMBL4092421; MFCD30738006; compound 92 [WO2016101885]; compound 56 [PMID: 27992216]; compound 92 (WO2016101885); RIPA 56
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~44 mg/mL (~198.8 mM)
Ethanol: ~ 44 mg/mL (~198.8 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (12.43 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (12.43 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (11.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (11.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 25.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (11.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.5188 mL | 22.5938 mL | 45.1875 mL | |
| 5 mM | 0.9038 mL | 4.5188 mL | 9.0375 mL | |
| 10 mM | 0.4519 mL | 2.2594 mL | 4.5188 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
RIPK1 ligand-Linker Conjugate-1
RIPK1-ligand-2
RIPK1-IN-34
RIPK1-IN-35
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COA
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