| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
human vasopressin 1a (hV1a); mV1a
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| 体外研究 (In Vitro) |
RG7713 (RO5028442)（化合物 8）对人催产素 (hOT) 和人 V2 (hV2) 受体表现出良好的选择性，对小鼠具有中等亲和力，对 hV1a 具有良好的结合和功能亲和力。 RG7713 (RO5028442) 的溶解度很高。对于一组 89 个靶标，RG7713 (RO5028442) 被确定具有极高的选择性。最终得出的结论是，RG7713 (RO5028442) 是一种适合临床研究的化学品 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
中枢AVP给药刺激V1a、V1b和催产素受体，并诱导小鼠的抓挠行为。在V1a敲除小鼠中，AVP不会引起抓挠。为了探索我们新型V1a受体拮抗剂拮抗脑V1a受体的潜力，在用AVP治疗之前，对小鼠静脉注射了25。令人欣慰的是，发现25可以剂量依赖性地抑制抓挠。与24和25相比，由于其较低的清除率和较高的分布体积，其药代动力学特征更优越，因此我们选择了27种用于外周腹膜内给药。尽管其脑渗透性较差，但27也显示出对AVP诱导的抓挠的剂量依赖性抑制（图8）。[1]
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| 酶活实验 |
人V1a、人V2、人OTR和小鼠V1a结合亲和力测量[1]
通过RT-PCR从总人肝RNA（V1a）、肾RNA（V2）、乳腺RNA（OTR）或小鼠肝RNA（小鼠V1a）中克隆人和小鼠受体。细胞膜由用编码人V1a、人V2或小鼠V1a的表达载体瞬时转染的HEK293细胞制备。对于人OTR膜制备，选择表达受体的稳定HEK克隆。瞬时或稳定的细胞在20L发酵罐中生长。[1]
对于每种受体，将50 g细胞沉淀重新悬浮在30 mL冰冷的裂解缓冲液中（50 mM HEPES、1 mM EDTA和10 mM MgCl2调节至pH 7.4+蛋白酶抑制剂完全混合物（罗氏诊断）），并用Polytron均质化1分钟。将制剂在4°C下在500 g下离心20分钟，丢弃沉淀，上清液在4°C下在43000 g下离心1小时（19'000 rpm）。将沉淀物重新悬浮在裂解缓冲液+10%蔗糖中。蛋白质浓度通过Bradford法测定，等分试样在-80°C下储存直至使用。[1]
对于加压素受体结合研究，将60mg硅酸钇SPA珠与一等分膜在结合缓冲液（50mM Tris、120mM NaCl、5mM KCl、2mM CaCl2和10mM MgCl2）中混合15分钟。然后将50μL珠/膜混合物加入96孔板的每个孔中，然后加入50μL 4 nM 3H加压素（美国放射性标记化学品）。对于总结合测量，向各孔中加入100μL结合缓冲液；对于非特异性结合，加入100μL用于hOTR的8.4mM冷加压素或冷催产素；对于化合物测试，加入100μL每种化合物在2%DMSO中的连续稀释液。将平板在室温下孵育1小时，在1000g下离心1分钟，并在Packard Top Count上计数。[1]
通过使用终浓度为1nM的3H-催产素在50mM Tris、5mM MgCl2和含0.1%BSA（pH 7.4）缓冲液的膜中过滤结合来测量与人OTR的结合。在如上所述添加化合物并在室温下孵育1小时后，通过真空下通过GF/C过滤器快速过滤终止结合，用测定缓冲液预浸5分钟，并在计数前用冰冷的测定缓冲液洗涤5次。从每个孔中减去非特异性结合计数，并将数据归一化为100%的最大特异性结合集。为了计算IC50，使用非线性回归模型（XLfit）拟合曲线，并使用Cheng-Prussoff方程计算Ki。对每种测定进行的饱和结合实验表明，一个单一的同质结合位点群体被标记。对于受体结合亲和力（Ki）测定，化合物至少测试2次，重复两次，重要化合物测试3至5次，重复一次[1]。
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| 细胞实验 |
稳定细胞培养和使用荧光成像的人V1a钙通量测定[1]
CHO细胞用编码人V1a的表达质粒稳定转染，并在含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素、1%l-谷氨酸和200μg/mL遗传霉素的F-12 K中在37°C、10%CO2、95%湿度的培养箱中生长
将细胞以50000个细胞/孔的速度在透明底96孔板上铺板24小时，并在测定缓冲液中用2μM Fluo-4-AM染色60分钟。细胞洗涤后，将平板装载在荧光成像平板阅读器（FLIPR）上，将化合物稀释系列加入细胞中，并测量激动剂活性。所测试的化合物均无激动活性。孵育20分钟后，将浓度为最大信号80%的加压素（V1a激动剂）加入平板，并记录钙信号5分钟。
由于化合物的拮抗剂活性导致的钙信号减少被拟合到单位点竞争方程中，公式为y=a+（（B-a）/（1+（（x/C）D）），其中y是归一化荧光的百分比，a是最小值y，B是最大值y，C是IC50（抑制50%激动剂诱导荧光的浓度），x是竞争化合物浓度的log10，D是希尔系数。使用以下公式将IC50值转换为表观Kb值：Kb=IC50/1+（激动剂EC80/激动剂EC50）。在独立实验中，在同一天和相同的细胞中测定激动剂EC80和EC50。对于功能拮抗（Kb）测定，所有化合物至少测试2次，重复两次，重要化合物测试3至5次，重复一次[1]。
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| 动物实验 |
抑制小鼠AVP诱导的抓挠行为[1] 本研究使用NMRI雄性小鼠（19-21 g），每剂量组n=8。小鼠分别接受潜在V1a受体拮抗剂（不同剂量，分别在AVP处理前5分钟或30分钟脑室内注射或腹腔注射）或溶剂对照。随后，在行为学测试前2分钟，于异氟烷短时麻醉下，以3 ng/5 μL的剂量脑室内注射AVP。观察小鼠5分钟，并记录抓挠时间。AVP溶于人工脑脊液（CSF）；V1a受体拮抗剂溶于0.9%氯化钠溶液（含0.3%吐温80）中，腹腔注射或脑室内注射。
小鼠脑渗透性研究：**雄性小鼠口服10 mg/kg剂量的RO5028442。该化合物配制于赋形剂中（本化合物的具体赋形剂未说明，但对于相关化合物，腹腔注射时使用0.3% Tween 80的0.9% NaCl溶液）。在给药后特定时间点采集脑组织和血浆样本。测定两种基质中化合物的浓度，并计算脑血浆比，结果为1.4 [1]。 * **小鼠静脉注射药代动力学研究：**雄性小鼠静脉注射2 mg/kg剂量的RO5028442。在不同时间点采集血样，并测定血浆浓度。采用非房室模型分析计算药代动力学参数，包括清除率 (Cl) 和分布容积 (Vss) [1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
RO5028442 已用于自闭症研究的试验中。
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| 精确质量 |
437.187
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|---|---|
| 元素分析 |
C, 68.56; H, 6.44; Cl, 8.09; N, 9.59; O, 7.31
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| CAS号 |
920022-47-5
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| 相关CAS号 |
1228088-30-9 (RO5285119; Balovaptan)
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| PubChem CID |
59657596
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| 外观&性状 |
Typically exists as white to off-white solids at room temperature
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
621.3±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
329.6±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.646
|
| LogP |
3.68
|
| tPSA |
37.7Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
651
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
QZXVLRCMAHJVIP-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H28ClN3O2/c1-27(2)13-14-29-16-21(20-8-7-19(26)15-23(20)29)24(30)28-11-9-25(10-12-28)22-6-4-3-5-18(22)17-31-25/h3-8,15-16H,9-14,17H2,1-2H3
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| 化学名 |
[6-chloro-1-[2-(dimethylamino)ethyl]indol-3-yl]-spiro[1H-2-benzofuran-3,4'-piperidine]-1'-ylmethanone
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| 别名 |
RO-5028442; RO5028442; Ro-5028442; LZ0EU1YHCK; UNII-LZ0EU1YHCK; (6-Chloro-1-(2-(dimethylamino)ethyl)indol-3-yl)-spiro(1H-isobenzofuran-3,4'-piperidine)-1'-yl-methanone; CHEMBL3416885; RO 5028442
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~20 mg/mL (~45.67 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (4.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (4.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (4.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01474278 | COMPLETED | Drug: Placebo Drug: RO5028442 |
Autistic Disorder | Hoffmann-La Roche | 2011-12 | Phase 1 |
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