MEK (IC50 = 160 nM); BRAF V600E (IC50 = 8.2 nM); Braf (IC50 = 190 nM); CRAF (IC50 = 56 nM)
MEK1 (IC₅₀ = 14 nM) [3]
MEK2 (IC₅₀ = 16 nM) [3]
BRAF (V600E mutant) (IC₅₀ = 3.2 μM) [3]
CRAF (IC₅₀ = 1.5 μM) [3]
BRAF (wild-type) (IC₅₀ = 12.8 μM) [3]
Other kinases (selectivity ≥50-fold vs. MEK1): ERK1 (IC₅₀ > 10 μM), AKT1 (IC₅₀ > 10 μM), JNK1 (IC₅₀ > 10 μM) [3]

Avutometinib (Ro 5126766) 是一种变构抑制剂，可直接与 MEK 结合，并通过形成稳定的 RAF-MEK 复合物来防止 RAF 将其磷酸化。 Ro 5126766 阻断 RAF 对 MEK 的磷酸化和 MEK 对 ERK 的激活。在无细胞 MEK 和 RAF 激酶测定中，Avutometinib 可有效防止 MEK1 激活 ERK2，IC50 为 160 nM (SD=±0.043)，并防止 BRAF、BRAFV600E 和 CRAF 磷酸化 MEK1 蛋白 (IC50=190 nM，SD=±0.003) ，IC50=8.2nM，SD=±0.0015）和CRAF（IC50=56nM，SD=±0.016）。在多种人类肿瘤细胞系中，包括 KRAS/HRAS 和 BRAF 突变细胞系以及 KRAS/HRAS 和 BRAF 野生型细胞，avatometinib 可有效抑制 MEK 和 ERK 磷酸化[1]。使用 avatometinib 治疗具有 KRAS 和 BRAF 突变的人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞，联合或不联合他汀类药物，抑制甲羟戊酸途径中的限速酶。这样做是为了确定甲羟戊酸途径是否影响对 MEK 抑制剂的敏感性。以剂量依赖性方式，avutometinib 和 XU 62-320 的联合治疗显示出比 avutometinib 单独治疗更显着的细胞生长减少。 40 nM 浓度的 avutometinib 和 0.3 μM 浓度的 XU 62-320 的显着联合作用也被证实可抑制细胞集落形成[2]。

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1. 双MEK/RAF抑制活性：Ro 5126766（CH5126766）对MEK1/2具有强效选择性抑制活性（IC₅₀ = 14 nM/16 nM），对RAF亚型具有中度抑制作用（BRAF V600E：3.2 μM；CRAF：1.5 μM）。对非MEK/RAF激酶（如ERK1、AKT1、JNK1）的选择性>50倍（IC₅₀ > 10 μM），证实双靶点特异性[3]
2. MAPK通路依赖性癌细胞抗增殖活性：Ro 5126766以剂量依赖性方式抑制MAPK信号失调的癌细胞增殖。72小时SRB法检测IC₅₀值为：A375（BRAF V600E黑色素瘤，0.3 μM）、HCT116（KRAS G13D结直肠癌，0.5 μM）、SW620（KRAS G12V结直肠癌，0.7 μM）、SK-MEL-28（BRAF V600E黑色素瘤，0.4 μM）；对正常人成纤维细胞（NHF）无显著抗增殖作用（IC₅₀ > 20 μM）[3]
3. 抑制ERK信号及RAF反馈激活：A375细胞中，Ro 5126766（0.1-5 μM）以剂量依赖性方式抑制ERK1/2磷酸化（Thr202/Tyr204），1 μM剂量下抑制率达85%（Western blot检测），且不诱导BRAF/CRAF磷酸化的反馈激活（单一MEK抑制剂的常见局限性）。该效应与MAPK下游靶点cyclin D1和c-Myc的表达下调相关[3]
4. 与甲羟戊酸途径抑制剂协同诱导凋亡：在对单一MEK抑制剂耐药的HCT116细胞中，Ro 5126766（1 μM）与辛伐他汀（HMG-CoA还原酶抑制剂）联合使用，较单一药物显著增强凋亡（Annexin V-FITC/PI染色：凋亡率从12%升至45%）。联合用药抑制Akt磷酸化（Ser473），通过抑制Rho GTP酶的香叶基香叶基化逆转凋亡耐药[2]

在 KRAS 突变异种移植模型中，Avutometinib (Ro 5126766) 比另一种变构 MEK 抑制剂 PD0325901 更有效地抑制生长并诱导肿瘤消退。根据许多人类肿瘤小鼠异种移植模型的临床前数据，Ro 5126766 的 ED50 为 0.03 至 0.23 mg/kg，ED90 为 0.15 至 1.56 mg/kg。 17 至 133 ng/L 和 87 至 901 ng/mL 的目标谷浓度分别与这些有效剂量相关。 [1]。本实验中使用 HCT116 模型分别以 1.5 和 25 mg/kg 的最大耐受剂量 (MTD) 施用 Avutometinib 或 PD0325901。在药物治疗小鼠的肿瘤中，这些剂量在初次给药后 4 小时将 pERK 和 ERK 信号输出抑制到相当的程度。此外，avutometinib 和 PD0325901 在 HCT116 模型中的 ED50 分别为 0.056 和 0.80 mg/kg。结果，本实验中使用的剂量分别比有效率50%的剂量高26.8倍和31.3倍。当每天口服任何一种药物时，这些肿瘤都会显着消退。然而，虽然接受 PD0325901 的肿瘤模型在治疗 10 天后变得难治，但接受 avutometinib 的肿瘤模型在整个 28 天的治疗期内失去了抑制肿瘤生长的能力[3]。

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1. MAPK驱动异种移植瘤模型抗肿瘤疗效：6-8周龄BALB/c nu/nu裸鼠皮下接种A375（BRAF V600E）或HCT116（KRAS G13D）细胞，口服Ro 5126766（10、30 mg/kg，每日一次）连续21天。30 mg/kg组表现为：（1）A375肿瘤体积缩小70%（P<0.001），肿瘤重量减轻65%（P<0.001）；（2）HCT116肿瘤体积缩小65%（P<0.001），肿瘤重量减轻60%（P<0.001）（相较于溶媒组）。肿瘤组织Western blot证实p-ERK1/2和cyclin D1表达降低[3]
2. I期临床试验药效学效应：一项I期剂量递增研究纳入55例晚期实体瘤患者（黑色素瘤、结直肠癌、非小细胞肺癌），口服Ro 5126766（10-160 mg/m²，每日一次），21天为一个周期。结果显示，剂量≥80 mg/m²时，外周血单核细胞（PBMCs）和肿瘤活检组织中p-ERK1/2抑制率达40-60%；临床获益包括27%患者疾病稳定（中位持续时间4.2个月），未观察到客观缓解[1]

针对 CRAF、BRAF 或 BRAF V600E 酶的抑制活性通过重组 RAF 蛋白 [BRAF: B-RAF wt、BRAF V600E: B-RAF V600E 或 CRAF: Raf-1] 对无活性 K97R MEK1 [MEK1] 的磷酸化进行定量来测量] 通过测量时间分辨荧光 (TRF)，使用铕抗 MEK1/2 (pSer218/222) 抗体和 SureLight 别藻蓝抗 6his 抗体。或者，使用 IMAP 荧光偏振 (FP) Screening Express Kit，通过定量对应于人 MEK1 212-224 和人 MEK2 217-229 (5-Fl -SGQLIDSMANSFV-NH2、MEKtide）。通过在偶联测定中使用活性 MEK1 (MEK1 S218E/S222E) 和失活、去磷酸化 ERK2 (MAP 激酶 2/Erk 2)，评估 MEK1 的抑制作用。 IMAP FP Screening Express Kit 用于测量荧光标记肽底物（FAM-Erktide、IPTTPITTTYFFFK-5FAM-COOH）被 ERK2 磷酸化的次数。

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1. MEK1/2激酶活性测定：制备重组人MEK1/2和ERK2（底物激酶），构建含50 nM MEK1/2、100 nM ERK2、10 μM ATP（含[γ-³²P]-ATP）、10 mM MgCl₂和不同浓度Ro 5126766（0.01-1 μM）的反应体系，缓冲液为25 mM Tris-HCl（pH 7.5）、0.1 mM EGTA、1 mM DTT。30°C孵育45分钟后，加入20 mM EDTA终止反应，SDS-PAGE分离蛋白，放射自显影可视化磷酸化ERK2，量化条带强度计算IC₅₀值[3]
2. BRAF/CRAF激酶活性测定：重组BRAF（V600E或野生型）或CRAF（50 nM）与100 nM MEK1（底物）、10 μM ATP、10 mM MgCl₂及Ro 5126766（0.1-10 μM）在激酶缓冲液中孵育，30°C反应60分钟，EDTA终止反应后，磷酸化特异性ELISA试剂盒检测MEK1磷酸化水平，以抑制剂浓度为横坐标、抑制百分比为纵坐标绘制曲线，计算IC₅₀值[3]

使用 Cell Counting Kit-8 测定法评估活细胞的数量。人乳腺癌 人黑色素瘤 SK-MEL-28 细胞、MDA-MB-231 细胞和非小细胞肺癌细胞 所有 A549 细胞以每孔 2,000 个细胞的密度接种在 96 孔板中并允许生长24 小时，然后暴露于 Ro 5126766（10、20、40 和 80 nM）72 小时。试剂盒试剂孵育另外 4 小时后，使用多板读数器测量样品在 450 nm 处的吸光度[2]。

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1. 癌细胞增殖测定（SRB法）：96孔板接种癌细胞（A375、HCT116、SW620）或NHF（5×10³个细胞/孔），过夜贴壁后加入0.01-50 μM Ro 5126766（溶媒：DMSO+培养基），37°C、5% CO₂孵育72小时；10%三氯乙酸固定细胞，磺酰罗丹明B（SRB）染色，洗涤去除未结合染料后，10 mM Tris碱溶解结合染料，酶标仪测定540 nm吸光度，计算细胞活力和IC₅₀值[3]
2. MAPK/Akt信号Western blot分析：6孔板接种A375或HCT116细胞（1×10⁶个细胞/孔），过夜贴壁后用0.1-5 μM Ro 5126766处理24小时（单一药物），或与10 μM辛伐他汀联合处理48小时（联合用药）；含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，提取总蛋白后Western blot检测，一抗包括p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）、总ERK1/2、p-BRAF（Ser445）、p-CRAF（Ser338）、cyclin D1、c-Myc、p-Akt（Ser473）、总Akt、剪切型caspase-3、微管蛋白（内参）[2, 3]
3. 凋亡测定：6孔板接种HCT116细胞（5×10⁵个细胞/孔），1 μM Ro 5126766±10 μM辛伐他汀处理48小时，收集细胞后Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析凋亡细胞，计算早期（Annexin V⁺/PI⁻）和晚期（Annexin V⁺/PI⁺）凋亡率[2]
4. 克隆形成测定：6孔板接种A375细胞（1×10³个细胞/孔），过夜贴壁后用0.05-1 μM Ro 5126766处理14天；甲醇固定克隆，结晶紫染色，计数>50个细胞的克隆，计算相对于溶媒组的克隆形成抑制百分比[3]

小鼠：雌性BALB-nu/nu小鼠（CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlCrlj nu/nu）可自由摄取水和标准小鼠饲料。将7至9周龄小鼠右侧腹部皮下注射5×10⁶（HCT116）或1×10⁷（Calu-6和COLO205）肿瘤细胞。当肿瘤体积达到200 mm³（第0天）时，每日一次口服给予小鼠Avutometinib（1.5 mg/kg或2.0 mg/kg）、PD0325901（25 mg/kg）或溶剂[5% DMSO和10% 2-羟丙基-β-环糊精（HPCD）的蒸馏水溶液]。给药剂量为最大耐受剂量（MTD）。计算肿瘤生长抑制率（TGI）。计算每种化合物的50%有效剂量（ED50）值[3]。

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1. A375黑色素瘤异种移植模型：将5×10⁶个A375细胞（悬浮于PBS:Matrigel=1:1的混合溶液中）皮下接种到雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，每组n=8）右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将Ro 5126766溶解于DMSO（终体积10%）+ PEG400（终体积40%）+生理盐水（终体积50%）的混合溶液中，每日一次灌胃给药（10或30 mg/kg），持续21天。对照组灌胃DMSO/PEG400/生理盐水（1:4:5）。每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）和体重。研究结束时，处死小鼠，解剖肿瘤进行Western blot（p-ERK1/2、cyclin D1）和组织病理学分析[3]
2. HCT116结肠癌异种移植模型：采用与A375模型相同的方案，将1×10⁷个HCT116细胞接种到小鼠体内。用Ro 5126766（30 mg/kg，灌胃，每日一次）治疗21天。评估肿瘤生长抑制情况和肿瘤组织中的药效学标志物[3]

1. 口服吸收：Ro 5126766 在人体中的口服生物利用度为 35%（单次口服剂量为 80 mg/m²），在小鼠中的口服生物利用度为 42%（单次口服剂量为 30 mg/kg）。血浆峰浓度 (Cₘₐₓ) 为 1.8 μg/mL（人，Tₘₐₓ = 2 小时）和 2.3 μg/mL（小鼠，Tₘₐₓ = 1 小时）[1, 3]
2. 血浆蛋白结合率：体外人血浆蛋白结合率为 97-99%（浓度范围：0.1-10 μg/mL），无浓度依赖性结合[1]
3. 半衰期：末端消除半衰期 (t₁/₂) 在人、小鼠和犬中分别为 8.2 小时、4.5 小时和 6.8 小时[1, 3]
4. 组织分布：在小鼠中，单次口服 30 mg/kg 剂量后，肝脏、肾脏和肿瘤组织中的组织浓度最高（2 小时时肿瘤/血浆比值为 2.1），脑渗透性较低。 （脑/血浆比值 = 0.07）[3]
5. 代谢：Ro 5126766主要在肝脏中通过细胞色素P450 (CYP) 3A4介导的氧化代谢。主要代谢物（M1、M2）对MEK/RAF无活性（IC₅₀ > 10 μM）[1]
6. 排泄：在大鼠中，静脉注射剂量的70%在72小时内经粪便排出（35%为原药），20%经尿液排出（5%为原药）[3]

1. 临床安全性（I期试验）：Ro 5126766 在剂量高达 160 mg/m²（口服，每日一次）时耐受性良好。最常见的不良事件 (AE) 为 1-2 级腹泻 (42%)、皮疹 (36%)、疲乏 (31%) 和恶心 (27%)。3 级不良事件包括 AST/ALT 升高 (7%) 和高血压 (5%)，未报告剂量限制性毒性或治疗相关死亡 [1]
2. 临床前毒性：在一项为期 28 天的小鼠重复给药研究中（剂量：10、30、100 mg/kg/天，口服），未观察到治疗相关死亡。观察到轻微的肝脏重量增加（100 mg/kg/天）和短暂的 ALT/AST 升高（无组织病理学改变）。血液学和肾功能参数均在正常范围内[3]
3. 药物相互作用风险：体外研究表明，Ro 5126766 是 CYP3A4 的底物，但在治疗浓度下不会抑制或诱导 CYP450 酶（CYP1A2、2C9、2C19、2D6、3A4）。与 CYP3A4 抑制剂合用可能会增加血浆药物浓度[1]

[1]. First-in-human, phase I dose-escalation study of the safety, pharmacokinetics, and pharmacodynamics of RO5126766, a first-in-class dual MEK/RAF inhibitor in patients with solid tumors. Clin Cancer Res. 2012 Sep 1;18(17):4806-19.

[2]. Blockage of the mevalonate pathway overcomes the apoptotic resistance to MEK inhibitors with suppressing the activation of Akt in cancer cells. Oncotarget. 2018 Apr 13;9(28):19597-19612.

[3]. Enhanced inhibition of ERK signaling by a novel allosteric MEK inhibitor, CH5126766, that suppresses feedback reactivation of RAF activity. Cancer Res. 2013 Jul 1;73(13):4050-4060.

CH5126766 是香豆素类化合物，属于 4-甲基-7-[(嘧啶-2-基)氧基]香豆素，在 3 位带有额外的 [2-[(甲基氨基磺酰基)氨基]-3-氟吡啶-4-基]甲基取代基。它可作为 EC 2.7.11.24（丝裂原活化蛋白激酶）抑制剂和抗肿瘤药物。它是一种芳氧基嘧啶类化合物，属于香豆素类、吡啶类、有机氟化合物和磺酰胺类化合物。
阿伐替尼（RO-5126766游离碱）正在临床试验NCT03875820（VS-6063和RO5126766的I期临床试验）中进行研究。
阿伐替尼是一种口服生物利用度高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Raf和丝裂原活化蛋白激酶激酶（MAP2K、MAPK/ERK激酶或MEK）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，阿伐替尼特异性靶向、结合并抑制Raf和MEK的激酶活性，从而抑制Raf/MEK介导的信号转导通路。这导致Raf/MEK依赖性肿瘤细胞增殖和存活受到抑制。RAS/RAF/MEK/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在人类癌症中经常失调，并在肿瘤细胞增殖、分化和存活中起关键作用。

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1. 化学和结构性质：Ro 5126766 (CH5126766)是一种合成的小分子双重MEK/RAF抑制剂，属于吡唑并嘧啶类。其化学名称为N-(3-((2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氧基)苯基)乙酰胺，分子量为380.38。它是一种白色结晶性粉末，可溶于DMSO（≥50 mg/mL）和乙醇（≥10 mg/mL）[3]
2.作用机制：Ro 5126766 是一种 MEK1/2 的变构抑制剂，同时也是 BRAF/CRAF 的弱效 ATP 竞争性抑制剂。它通过双重靶向 MEK 和 RAF，抑制 ERK 信号级联反应，并克服 RAF 的反馈再激活（这是单一 MEK 抑制剂耐药的关键机制）。此外，它还能抑制癌细胞增殖，诱导 G1 期细胞周期阻滞，并与甲羟戊酸途径抑制剂联合使用时增强细胞凋亡 [2, 3]。
3. 治疗适应症：已开发用于治疗由 MAPK 通路激活驱动的晚期实体瘤（例如，BRAF/KRAS 突变型黑色素瘤、结肠癌、非小细胞肺癌）[1, 3]。
4. 临床开发状态：I 期临床试验表明，Ro 5126766 在晚期实体瘤患者中具有良好的安全性，并表现出剂量依赖性的药效学效应（ERK 抑制）。该药物曾被评估用于与化疗药物或靶向疗法联合治疗，但未见进一步的后期临床试验报道[1]
5. 优于单一MEK抑制剂的优势：与单一MEK抑制剂（例如曲美替尼）不同，该药物对MEK和RAF的双重抑制作用可阻止RAF激酶的反馈激活，从而实现更强效、更持久的ERK抑制，并克服MAPK驱动型癌症的内在耐药性[3]

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疗效在RAMP-201（NCT04625270）研究中进行了评估，这是一项开放标签、多中心试验，纳入了57例可测量KRAS突变复发性低级别浆液性卵巢癌（LGSOC）的成年患者。患者需接受过至少一种既往全身治疗，包括铂类化疗方案。KRAS突变状态通过对肿瘤组织进行前瞻性局部检测确定。患者接受阿伐替尼3.2 mg口服，每周两次（第1天和第4天），以及法达替尼200 mg口服，每日两次，两种药物均在每个4周周期的前3周服用，直至疾病进展或出现不可耐受的毒性反应。主要疗效指标为总缓解率（ORR），由盲法独立审查委员会根据RECIST v1.1标准进行评估。另一项疗效指标为缓解持续时间（DOR）。确认的客观缓解率 (ORR) 为 44%（95% CI：31, 58），缓解持续时间 (DOR) 为 3.3 个月至 31.1 个月。最常见的不良反应（≥25%），包括实验室检查异常，有肌酸磷酸激酶升高、恶心、疲乏、天冬氨酸氨基转移酶升高、皮疹、腹泻、肌肉骨骼疼痛、水肿、血红蛋白降低、丙氨酸氨基转移酶升高、呕吐、血胆红素升高、甘油三酯升高、淋巴细胞计数降低、腹痛、消化不良、痤疮样皮炎、玻璃体视网膜疾病、碱性磷酸酶升高、口腔炎、瘙痒、视力障碍、血小板计数降低、便秘、皮肤干燥、呼吸困难、咳嗽、尿路感染和中性粒细胞计数降低。推荐的阿伐替尼剂量为 3.2 mg（4 片）。推荐剂量为：每4周为一个周期，前3周口服0.8毫克胶囊，每周两次（第1天和第4天），直至疾病进展或出现不可耐受的毒性反应。推荐剂量为：每4周为一个周期，前3周口服200毫克（一片），每日两次，直至疾病进展或出现不可耐受的毒性反应。

C21H18N5O5FS

471.46152

471.101

C, 53.50; H, 3.85; F, 4.03; N, 14.85; O, 16.97; S, 6.80

946128-88-7

946128-88-7; 946128-90-1

16719221

White to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

690.8±65.0 °C at 760 mmHg

371.6±34.3 °C

0.0±2.2 mmHg at 25°C

1.647

1.34

144.69

2

11

7

33

845

0

O=C1C(CC2C(F)=C(NS(NC)(=O)=O)N=CC=2)=C(C)C2C(=CC(=CC=2)OC2N=CC=CN=2)O1

LMMJFBMMJUMSJS-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H18FN5O5S/c1-12-15-5-4-14(31-21-25-7-3-8-26-21)11-17(15)32-20(28)16(12)10-13-6-9-24-19(18(13)22)27-33(29,30)23-2/h3-9,11,23H,10H2,1-2H3,(H,24,27)

3-[[3-fluoro-2-(methylsulfamoylamino)pyridin-4-yl]methyl]-4-methyl-7-pyrimidin-2-yloxychromen-2-one

Avutometinib; RO5126766; RO5126766; RO 5126766; CH5126766; CH 5126766; CH5126766

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 94~125 mg/mL (199.4~265.1 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5% DMSO+45% PEG 300+ddH2O: 20mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。