| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MDM2 (IC50 = 5 nM); MDM2 (IC50 = 20 nM)
Mouse Double Minute 2 Homolog (MDM2) (Ki = 0.45 nM in HTRF MDM2-p53 binding assay; IC₅₀ = 0.8 nM in MDM2 enzymatic assay) [1] Other homologous proteins (selectivity > 1000-fold vs. MDM2): MDMX (IC₅₀ > 500 nM), p300 (IC₅₀ > 1000 nM), HDM2 (human MDM2, Ki = 0.6 nM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
1. 强效抑制MDM2-p53相互作用：RO8994是螺吲哚酮类MDM2抑制剂，通过HTRF实验证实其特异性阻断MDM2与p53的结合（Ki = 0.45 nM），并抑制MDM2酶活性（IC₅₀ = 0.8 nM）。对MDMX及其他p53相互作用蛋白（如p300）的选择性>1000倍，证实MDM2特异性靶向性[1]
2. p53野生型癌细胞抗增殖活性：RO8994以剂量依赖性方式抑制p53野生型癌细胞增殖。72小时MTT法检测IC₅₀值为：SJSA-1（骨肉瘤，0.03 μM）、HCT116（结直肠癌，0.05 μM）、A549（肺癌，0.08 μM）、MCF-7（乳腺癌，0.1 μM）；对p53缺失型（Saos-2，IC₅₀ > 10 μM）或p53突变型（MDA-MB-231，IC₅₀ > 10 μM）癌细胞无显著抗增殖作用，表明其活性依赖p53通路[1] 3. 激活p53信号通路：Western blot检测显示，RO8994（0.01-1 μM）以剂量依赖性方式激活SJSA-1细胞中p53通路。0.1 μM剂量下，p53蛋白水平升高3.5倍，p53靶基因产物p21升高4.2倍，促凋亡蛋白Bax升高3.8倍，而MDM2蛋白水平降低60%（负反馈调节）；p53 mRNA水平无变化，证实药物通过转录后稳定p53发挥作用[1] 4. 诱导凋亡与细胞周期阻滞：RO8994（0.05-1 μM）处理HCT116细胞48小时后，流式细胞术分析显示G1期细胞比例从45%升高至68%（0.5 μM剂量），诱导G1期阻滞；Annexin V-FITC/PI染色显示凋亡率从3%升高至42%（1 μM剂量）。Western blot检测到caspase-3、caspase-7和PARP的剪切片段，表明凋亡通路被激活[1] 5. 抑制克隆形成能力：RO8994（0.01-0.5 μM）以剂量依赖性方式抑制SJSA-1和HCT116细胞克隆形成。0.1 μM剂量下，SJSA-1和HCT116细胞的克隆形成率较溶媒组分别降低85%和78%，证实其长期抗增殖效应[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. SJSA-1骨肉瘤异种移植瘤模型疗效：6-8周龄BALB/c nu/nu裸鼠皮下接种5×10⁶ SJSA-1细胞，肿瘤体积达100-150 mm³后，随机分为三组（每组n=6）：溶媒组（DMSO/PEG400/生理盐水=1:4:5）、RO8994 10 mg/kg组和20 mg/kg组。药物每日腹腔注射（i.p.）一次，持续14天。20 mg/kg组肿瘤体积较溶媒组缩小82%（P<0.001），肿瘤重量减轻75%（P<0.001）；肿瘤组织Western blot证实p53、p21蛋白水平升高，PARP剪切片段增加[1]
2. HCT116结直肠癌异种移植瘤模型疗效：皮下接种1×10⁷ HCT116细胞的裸鼠接受RO8994（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次）处理21天，肿瘤体积较溶媒组缩小70%（P<0.001），小鼠平均体重下降<3%（无显著变化）。肿瘤组织病理学分析显示凋亡细胞增多（TUNEL实验），Ki-67阳性增殖细胞减少[1] |
| 酶活实验 |
1. HTRF-based MDM2-p53结合抑制实验：制备重组人MDM2（1-188位残基）和荧光标记p53肽段（15-29位残基，N端标记Eu³⁺-cryptate，C端标记XL665）。构建含20 nM MDM2、5 nM p53肽段及系列稀释的RO8994（0.001-10 nM）的反应体系，缓冲液为50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、0.01% Tween-20、1 mM DTT。室温孵育1小时后，检测时间分辨荧光共振能量转移（HTRF）信号（激发光337 nm，发射光620 nm和665 nm），计算665 nm/620 nm荧光比值，通过竞争结合曲线的非线性回归分析计算Ki值[1]
2. MDM2酶活性实验：制备具有E3泛素连接酶活性的重组MDM2和p53底物，构建含50 nM MDM2、100 nM p53、2 μM泛素、0.5 μM E1、2 μM E2、5 mM ATP及不同浓度RO8994（0.01-10 nM）的泛素化反应体系，缓冲液为50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl₂、1 mM DTT。37°C孵育90分钟后，加入2×SDS-PAGE上样缓冲液终止反应，SDS-PAGE分离蛋白，抗p53抗体Western blot检测泛素化p53，量化泛素化条带强度计算IC₅₀值[1] |
| 细胞实验 |
1. 细胞增殖实验（MTT法）：96孔板接种p53野生型（SJSA-1、HCT116、A549、MCF-7）和p53缺失/突变型（Saos-2、MDA-MB-231）癌细胞（5×10³个细胞/孔），过夜贴壁后加入0.001-50 μM RO8994（溶媒：DMSO+培养基），37°C、5% CO₂孵育72小时。每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL），孵育4小时后弃上清，加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，酶标仪测定570 nm吸光度，计算细胞活力和IC₅₀值[1]
2. p53通路激活Western blot分析：6孔板接种SJSA-1细胞（1×10⁶个细胞/孔），过夜贴壁后用0.01-1 μM RO8994处理24小时。含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，提取总蛋白并BCA定量。SDS-PAGE分离蛋白后转印至PVDF膜，一抗孵育（抗p53、p21、Bax、MDM2、剪切型caspase-3、剪切型PARP、微管蛋白（内参））。HRP标记二抗孵育后化学发光显影，ImageJ软件定量条带强度[1] 3. 流式细胞术细胞周期与凋亡分析：细胞周期分析：6孔板接种HCT116细胞（5×10⁵个细胞/孔），0.05-1 μM药物处理48小时，70%乙醇固定，碘化丙啶（50 μg/mL）+ RNase A（100 μg/mL）染色，流式细胞术分析；凋亡分析：相同浓度药物处理48小时，Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术检测凋亡细胞[1] 4. 克隆形成实验：6孔板接种SJSA-1或HCT116细胞（1×10³个细胞/孔），过夜贴壁后加入0.01-0.5 μM RO8994，37°C、5% CO₂孵育14天，每3天更换含药培养基。孵育结束后，甲醇固定克隆，结晶紫染色，计数>50个细胞的克隆，计算相对于溶媒组的克隆形成抑制百分比[1] |
| 动物实验 |
1. SJSA-1骨肉瘤异种移植模型：使用6-8周龄雌性BALB/c裸鼠（每组n=6）。将5×10⁶个SJSA-1细胞悬浮于0.2 mL PBS:Matrigel (1:1)混合液中，皮下注射至小鼠右侧腹部。每日监测肿瘤生长情况；当肿瘤体积达到100-150 mm³时，开始治疗。将RO8994溶于DMSO（终体积10%），再用PEG400（终体积40%）和生理盐水（终体积50%）稀释，配制成1 mg/mL和2 mg/mL的溶液。每日腹腔注射给药一次（10 mg/kg或20 mg/kg），连续14天；对照组注射不含药物的相同DMSO/PEG400/生理盐水混合液。每2天测量肿瘤体积（长×宽²/2）和体重。治疗结束后处死小鼠，解剖肿瘤进行Western blot和组织病理学分析[1]
2. HCT116结肠癌异种移植模型：使用6-8周龄雌性BALB/c裸鼠（每组n=6）。将1×10⁷个HCT116细胞悬浮于0.2 mL PBS:Matrigel（1:1）混合液中，皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，给予RO8994（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次）或载体，持续21天。每2天监测肿瘤体积和体重。研究结束后处死小鼠，解剖肿瘤进行TUNEL检测、Ki-67免疫组化和Western blot分析[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 血浆蛋白结合率：体外人血浆蛋白结合率为 91-93%（浓度范围：0.1-10 μg/mL），无浓度依赖性结合[1]
2. 体外代谢稳定性：RO8994在人肝微粒体（t₁/₂ = 280 分钟）和小鼠肝微粒体（t₁/₂ = 240 分钟）中均表现出良好的代谢稳定性，表明其对肝脏代谢的敏感性较低[1] 3. 细胞渗透性：RO8994在 Caco-2 细胞单层渗透试验中表现出良好的细胞渗透性（表观渗透系数 Papp = 1.2 × 10⁻⁵ cm/s），提示其具有潜在的口服生物利用度[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性：RO8994对正常人成纤维细胞（NHF）显示出较低的细胞毒性，CC₅₀ > 50 μM，因此对SJSA-1细胞的治疗指数（CC₅₀/EC₅₀）> 625 [1]
2. 体内安全性：在14-21天的异种移植研究中，RO8994（10-20 mg/kg，腹腔注射）未引起体重（平均体重减轻<3%）、食物摄入量或行为的显著变化。血清ALT、AST、BUN和肌酐水平均在正常范围内，肝脏、肾脏、心脏和肺的组织病理学检查未发现药物相关病变[1] 3. 急性毒性：小鼠腹腔注射RO8994的半数致死量（LD₅₀）>100 mg/kg[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 化学和结构性质：RO8994是一种合成的螺吲哚啉酮小分子，化学名称为(3S,6R)-3-(4-氯苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮。它是一种白色结晶性粉末，可溶于DMSO（≥50 mg/mL）和乙醇（≥10 mg/mL），微溶于水[1]。
2. 作用机制：RO8994与MDM2的p53结合口袋具有高亲和力，可阻断MDM2-p53相互作用。这可阻止MDM2介导的p53泛素化和降解，从而导致p53蛋白的稳定和积累。活化的p53可反式激活下游靶基因（例如p21、Bax），从而诱导p53野生型癌细胞发生细胞周期阻滞和凋亡[1] 3. 治疗潜力：已开发用于治疗p53野生型实体瘤，包括骨肉瘤、结肠癌、肺癌和乳腺癌。其对MDM2的高选择性和p53依赖性活性可最大限度地减少对正常细胞（p53水平低或p53通路失活）的脱靶效应[1] 4. 结构优化：RO8994衍生自螺吲哚啉酮骨架，经过优化以增强MDM2结合亲和力和代谢稳定性。关键的结构修饰包括4-氯苯基和4-甲氧基苯基的取代，从而改善与MDM2疏水口袋的疏水相互作用[1] |
| 分子式 |
C31H31CL2FN4O4
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|---|---|
| 分子量 |
613.5066
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| 精确质量 |
612.171
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| 元素分析 |
C, 60.69; H, 5.09; Cl, 11.56; F, 3.10; N, 9.13; O, 10.43
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| CAS号 |
1309684-94-3
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| 相关CAS号 |
1309684-94-3
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| PubChem CID |
53238217
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.41±0.1 g/cm3 (20 ºC ,760 mmHg), 计算值
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| LogP |
6.869
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| tPSA |
122.55
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
42
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| 分子复杂度/Complexity |
1040
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
ClC1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])N([H])C([C@@]12C([H])(C2C([H])=C([H])C([H])=C(C=2F)Cl)C([H])(C(N([H])C2C([H])=C([H])C(C(N([H])[H])=O)=C([H])C=2OC([H])([H])[H])=O)N([H])C1([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O
|
| InChi Key |
MURAVORBGFDSMA-ISKXDESKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C31H31Cl2FN4O4/c1-30(2,3)14-23-31(18-10-9-16(32)13-21(18)37-29(31)41)24(17-6-5-7-19(33)25(17)34)26(38-23)28(40)36-20-11-8-15(27(35)39)12-22(20)42-4/h5-13,23-24,26,38H,14H2,1-4H3,(H2,35,39)(H,36,40)(H,37,41)/t23-,24-,26+,31+/m0/s1
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| 化学名 |
(2'R,3R,3'S,5'S)-N-(4-carbamoyl-2-methoxyphenyl)-6-chloro-3'-(3-chloro-2-fluorophenyl)-5'-(2,2-dimethylpropyl)-2-oxospiro[1H-indole-3,4'-pyrrolidine]-2'-carboxamide
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| 别名 |
RO-8994; RO 8994; RO8994
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 45~100 mg/mL (73.4~163.0 mM)
Ethanol: ~13 mg/mL (~21.2 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6300 mL | 8.1498 mL | 16.2997 mL | |
| 5 mM | 0.3260 mL | 1.6300 mL | 3.2599 mL | |
| 10 mM | 0.1630 mL | 0.8150 mL | 1.6300 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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ReACp53 scrambled peptide TFA
p53-hDM2 cyclic peptide inhibitor 16e
MMRi6
dsP53-285 saRNA
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