| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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描述： Ro 08-2750 是一种新型、高效、选择性强且可逆的非肽类神经生长因子 (NGF) 抑制剂，其与 NGF 二聚体的结合亲和力 (KD) 约为 1 μM。它抑制 TRKA 与 p75NTR 的结合，但不抑制 NGF 的结合。Ro 08-2750 的 IC50 为 2.7 μM，是一种选择性 MSI RNA 结合活性抑制剂。NGF 可能对椎间盘细胞的分解代谢/合成代谢平衡和基质周转活性产生负面影响，从而加速椎间盘的退变。抗 NGF 疗法可能缓解椎间盘退变过程中的组织进行性破坏，并减轻疼痛。
| 靶点 |
NGF (IC50 ~1 µM); MSI RNA-binding (IC50 = 2.7 μM)
MUSASHI RNA-binding proteins (MSI2 and MSI1). MSI2 (IC50 for RNA-binding inhibition = 2.7 ± 0.4 µM in FP assay). MSI1. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Ro 08-2750 通过与 NGF 二聚体结合，很可能引起构象改变，从而阻止 NGF 进一步与 p75NTR 结合[2]。
Ro 08-2750 (10 nM) 可完全抑制 NGF 诱导的 SK-N-MC 103 细胞死亡[2]。 在髓系白血病细胞中，Ro 08-2750 (5-10 μM；8 小时) 可促进细胞分化和凋亡[3]。 Ro 08-2750 可抑制人 AML 细胞系和患者细胞的存活[3]。 Ro 08-2750 可修饰 MSI2 基因特征并抑制 MSI2 RNA 结合[3]。 抗增殖和细胞毒性作用：Ro 08-2750 可抑制小鼠 MLL-AF9+ 白血病骨髓细胞的增殖，EC50 值为 2.6 ± 0.1 µM。在人白血病细胞系中，该化合物对 MOLM13 (AML) 和 K562 (CML-BC) 细胞均表现出抗增殖作用，EC50 值约为 8 µM。该化合物对正常人 CD34+ 脐带血细胞的活性较低（EC50 值约为 22 µM），提示其具有一定的治疗窗口。 [3] 诱导分化：用Ro 08-2750（5 µM，48 小时）处理可增加小鼠 MLL-AF9+ 细胞的分化，流式细胞术（Mac1 和 Gr1 标记物增加）和形态学分析证实了这一点。在人 K562 和 MOLM13 细胞中，Ro（20 µM，48 小时）可诱导分化标记物（MOLM13 中的 CD14，K562 中的糖蛋白 A）的表达以及指示分化的形态学变化。在正常人 CD34+ 脐带血细胞中未观察到对分化的影响。[3] 诱导凋亡：用Ro 08-2750处理可显著增加小鼠 MLL-AF9+ 细胞的凋亡（Annexin V+ 细胞群），最早在 8 小时即可观察到，在 10 µM 处理 48 小时后更为明显。同样，在人源MOLM13和K562细胞中，Ro（20 µM）在48-96小时内增加了Annexin V阳性细胞的百分比。[3] 抑制集落形成：Ro 08-2750以剂量依赖的方式减少集落形成。在小鼠MLL-AF9+细胞中，1 µM浓度下集落形成抑制率>50%，5 µM浓度下抑制率约为75%。在人源AML细胞系（MOLM13、K562）中，20 µM浓度下集落形成活性抑制率>80%。该化合物在三个AML患者样本中也表现出不同的敏感性，5 µM浓度下集落形成抑制率>50%，而即使在20 µM浓度下，对正常人CD34+脐带血细胞的集落形成抑制作用也仅为轻微。 [3] 抑制MSI2-RNA结合及靶标表达：RNA免疫沉淀实验表明，Ro 08-2750（10 µM，1小时）显著降低了K562细胞中MSI2与其靶mRNA（TGFBR1、c-MYC、SMAD3、CDKN1A）的结合。Western blot分析证实，在MOLM13和K562细胞中，MSI2靶蛋白（TGFβR1、c-MYC、SMAD3、HOXA9）的表达呈剂量依赖性（1-20 µM，4小时）和时间依赖性（20 µM，1-24小时）降低，而P21的表达增加，非靶标β-ACTIN的表达保持不变。这种效应是转录后调控的，因为这些靶标的mRNA水平仅受到轻微影响。 [3] 靶向特异性：在小鼠MLL-AF9+细胞中过表达MSI2可降低Ro 08-2750的抗增殖和靶标抑制作用，而过表达Ro结合缺陷的MSI2突变体（K22A、F66A、F97A、R100A）则进一步恢复了集落形成能力。与MSI2结合能力降低或丧失的类似物Ro-OH和Ro-NGF对细胞增殖和RNA结合抑制作用也减弱或无作用，表明Ro的活性主要通过抑制MSI2来实现。 [3]基因表达特征：在MOLM13和K562细胞中，用Ro 08-2750 (20 µM)处理4小时后进行RNA-seq分析，结果显示基因表达特征与shRNA介导的MSI2敲低在多种白血病细胞系中获得的特征高度重叠。这包括与c-MYC、mRNA加工和白血病相关基因集相关的共同通路。[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在髓系白血病模型中，Ro 08-2750（13.75 mg/kg；腹腔注射）可抑制白血病发生[3]。
在小鼠急性髓系白血病模型中的疗效：在侵袭性 MLL-AF9 小鼠白血病模型中，给予Ro 08-2750（13.75 mg/kg，腹腔注射，每 3 天一次，共 5 次）可减轻疾病负荷。在处死时（移植后第 19 天），与对照组相比，治疗组小鼠的脾脏重量和白细胞计数均显著降低。 [3] 体内药效学效应：在携带 MLL-AF9 白血病的鼠中，急性给予 Ro 08-2750（13.75 mg/kg，腹腔注射）治疗，通过流式细胞术检测发现，脾细胞中 c-KIT 蛋白丰度（4 小时和 12 小时）和细胞内 c-MYC 水平（4 小时和 12 小时）均降低。[3] |
| 酶活实验 |
荧光偏振 (FP) 检测：为了验证 Ro 08-2750 对 MSI-RNA 结合的抑制作用，我们采用基于荧光偏振的检测方法，在 384 孔板中进行剂量反应曲线研究。实验使用含有两个 MSI 基序 (GUAGU) 的 RNA 寡核苷酸 (Cy3-C9[spacer]-rGUAGUAGU)。采用手动移液法将试剂加入孔板，并在酶标仪上进行 FP 读数。MSI2 RNA 结合抑制的 IC50 值为 2.7 ± 0.4 µM。 [3]
微尺度热泳 (MST) 测定：为研究结合亲和力，使用胺偶联试剂盒对纯化的重组 GST-MSI2（野生型和突变体）、GST-RBP 对照品（SYNCRIP、SRSF2、HUR、RBMX、TIA-1）和牛血清白蛋白进行荧光标记。将蛋白质稀释于 MST 缓冲液（50 mM HEPES、100 mM NaCl、0.05% Tween-20，pH 7.4）中。将标记的蛋白质或蛋白质/RNA 复合物（预孵育 15 分钟）与浓度递增的 Ro 08-2750（0.015 至 500 μM）或对照 RNA 寡核苷酸（0.0015 至 50 μM，rGUAGUAGUAGUAGUA）混合，并装入毛细管中。在室温下，使用固定的红外激光功率进行MST测量。Ro与MSI2的KD值为12.3 ± 0.5 µM。对于MSI2/RNA复合物，KD值为27.5 ± 2.6 µM。与BSA的结合可忽略不计（KD > 500 µM）。[3] 等温滴定量热法（ITC）实验：为了确认Ro与MSI2的相互作用并排除其与RNA的直接结合，进行了ITC实验。将重组GST-MSI2（30 μM）溶于ITC缓冲液（10 mM HEPES + 10%柠檬酸磷酸酯和0.05% Tween-20，pH 7.0）中，并用相同缓冲液中的100 μM和300 μM Ro 08-2750进行滴定。为了检测RNA结合，将15 nt RNA探针（rGUAGUAGUAGUAGUA）或poly(A) RNA（10 μM）与100 μM Ro或棕榈酸酯（阳性对照）进行滴定。使用专用软件分析热力学参数。Ro与MSI2的结合KD为13.3 ± 0.27 µM，但未显示与MSI靶RNA或poly(A) RNA结合。[3] 化学发光电泳迁移率变动分析（EMSA）：为了评估Ro 08-2750对MSI2-RNA复合物的抑制作用，采用了EMSA方法。将 GST-MSI2 (125-250 ng) 与 DMSO 或化合物（通常为 20 µM）在室温下于 1× RNA EMSA 结合缓冲液（10 mM HEPES、20 mM KCl、1 mM MgCl2、1 mM DTT）中预孵育 1 小时，该缓冲液补充了 5% 甘油、100 µg/mL tRNA 和 10 mM KCl。然后，加入 40 nM 生物素标记的 RNA（生物素-rGUAGUAGUAGUAGUA），并继续孵育 1 小时。将样品在 4-20% TBE 聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，然后转移至膜上，进行紫外交联，并使用化学发光试剂盒进行显色。Ro 以浓度依赖性方式（5 至 40 µM）与 RNA 竞争 MSI2 的结合位点。[3] |
| 细胞实验 |
细胞毒性/增殖检测（Cell-Titer Glo）：将细胞（小鼠 MLL-AF9+ BM 细胞、人 MOLM13 细胞或 K562 细胞）接种于 96 孔板中，并用浓度递增的 Ro 08-2750（最高浓度 100 µM，1:2 系列稀释）于 37°C 处理 72 小时。冷却至室温后，将细胞与 Cell-Titer Glo 试剂混合，孵育 15 分钟，并读取发光值。数据经标准化处理后，用于计算细胞存活率百分比和 EC50 值。 [3]
流式细胞术用于分化和凋亡检测：分化检测中，用DMSO或Ro 08-2750处理的细胞，在黑暗中用针对特定表面标志物（例如，小鼠细胞的Mac1-PE、Gr1-APC；人细胞的CD14-PE、CD235a-PE）的荧光染料标记抗体染色20分钟，洗涤后进行分析。凋亡检测中，使用Annexin V和死细胞检测试剂盒对细胞进行染色，并在细胞分析仪上进行分析。胞内c-MYC检测中，细胞用2%多聚甲醛固定，用冷甲醇透化，用c-MYC一抗染色，然后用荧光染料标记的二抗染色，最后进行分析。 [3] 集落形成单位 (CFU) 测定：将白血病细胞（例如，10,000 个小鼠 MLL-AF9+ 骨髓细胞）或正常祖细胞（例如，Lin-Sca+Kit+ 细胞、人 CD34+ 脐带血细胞）接种于含有不同浓度 Ro 08-2750 的甲基纤维素培养基中。根据细胞类型，培养 5-14 天后计数集落。[3] RNA 免疫沉淀 (RIP)：将 K562 细胞（空载体或 FLAG-MSI2 过表达）用 Ro 08-2750 (10 µM) 或 DMSO 处理 1 小时。然后裂解细胞，并使用抗 FLAG 抗体免疫沉淀 FLAG-MSI2。分离与免疫沉淀复合物结合的RNA，并通过实时定量PCR定量分析特定MSI2靶mRNA（TGFBR1、c-MYC、SMAD3、CDKN1A）的富集情况。[3] 蛋白质印迹分析：将MOLM13或K562细胞用不同浓度的Ro 08-2750（1-20 µM，4小时）或不同时间点（20 µM，1-24小时）处理后，用RIPA裂解缓冲液裂解。定量总蛋白后，通过SDS-PAGE分离，并将蛋白转移至硝酸纤维素膜。用针对MSI2靶标（例如TGFBR1、SMAD3、HOXA9、c-MYC、P21）的抗体和β-肌动蛋白（作为上样对照）进行免疫印迹，然后使用化学发光法显色。[3] |
| 动物实验 |
MLL-AF9模型药效学研究：将10,000个MLL-AF9 GFP+继发性鼠白血病细胞经眼眶后移植到亚致死剂量（475 cGy）照射的雌性C57BL/6小鼠体内。移植后三周，当出现疾病症状时，小鼠腹腔注射单剂量Ro 08-2750（13.75 mg/kg，溶于DMSO）或DMSO溶剂。分别于注射后4小时和12小时处死小鼠进行分析。收集脾细胞，用于流式细胞术分析c-Kit受体和细胞内c-MYC水平。 [3] * **MLL-AF9模型疗效研究：** 将10,000个MLL-AF9 GFP+继发性鼠白血病细胞经眼眶后移植到亚致死剂量（475 cGy）照射的雌性C57BL/6小鼠体内。移植后第3天开始，小鼠分别于第1、4、7、10和13天腹腔注射Ro 08-2750（13.75 mg/kg，溶于DMSO）或DMSO溶剂（给药一天，停药两天）。移植后第19天处死小鼠。通过流式细胞术测量脾脏重量、白细胞计数和脾细胞内c-MYC水平来评估疾病负荷。 [3]
MLL-AF9模型药效学研究：将10,000个MLL-AF9 GFP+继发性鼠白血病细胞经眼眶后移植到亚致死剂量（475 cGy）照射的雌性C57BL/6小鼠体内。移植后三周，当出现疾病症状时，小鼠腹腔注射单剂量Ro 08-2750（13.75 mg/kg，溶于DMSO）或DMSO溶剂。分别于注射后4小时和12小时处死小鼠进行分析。收集脾细胞，用于流式细胞术分析c-Kit受体和细胞内c-MYC水平。 [3] MLL-AF9 模型疗效研究：将 10,000 个 MLL-AF9 GFP+ 继发性鼠白血病细胞经眼眶后移植到亚致死剂量（475 cGy）照射的雌性 C57BL/6 小鼠体内。移植后第 3 天开始，小鼠分别于第 1、4、7、10 和 13 天腹腔注射 Ro 08-2750（13.75 mg/kg，溶于 DMSO）或 DMSO 溶剂（给药一天，停药两天）。移植后第 19 天处死小鼠。通过流式细胞术测量脾脏重量、白细胞计数和脾细胞内 c-MYC 水平来评估疾病负荷。[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体内耐受性：在小鼠疗效研究中，给予Ro 08-2750（13.75 mg/kg，腹腔注射，每3天一次）耐受性良好。治疗组小鼠体重几乎没有减轻。血液分析显示，与未治疗组相比，治疗组小鼠的红细胞计数、血小板计数、平均红细胞体积、血细胞比容和血红蛋白含量均无显著差异。在健康小鼠中，单次Ro治疗24小时后未观察到肝酶变化。[3]
体外治疗窗口：Ro 08-2750对恶性细胞具有一定的选择性。在人白血病细胞系（MOLM13和K562）中，其抗增殖作用的EC50约为8 µM，而在正常人CD34+脐带血细胞中，EC50约为22 µM，表明正常细胞产生毒性所需的浓度约为Ro 08-2750的2.6倍。此外，Ro 在 5 µM 浓度下抑制了 AML 患者样本中的集落形成，但在 20 µM 浓度下仅对正常 CD34+ 细胞集落显示出轻微的抑制作用。[3] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
7,10-二甲基-2,4-二氧代-8-苯并[g]蝶醛是一种黄素。
背景和机制：Ro 08-2750是从一项针对6208种化合物的荧光偏振筛选中发现的，该筛选旨在鉴定MUSASHI (MSI) RNA结合蛋白的抑制剂。本研究将其表征为MSI2的选择性抑制剂。它直接与MSI2的RNA识别基序1 (RRM1)结合，与RNA竞争结合位点。这种相互作用抑制了MSI2作为转录后调控因子的功能，导致其致癌靶点（例如c-MYC、HOXA9、SMAD3）的下调和P21等靶点的上调。该化合物的活性与其抑制MSI2的能力相关，因为MSI2的过表达或阻止Ro结合的MSI2突变可以挽救其作用。[3] 化学类似物：研究了Ro 08-2750的两种类似物：Ro-OH（将醛还原为醇的单一修饰）和Ro-NGF（一种对神经生长因子具有高亲和力的化合物）。两种类似物均表现出与MSI2结合能力显著降低或完全丧失，因此在抑制白血病细胞生长和MSI2-RNA结合方面效力也相应降低或无活性，这支持了母体化合物的靶向机制。[3] 意义：该研究为靶向癌症中的MSI等RNA结合蛋白提供了一个框架。它表明，使用小分子抑制MSI2的RNA结合活性是急性髓系白血病（AML）的一种可行的治疗策略，可在临床前模型中减轻疾病负担。该化合物可作为开发更有效、更具临床应用价值的MSI家族抑制剂的概念验证。[3] |
| 分子式 |
C13H10N4O3
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|---|---|
| 分子量 |
270.2435
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| 精确质量 |
270.075
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| 元素分析 |
C, 57.78; H, 3.73; N, 20.73; O, 17.76
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| CAS号 |
37854-59-4
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| 相关CAS号 |
37854-59-4
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| PubChem CID |
17756791
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| 外观&性状 |
Orange to red solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.754
|
| LogP |
-0.81
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| tPSA |
97.71
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
554
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=CC1C(C)=CC2=C(N(C3=NC(=O)NC(=O)C3=N2)C)C=1
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| InChi Key |
JDEMVNYMYPJJIM-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H10N4O3/c1-6-3-8-9(4-7(6)5-18)17(2)11-10(14-8)12(19)16-13(20)15-11/h3-5H,1-2H3,(H,16,19,20)
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| 化学名 |
7,10-dimethyl-2,4-dioxobenzo[g]pteridine-8-carbaldehyde
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| 别名 |
Ro-08-2750; Ro 082750; Ro -082750; Ro 08-2750; Ro08-2750; Ro082750
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~4 mg/mL (~14.8 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (18.50 mM) in 50% PEG300 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 5 mg/mL (18.50 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.7004 mL | 18.5021 mL | 37.0041 mL | |
| 5 mM | 0.7401 mL | 3.7004 mL | 7.4008 mL | |
| 10 mM | 0.3700 mL | 1.8502 mL | 3.7004 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
BBO-11818
RMC-5127
Degarelix acetate hydrate
DDO-2728
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463611831
