| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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描述：RG7713（RG-7713；RO-5028442；RO5028442）是一种新型高效的脑穿透性hV1a（人血管加压素1a）拮抗剂，具有治疗自闭症的潜力。它对hV1a的抑制常数Ki分别为1 nM（hV1a）和39 nM（mV1a）。
| 靶点 |
human vasopressin 1a (hV1a); mV1a
RO5028442 is a highly potent and selective antagonist of the human vasopressin 1a (hV1a) receptor. Its binding affinity (Ki) for the hV1a receptor is 1 nM. It exhibits excellent selectivity with a Ki >30000 nM for the human V2 receptor (>30000-fold selective) and a Ki of 9891 nM for the human oxytocin receptor (OTR) (>9891-fold selective) [1]. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
RG7713 (RO5028442)（化合物 8）对人催产素 (hOT) 受体和人 V2 (hV2) 受体具有良好的选择性，对小鼠具有中等亲和力，对 hV1a 受体具有极高的结合亲和力和功能亲和力。RG7713 (RO5028442) 的溶解度很高。针对 89 个靶点，RG7713 (RO5028442) 被确定为具有极高的选择性。最终，得出结论：RG7713 (RO5028442) 是一种适用于临床研究的化合物 [1]。
受体结合特性：在利用表达人受体的 HEK293 细胞膜进行的放射性配体竞争结合实验中，RO5028442 显示出对 hV1a 受体的高亲和力 (Ki = 1 nM)。它与89个其他靶点均无显著结合，证实了其高选择性[1]。 功能性拮抗剂活性：在利用稳定表达人V1a受体的CHO细胞进行的功能性拮抗剂钙流测定中，RO5028442抑制加压素诱导的钙信号传导。其表观功能亲和力(Kb)为2.6 nM[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
中枢注射AVP可刺激V1a、V1b和催产素受体，并诱发小鼠的抓挠行为。在V1a基因敲除小鼠中，AVP不诱发抓挠行为。为了探究我们新型V1a受体拮抗剂拮抗脑内V1a受体的潜力，我们在AVP治疗前，先对小鼠进行脑室内注射（icv）化合物25。令人欣喜的是，我们发现化合物25能够剂量依赖性地抑制抓挠行为。鉴于化合物27具有优于化合物24和25的药代动力学特性（清除率更低、分布容积更大），我们最终选择化合物27进行外周腹腔注射（ip）。尽管化合物 27 的脑渗透性较差，但它也表现出对 AVP 诱导的抓挠行为的剂量依赖性抑制作用（图 8）[1]。
中枢靶点结合（抓挠模型）：虽然未提供 RO5028442 的主要疗效数据，但同一系列的工具化合物（25 和 27）分别在脑室内 (icv) 和腹腔注射 (ip) 后，均表现出对小鼠中枢 AVP 诱导的抓挠行为的剂量依赖性抑制作用。该模型验证了拮抗脑 V1a 受体可以产生可量化的行为效应 [1]。 小鼠药代动力学：在小鼠中，静脉注射 2 mg/kg 后，RO5028442 的血浆清除率 (Cl) 为 91 mL/min/kg，分布容积 (Vss) 为 5.8 L/kg。口服10 mg/kg剂量后，脑组织与血浆浓度比为1.4，表明其脑组织穿透性极佳[1]。 |
| 酶活实验 |
人源V1a、人源V2、人源OTR和鼠源V1a结合亲和力测定[1] 人源和鼠源受体分别通过RT-PCR从人肝脏总RNA（V1a）、肾脏RNA（V2）、乳腺RNA（OTR）或鼠肝脏RNA（鼠源V1a）中克隆而来。细胞膜由瞬时转染编码人源V1a、人源V2或鼠源V1a表达载体的HEK293细胞制备。对于人源OTR膜的制备，筛选出稳定表达该受体的HEK克隆。瞬时或稳定转染细胞在20 L发酵罐中培养。[1]对于每种受体，将50 g细胞沉淀重悬于30 mL冰冷的裂解缓冲液（50 mM HEPES、1 mM EDTA和10 mM MgCl2，pH值调节至7.4，并加入蛋白酶抑制剂混合物（Roche Diagnostics））中，用Polytron均质器均质1分钟。将制备物在4℃下以500 g离心20分钟，弃去沉淀，将上清液在4℃下以43,000 g（19,000 rpm）离心1小时。将沉淀重悬于含10%蔗糖的裂解缓冲液中。采用Bradford法测定蛋白质浓度，并将等分试样储存于-80℃直至使用。[1] 对于加压素受体结合研究，将60 mg硅酸钇SPA珠与一份膜样品在结合缓冲液（50 mM Tris，1 mM EDTA，10 mM MgCl2，pH值调节至7.4）中混合，将 120 mM NaCl、5 mM KCl、2 mM CaCl₂ 和 10 mM MgCl₂ 混合，孵育 15 分钟。然后将 50 μL 磁珠/膜混合物加入 96 孔板的每个孔中，随后加入 50 μL 4 nM ³H-加压素（美国放射性标记化学品公司）。对于总结合测定，向相应的孔中加入 100 μL 结合缓冲液；对于非特异性结合测定，加入 100 μL 8.4 mM 冷加压素或冷催产素（用于 hOTR）；对于化合物测试，加入 100 μL 各化合物在 2% DMSO 中的系列稀释液。将孔板在室温下孵育 1 小时，以 1000 g 离心 1 分钟，并使用 Packard Top-Count 计数。[1] 使用 1 号滤膜通过过滤结合法测定与人 OTR 的结合。在含有膜的 50 mM Tris、5 mM MgCl2 和 0.1% BSA (pH 7.4) 缓冲液中，3H-催产素的最终浓度为 nM。按照上述方法加入化合物后，在室温下孵育 1 小时，然后通过真空快速过滤 GF/C 滤膜终止结合反应。滤膜预先用检测缓冲液浸泡 5 分钟，并在计数前用冰冷的检测缓冲液洗涤 5 次。从每个孔中减去非特异性结合计数，并将数据标准化至最大特异性结合（设定为 100%）。为了计算 IC50，使用非线性回归模型 (XLfit) 拟合曲线，并使用 Cheng-Prussoff 方程计算 Ki。对每个检测进行的饱和结合实验表明，标记的是单一均一的结合位点群。为了测定受体结合亲和力 (Ki)，化合物至少重复测试 2 次，重要化合物重复测试 3 至 5 次[1]。
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| 细胞实验 |
利用荧光成像技术进行稳定细胞培养和人V1a钙离子流测定[1]：将编码人V1a的表达质粒稳定转染至CHO细胞，并在含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素、1% L-谷氨酸和200 μg/mL遗传霉素的F-12K培养基中，于37℃、10% CO₂、95%湿度条件下培养。将细胞以50,000个/孔的密度接种于透明底96孔板中，培养24小时后，用2 μM Fluo-4-AM（溶于测定缓冲液）进行染料加载，孵育60分钟。细胞洗涤后，将孔板置于荧光成像酶标仪（FLIPR）上，加入化合物稀释系列，并测定激动剂活性。所有测试化合物均无激动剂活性。孵育20分钟后，向培养板中加入浓度为最大信号80%的加压素（V1a激动剂），并记录5分钟的钙信号。化合物拮抗活性引起的钙信号降低用单一位点竞争方程拟合，公式为y = A + ((B – A)/(1 + ((x/C)D)))，其中y为归一化荧光百分比，A为最小y值，B为最大y值，C为IC50（抑制50%激动剂诱导荧光的浓度），x为竞争化合物浓度的log10值，D为Hill系数。IC50值用公式Kb = IC50/1 + (激动剂EC80/激动剂EC50)转换为表观Kb值。激动剂EC80和EC50在同一天用相同的细胞在独立实验中测定。为了测定功能性拮抗作用 (Kb)，所有化合物均至少重复测试 2 次，重要化合物则重复测试 3 至 5 次[1]。
人 V1a 钙流测定：将稳定表达人 V1a 受体的 CHO 细胞接种于 96 孔板中，并用钙敏感染料 Fluo-4-AM 进行标记。洗涤后，向细胞中加入不同浓度的 RO5028442，孵育 20 分钟以检测激动剂活性（未观察到）。随后，向每个孔中加入产生最大信号 80% 的浓度（EC80）的加压素（V1a 激动剂）。使用荧光成像板读数仪 (FLIPR) 记录 5 分钟的钙信号。测量由拮抗剂活性引起的钙信号降低。通过将数据拟合到单一位点竞争方程来确定 IC50 值。表观Kb值由IC50值计算得出，计算公式为：Kb = IC50 / (1 + (激动剂EC80 / 激动剂EC50)) [1]。 |
| 动物实验 |
抑制小鼠AVP诱导的抓挠行为[1] 使用NMRI雄性小鼠（19-21 g），每剂量组n=8。动物接受潜在V1a拮抗剂（不同剂量，分别在AVP处理前5分钟或30分钟脑室内或腹腔注射）或载体注射。然后在行为测试前2分钟，在异氟烷短时麻醉下，以3 ng/5 μL的剂量脑室内注射AVP。随后观察动物5分钟，并记录抓挠时间。AVP溶解于人工脑脊液（CSF）中；V1a拮抗剂以0.3% Tween 80的0.9% NaCl溶液进行腹腔注射，或以人工脑脊液进行脑室内注射。
小鼠脑穿透性研究：**雄性小鼠口服10 mg/kg剂量的RO5028442。该化合物配制成赋形剂（本化合物的具体赋形剂未予说明，但对于相关化合物，腹腔注射通常使用 0.3% Tween 80 的 0.9% NaCl 溶液）。在给药后特定时间点，采集脑组织和血浆样本。测定两种基质中化合物的浓度，并计算脑血浆比，结果为 1.4 [1]。 * **小鼠静脉注射药代动力学研究：**雄性小鼠静脉注射 2 mg/kg 剂量的 RO5028442。在不同时间点采集血样，并测定血浆浓度。采用非房室模型分析计算药代动力学参数，包括清除率 (Cl) 和分布容积 (Vss) [1]。 小鼠脑渗透性研究：雄性小鼠口服 10 mg/kg 剂量的 RO5028442。该化合物配制成赋形剂（本化合物的具体赋形剂未予说明，但对于相关化合物，腹腔注射通常使用含0.3% Tween 80的0.9% NaCl溶液）。在给药后特定时间点，采集脑组织和血浆样本。测定两种基质中化合物的浓度，并计算脑血浆比，结果为1.4 [1]。 小鼠静脉注射药代动力学研究：雄性小鼠静脉注射2 mg/kg剂量的RO5028442。在不同时间点采集血样，并测定血浆浓度。采用非房室模型分析计算药代动力学参数，包括清除率 (Cl) 和分布容积 (Vss) [1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
溶解度：RO5028442具有较高的水溶性，在pH 6.5时测得的溶解度为20 mg/L（或以另一种单位表示为5 μg/mL）[1]。
亲脂性和P-gp外排：该化合物的设计使其具有平衡的亲脂性，以避免P-糖蛋白（P-gp）介导的外排。它表现出较弱的P-gp转运，这有助于其优异的脑渗透性[1]。 小鼠药代动力学参数：血浆清除率（Cl）= 91 mL/min/kg；稳态分布容积（Vss）= 5.8 L/kg（静脉注射2 mg/kg后）；脑血浆浓度比= 1.4（口服10 mg/kg后）[1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
据称，该化合物被认为适合进行人体临床研究，表明其具有良好的临床前安全性。针对 89 个靶点的 CEREP 选择性筛选显示，未发现明显的脱靶活性，提示脱靶相关毒性的风险较低 [1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
RO5028442 已用于自闭症研究试验。
RO5028442 是一种高效、选择性强且能穿透血脑屏障的血管加压素 1a (V1a) 受体拮抗剂，它是通过高通量筛选、化学基因组学和骨架跃迁等方法相结合而发现的。它被开发用于治疗自闭症和其他伴有社交情感功能障碍的精神疾病，例如焦虑症和精神分裂症。其理论基础是，能穿透血脑屏障的 V1a 受体拮抗剂可能通过调节社交脑发挥抗抑郁、抗焦虑和促进社交的作用。其设计的关键在于对密切相关的 V2 受体和催产素受体具有高度选择性，以避免外周副作用并保留催产素的促进社交作用。该化合物具有优异的药代动力学特性，溶解度高，P-gp外排作用弱，且脑渗透性好（小鼠脑/血浆比为1.4）。研究发现其适用于治疗自闭症，目前已进入人体临床试验阶段（NCT01474278）[1]。 |
| 精确质量 |
437.187
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|---|---|
| 元素分析 |
C, 68.56; H, 6.44; Cl, 8.09; N, 9.59; O, 7.31
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| CAS号 |
920022-47-5
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| 相关CAS号 |
1228088-30-9 (RO5285119; Balovaptan)
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| PubChem CID |
59657596
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| 外观&性状 |
Typically exists as white to off-white solids at room temperature
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
621.3±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
329.6±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.646
|
| LogP |
3.68
|
| tPSA |
37.7Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
31
|
| 分子复杂度/Complexity |
651
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
QZXVLRCMAHJVIP-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C25H28ClN3O2/c1-27(2)13-14-29-16-21(20-8-7-19(26)15-23(20)29)24(30)28-11-9-25(10-12-28)22-6-4-3-5-18(22)17-31-25/h3-8,15-16H,9-14,17H2,1-2H3
|
| 化学名 |
[6-chloro-1-[2-(dimethylamino)ethyl]indol-3-yl]-spiro[1H-2-benzofuran-3,4'-piperidine]-1'-ylmethanone
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| 别名 |
RO-5028442; RO5028442; Ro-5028442; LZ0EU1YHCK; UNII-LZ0EU1YHCK; (6-Chloro-1-(2-(dimethylamino)ethyl)indol-3-yl)-spiro(1H-isobenzofuran-3,4'-piperidine)-1'-yl-methanone; CHEMBL3416885; RO 5028442
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~20 mg/mL (~45.67 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (4.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (4.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (4.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01474278 | COMPLETED | Drug: Placebo Drug: RO5028442 |
Autistic Disorder | Hoffmann-La Roche | 2011-12 | Phase 1 |
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463611831
