PDE4 (IC50 = 0.2~0.9 nM)

罗氟司特/Roflumilast是大多数测试的 PDE4 剪接变体的亚纳摩尔抑制剂，并且对 PDE4 以外的 PDE 酶没有影响。除了 PDE4C（4C1，IC50=3 nM；4C2，IC50= 4.3 nM）外，其抑制效力稍差，它没有表现出 PDE4 同工型选择性 [2]。罗氟司特是一种强效且特异性的 PDE4 抑制剂。在浓度高达 10,000 倍时，罗氟司特不会影响其他 PDE 同工酶，例如 PDE1、PDE2、PDE3 或 PDE5。这使其成为 PDE4 的单选择性抑制剂。罗氟司特抑制人中性粒细胞的活性。罗氟司特可阻止单核细胞衍生的树突状细胞合成 TNFα。 rolfumilast 抑制细胞因子合成和 CD4+ T 细胞增殖。 rolumilast 在 7 nM 的效力 (IC30) 下可抑制高达 60% 的增殖 [3]。

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1993年，在一项综合筛选规划中，从一系列苯酰胺中鉴定出罗氟司特。Roflumilast/罗氟司特的高效和选择性竞争性抑制PDE4，而不影响PDE1、2、3或5同工酶，来自各种细胞和组织，此前已有报道。这些早期研究已经扩展到一系列人类重组PDE酶对PDE1-11的测试（表1）。结果证实罗氟司特不影响任何其他PDE酶，并且是大多数PDE4剪接变体的亚纳摩尔抑制剂。罗氟司特对PDE4亚型没有选择性，但对PDE4C有抑制作用，效价略低。PDE4亚型抑制的一半最大抑制浓度（IC50）值（表1）在其他人报道的截断PDE4A-D版本的抑制范围内[1]。

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从一系列苯酰胺衍生物中，Roflumilast（3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基- n -[3,5-二氯吡啶-4-基]-苯酰胺）被鉴定为一种有效的选择性PDE4抑制剂。它抑制人中性粒细胞PDE4的活性，IC（50）为0.8 nM，即使在10,000倍的浓度下也不影响PDE1（牛脑），PDE2（大鼠心脏）和PDE3和PDE5（人血小板）。罗氟米司特在体内形成的主要代谢物（罗氟米司特n -氧化物）和piclamilast （RP 73401）的效力几乎相同，但比罗利普兰和Ariflo (cilomilast；某人207499)。利用细胞特异性反应研究了罗氟司特及其参比化合物在各种人类白细胞中的抗炎和免疫调节潜能：中性粒细胞[n-甲酰基-甲基-leucyl-苯丙氨酸（fMLP）诱导的LTB(4)和活性氧（ROS）的形成]，嗜酸性粒细胞（fMLP-和c5a诱导的ROS的形成），单核细胞，单核细胞来源的巨噬细胞，树突状细胞（脂多糖诱导的肿瘤坏死因子α合成），和CD4+ T细胞（抗cd3 /抗cd28单克隆抗体刺激的增殖，IL-2, IL-4， IL-5和干扰素γ释放）。与细胞类型和所研究的反应无关，罗氟司特相应的IC值（半最大抑制）在一个狭窄的范围内（2-21 nM），与罗氟司特n -氧化物（3-40 nM）和piclamilast （2-13 nM）非常相似。相比之下，西洛司特（40-3000 nM）和罗利普兰（10-600 nM）对中性粒细胞的效价最高，差异更大。与代表终末炎症效应细胞的中性粒细胞和嗜酸性粒细胞相比，罗氟司特及其n -氧化物对单核细胞、CD4+ T细胞和树突状细胞的相对效力明显高于西罗司特和罗利普兰，这可能反映了免疫调节潜力的改善。罗氟米司特在体外和体内的疗效（见本期随附文章）表明，罗氟米司特将有助于治疗慢性炎症性疾病，如哮喘和慢性阻塞性肺病。[3]

对动物的研究表明，使用罗氟司特可减少小鼠、大鼠或豚鼠短期接触烟草烟雾后支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞的积聚；此外，它还能消除暴露于烟草烟雾七个月的大鼠肺实质中炎症细胞的浸润[2]。在 pIgR 中，rolumilast 可以预防 COPD 的进展？*？老鼠。 9 个月大的 WT 或 pIgR 用于这些研究？*？三个月内，小鼠接受 100 μg 罗氟司特 (5 μg/g) 或载体（4% 甲基纤维素，1.3% PEG400）口服强饲治疗。大约12个月大时，肺部被摘除。当罗氟司特给予小鼠时，轻微气道壁重塑并未像媒介物处理的 pIgR-/- 动物那样进展。令人惊讶的是，12 个月大的 pIgR 接受了罗鲁司特？*？与9个月大的pIgR相比，小鼠的肺气肿指数较低。*？正如小鼠所证明的那样，在这种情况下，罗氟司特不仅可以阻止肺气肿的发展。似乎有助于解决整个肺气肿过程中肺实质的肺气肿损失[4]。

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在体内实验中，罗氟司特能显著改善COPD关键病理机制，包括烟草烟雾诱导的肺部炎症、黏液纤毛功能障碍、肺纤维化与肺气肿样重塑、氧化应激、肺血管重塑及肺动脉高压。体外研究显示，罗氟司特N-氧化物可影响多种细胞功能，包括中性粒细胞、单核/巨噬细胞、CD4+与CD8+ T细胞、内皮细胞、上皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞。这些细胞效应被认为是罗氟司特改善COPD病理机制的基础，最终体现为急性加重减少和肺功能改善。作为一种多组分疾病，COPD需要PDE4抑制实现的广谱治疗策略。但需注意，作为PDE4抑制剂，罗氟司特并非直接支气管扩张剂。[1]

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罗氟司特阻断pIgR−/−小鼠的COPD进展[4]
为探究pIgR−/−小鼠进行性小气道重塑和肺气肿是否由细菌诱导的炎症驱动，我们使用磷酸二酯酶-4抑制剂罗氟司特进行抗炎干预。该药已获FDA批准用于COPD患者，并在小鼠COPD模型中证实具有抗炎作用42,43,44,45。本研究对9月龄WT或pIgR−/−小鼠每日灌胃给予100μg罗氟司特（5μg·g−1）或溶媒（4%甲基纤维素，1.3% PEG400）持续3个月，于12月龄取肺组织。与溶媒组不同，罗氟司特治疗完全阻止了小气道壁重塑的进展（图6a）。值得注意的是，治疗组12月龄pIgR−/−小鼠较9月龄小鼠肺气肿指标反而降低，表明该药不仅阻断疾病进展，还可能促进肺实质气肿样破坏的修复（图6b,c）。与无菌环境饲养小鼠类似，罗氟司特处理的WT和pIgR−/−小鼠肺实质中性粒细胞极少（图6d），巨噬细胞数量与溶媒处理的WT小鼠相当（图6e）。伴随炎症减轻，pIgR−/−小鼠肺组织MMP-12和NE表达下降（图6f和附图6）。此外，与溶媒组相比，治疗组肺组织NF-κB活化和KC表达降低（图6g,h和附图7）。这些数据共同表明，持续细菌性炎症驱动了pIgR−/−小鼠的COPD样重塑。

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高脂饮食（HFD）大鼠体重显著增加且不受罗氟司特治疗影响。尿动力学检测显示肥胖大鼠排尿频率和非排尿收缩增加，而罗氟司特可逆转这些异常。这些改变伴随逼尿肌中TNF-α、IL-6、IL-1β和NF-κB表达显著升高。罗氟司特能降低逼尿肌炎症因子表达。 结论：罗氟司特口服治疗可恢复HFD喂养大鼠的正常膀胱功能，并下调膀胱炎症因子表达。[5]

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罗氟司特/Roflumilast对肥胖大鼠膀胱功能障碍的改善作用[5]
为期4周的口服罗氟司特治疗显著改善肥胖大鼠膀胱功能参数：膀胱容量（0.54±0.08ml；N=10）、排尿量（0.52±0.08ml；N=10）、排尿间隔（2.8±0.4min；N=10）及非排尿收缩频率（0.7±0.4；N=10），均优于HFD+溶媒组（N=10；P<0.05；图1）。但最大排尿压力在治疗组（41.5±6.8cm H2O，N=10；P>0.05）无显著变化（图1a,d）。治疗后尿动力学参数与正常饮食+溶媒组相当（N=10；P>0.05；图1）。结果表明罗氟司特可有效改善肥胖大鼠膀胱功能及排尿效率。

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罗氟司特抑制肥胖大鼠炎症反应[5]
为验证该PDE4抑制剂是否通过抑制炎症反应改善肥胖大鼠逼尿肌过度活动（DO），我们对实验动物进行口服罗氟司特干预。免疫组化显示，与溶媒处理的肥胖大鼠相比，治疗组膀胱平滑肌炎症细胞因子表达显著降低（NF-κB 0.68±0.06，TNF-α 0.41±0.06，IL-6 0.39±0.09，IL-1β 0.36±0.09；灰度值；n=16；P<0.05；图2）。qRT-PCR进一步证实治疗组炎症因子基因表达下调（NF-κB 0.64±0.08，TNF-α 0.39±0.08，IL-6 0.37±0.09，IL-1β 0.41±0.09；n=16；P<0.05；图3），且表达水平与正常饮食+溶媒组无差异（n=16；P>0.05；图2,3）。因此，PDE4抑制剂可能通过抑制炎症介质释放和免疫细胞活化发挥治疗作用。

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先将Roflumilast/罗氟司特溶于碱性溶液（0.1 N NaOH）中，用0.1 N HCl滴定至pH 7.4，再用生理盐水稀释
动物在实验前一周在实验室适应，然后随机分为五组（每组10只大鼠），饲养在单独的聚碳酸酯笼中。组(1)仅接受Vehicle（PBS和0.8%甲基纤维素）。组(2)给予Roflumilast/罗氟司特（1 mg/kg， P.O.），每日1次，连用7天，加PBS溶液0.5 ml （i.p）。组(3)单次注射CIS，剂量为7 mg/kg， i.p （Rezvanfar et al., 2013）。加上0.8%的甲基纤维素（P.O）。4组给予 0.3 mg/kg剂量的Roflumilast/罗氟司特，在给药前30 min口服灌胃，连续7天。组(5)给予Roflumilast，剂量为1 mg/kg，在CIS给药前30 min口服灌胃，连续7天。/罗氟司特给药的剂量和途径是根据先前报道的研究选择的[6]。

生化测定[6]
氧化应激参数测定[6]
睾丸匀浆中丙二醛（MDA）（脂质过氧化的标志物）、一氧化氮和谷胱甘肽的含量分别根据Preuss等人（1998）、Grisham等人（1996）和Griffith（1980）描述的方法测定。睾丸CAT活性根据制造商的说明使用商业检测试剂盒进行测定。

细胞内cAMP测定[6]
使用cAMP酶免疫测定（ELISA）试剂盒，按照制造商的说明，测量睾丸匀浆中细胞内cAMP水平。

camp依赖性蛋白激酶（PKA）和HO-1活性测定[6]
睾丸组织PKA活性测定采用Abcam匀浆PKA激酶活性测定试剂盒。该试剂盒是一种灵敏、安全、无放射性的酶联免疫吸附试验，提供了一种快速可靠的方法来定量PKA的活性，该方法利用一种特定的合成肽作为PKA的底物，并使用一种多克隆抗体来识别底物的磷酸化形式。所有的程序都是按照制造商的说明完成的。 为了测定HO-1的活性，睾丸匀浆样品在血红素（50 mmol/L）、大鼠肝细胞质（5 mg/mL）、MgCl2 （2 mmol/L）、葡萄糖-6-磷酸（2 mmol/L）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（1单位）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH） （0.8 mmol/L）的混合物中，在0.5 mL PBS （pH 7.4）中，37℃孵育60 min。将试管浸入冰中冷却，停止反应。提取胆红素产物，在520 nm处分光光度法测定其浓度，利用消光系数法计算其浓度（Abraham et al., 1988）。

促炎细胞因子及凋亡标志物测定[6]
睾丸组织匀浆中白细胞介素-1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和凋亡标志物Bax和Bcl-2的水平，采用R&D Systems购买的特异性大鼠ELISA试剂盒进行检测。此外，按照标准制造商的说明，用比色试剂盒测量Caspase-3的活性。

总蛋白测定[6]
采用Lowry的方法（Waterborg, 2009）测定睾丸组织匀浆内总蛋白浓度，以牛血浆白蛋白为标准品。

细胞毒性研究[6]
采用磺酰罗丹明B（SRB）法（Skehan等，1990）检测细胞毒性。将癌细胞接种于96孔平底培养板中培养24小时，随后更换为含不同浓度药物的新鲜培养基。分别加入梯度浓度（0、1、5、10、25和50 mg/mL）的待测药物顺铂（CIS）和罗氟司特，于37℃作用48小时。每个剂量设三个复孔，用于计算各药物的半数抑制浓度（IC50，即抑制50%细胞生长所需的药物浓度）。 在另一实验中，将顺铂IC50（3.9 mg/mL）与罗氟司特IC50（2.3 mg/mL）联合作用于细胞，测定细胞存活率%与抑制率%。罗氟司特及其他化合物先用二甲基亚砜（DMSO）溶解，再用培养基稀释至工作浓度。所有处理组中DMSO终浓度不超过0.1%（v/v），该浓度对细胞活性无显著影响。药物处理后，细胞经4℃预冷的10%三氯乙酸固定1小时，蒸馏水洗涤后，用0.4% SRB（溶于1%乙酸）于25℃染色30分钟。最后用10 mM三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH 10.5）溶解染料，于564 nm波长处测定吸光度。根据细胞存活分数与药物浓度的关系曲线计算IC50值。

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实时定量PCR[6]
采用β-肌动蛋白作为内参基因，通过实时定量PCR检测罗氟司特对顺铂诱导的大鼠睾丸组织及PC3癌细胞系中信号转录因子和凋亡标志物基因表达的影响。 体内研究部分：使用TRIzol试剂盒提取睾丸组织总RNA，经RNeasy纯化试剂盒纯化后，于260 nm测定浓度。体外细胞毒性研究部分：按前述方法培养PC3前列腺癌细胞系，24小时后更换为含下列处理的新鲜培养基：顺铂IC50（3.9 mg/mL）、罗氟司特IC50（4.7 mg/mL）或两药联用，37℃处理48小时。处理后收集细胞，用冰PBS洗涤后进行裂解。

罗氟司特给药[4]
对于使用罗氟司特的研究，每日一次，每周5天，通过灌胃给予200 μl浓度为0.5 mg ml−1的罗氟司特或赋形剂（4%甲基纤维素、1.3% PEG400，以及约5 μg药物/mg动物体重）混悬液，持续整个治疗期。罗氟司特混悬液每周新鲜配制，并储存于4 °C。

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饮食诱导肥胖和研究治疗[5]
在为期12周的研究中，实验动物每笼饲养3只，光照周期为12小时，分别喂以正常饮食（ND）（脂肪：5%；蛋白质：20%；碳水化合物：75%）或高脂饮食（HFD）（脂肪：30%；蛋白质：14%；碳水化合物：56%），后者可诱导肥胖，如前所述[17, 18]。研究动物分为三组（每组 N = 30）：（1）正常饮食喂养（ND）的赋形剂处理组（ND + 赋形剂）大鼠（给予赋形剂前先喂食正常饮食 8 周）；（2）高脂饮食喂养（HFD）的赋形剂处理组（HFD + 赋形剂）大鼠（给予赋形剂前先喂食高脂饮食 8 周）；（3）罗氟司特处理组（HFD + 罗氟司特）大鼠（给予罗氟司特前先喂食高脂饮食 8 周）。在高脂饮食或正常饮食喂养的最后 4 周，通过灌胃法给予罗氟司特（5 mg/kg/天）或赋形剂（用作罗氟司特溶剂的无菌水）。所有大鼠在 12 周时称重，并对每组 10 只大鼠进行尿动力学研究。随后，在收集膀胱标本前，将研究动物置于二氧化碳罐中处死。在显微镜下分离膀胱黏膜，并将DSM组织保存在液氮中。

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方法：本研究为期12周，将90只雌性Sprague-Dawley大鼠分为三组：（1）正常饮食（ND）组（载体处理）；（2）高脂饮食（HFD）组（载体处理）；（3）高脂饮食（HFD）组（罗氟司特处理）。试验组在HFD喂养的最后4周给予口服罗氟司特（5 mg/kg/天）。12周时，对每组10只大鼠进行尿动力学检查。提取膀胱组织，在显微镜下分离膀胱粘膜，并采用蛋白质印迹法和定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）分析膀胱逼尿肌平滑肌（DSM）中TNF-α、白细胞介素（IL）-6、IL-1β和核因子κB（NF-κB）的表达[5]。

吸收、分布和排泄
服用500微克罗氟司特后，其生物利用度约为80%。空腹状态下，血浆峰浓度在0.5至2小时内达到；进食状态下，峰浓度降低40%，达峰时间延长1小时，总吸收量不变。局部应用时，成人体内罗氟司特及其N-氧化物代谢物的平均全身暴露量分别为72.7 ± 53.1 h∙ng/mL和628 ± 648 h∙ng/mL。青少年体内罗氟司特及其N-氧化物代谢物的平均系统暴露量分别为25.1 ± 24.0和140 ± 179 h∙ng/mL。
罗氟司特70%以罗氟司特N-氧化物的形式经尿液排泄。
单次口服500 mcg后，罗氟司特的分布容积约为2.9 L/kg。
短期静脉输注罗氟司特后，其血浆清除率约为9.6 L/h。
代谢/代谢物
罗氟司特经CYP3A4和CYP1A2代谢为罗氟司特N-氧化物，后者是罗氟司特在人体内发挥活性的代谢物。罗氟司特N-氧化物代谢物在PDE4抑制方面效力低于其母体药物，但其血浆AUC值约为母体药物的10倍。

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生物半衰期
口服后，罗氟司特及其N-氧化物的血浆半衰期分别为17小时和30小时。

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罗氟司特在二氯吡啶部分经细胞色素P450 (CYP) 3A4和CYP1A2酶快速代谢为N-氧化物（图1A）。如表1所示，罗氟司特N-氧化物在PDE4抑制方面仅比母体化合物低2-3倍，对其他PDE同工酶保持高度选择性，且对PDE4亚型无选择性。在人体内，该代谢物估计约占PDE4总抑制作用的90%，其余10%归因于罗氟司特母体药物。健康受试者每日一次口服500 μg罗氟司特，24小时内血浆中罗氟司特N-氧化物的游离药物浓度估计约为1-2 nM，这是基于罗氟司特N-氧化物约97%的血浆蛋白结合率估算的（图1B）。尽管众所周知吸烟会增加CYP1A2的表达，但研究发现吸烟对罗氟司特的药代动力学特征影响甚微。在罗氟司特相关信息公布之前，一种经过广泛研究的PDE4抑制剂西洛米司特在慢性阻塞性肺病（COPD）和哮喘治疗中取得了令人瞩目的临床疗效。然而，近期未见西洛米司特的进一步研发进展报道。与罗氟司特及其N-氧化物不同，西洛司特对PDE4D亚型具有一定的选择性（表1）。这可能在不良事件方面是一个缺点，因为PDE4D可能与有心力衰竭风险患者的呕吐和/或心血管副作用有关[1]。

肝毒性
在注册前研究中，罗氟司特与血清酶升高或临床上明显的肝损伤事件无关。自罗氟司特获批以来，尚未有已发表的肝毒性报告，且产品说明书中也未将肝损伤列为不良事件。
可能性评分：E（不太可能引起临床上明显的肝损伤）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无罗氟司特用于哺乳期妇女的信息。该药物及其代谢物与血浆蛋白的结合率超过97%，因此乳汁中的含量可能非常低。然而，生产商和一些专家建议哺乳期妇女不应服用此口服药物。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
罗氟司特及其N-氧化物代谢物的血浆蛋白结合率分别约为99%和97%。

[1]. The preclinical pharmacology of roflumilast--a selective, oral phosphodiesterase 4 inhibitor in development for chronic obstructive pulmonary disease. Pulm Pharmacol Ther. 2010 Aug;23(4):235-56.

[2]. Update on roflumilast, a phosphodiesterase 4 inhibitor for the treatment of chronic obstructive pulmonary disease. Br J Pharmacol. 2011 May;163(1):53-67.

[3]. Anti-inflammatory and immunomodulatory potential of the novel PDE4 inhibitor roflumilast in vitro. J Pharmacol Exp Ther. 2001 Apr;297(1):267-79.

[4]. Airway bacteria drive a progressive COPD-like phenotype in mice with polymeric immunoglobulin receptor deficiency. Nat Commun. 2016 Apr 5;7:11240.

[5]. Treatment of obesity-associated overactive bladder by the phosphodiesterase type-4 inhibitor roflumilast. Int Urol Nephrol. 2017 Oct;49(10):1723-1730.

[6]. Roflumilast protects from cisplatin-induced testicular toxicity in male rats and enhances its cytotoxicity in prostate cancer cell line. Role of NF-κB-p65, cAMP/PKA and Nrf2/HO-1, NQO1 signaling. Food Chem Toxicol. 2021 May:151:112133.

药效学
罗氟司特及其活性代谢物罗氟司特N-氧化物通过抑制PDE4，增加受影响细胞中的环磷酸腺苷（cAMP）水平。它们对PDE4具有高度选择性，对PDE1、2、3、5和7几乎没有活性。

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罗氟司特是一种苯甲酰胺，由3-(环丙基甲氧基)-4-(二氟甲氧基)苯甲酸的羧基与3,5-二氯吡啶-4-胺的氨基缩合而成。用于治疗支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病。它是一种磷酸二酯酶IV抑制剂和抗哮喘药物。罗氟司特属于苯甲酰胺类、氯吡啶类、芳香醚类、有机氟化合物类和环丙烷类化合物。
罗氟司特是一种高选择性磷酸二酯酶-4 (PDE4) 抑制剂。PDE4 是一种主要的环磷酸腺苷 (cAMP) 代谢酶，几乎所有免疫细胞和促炎细胞以及平滑肌或上皮等结构细胞上均有表达。罗氟司特通过抑制 PDE4 诱导细胞内 cAMP 水平升高，这被认为是其改善疾病疗效的机制，但其确切的作用机制尚未完全阐明。罗氟司特口服制剂适用于治疗慢性阻塞性肺疾病。罗氟司特于2010年7月首次获得欧洲药品管理局（EMA）批准，并于2018年1月获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准。罗氟司特乳膏适用于治疗斑块状银屑病。该乳膏剂型于2022年7月首次获得FDA批准，并于2023年4月获得加拿大卫生部批准。2023年12月15日，FDA批准了一种新的罗氟司特外用泡沫剂型，用于治疗9岁及以上患者的脂溢性皮炎。
罗氟司特是一种磷酸二酯酶4抑制剂。罗氟司特的作用机制是作为磷酸二酯酶4抑制剂。
罗氟司特是一种选择性磷酸二酯酶-4（PDE-4）抑制剂，具有独特的抗炎活性，用于治疗和预防慢性阻塞性肺疾病（COPD）的急性加重。罗氟司特在治疗期间未见引起显著的血清酶升高，也未见引起临床上明显的急性肝损伤。
罗氟司特是一种口服长效磷酸二酯酶4 (PDE4) 抑制剂，具有抗炎和潜在的抗肿瘤活性。给药后，罗氟司特及其活性代谢物罗氟司特N-氧化物选择性地竞争性结合并抑制PDE4，从而导致细胞内环磷酸腺苷 (cAMP) 水平升高以及cAMP介导的信号通路激活。cAMP可抑制脾酪氨酸激酶 (SYK) 的磷酸化，并阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活，这可能导致细胞凋亡的诱导。 PDE4 是 PDE 超家族成员，可将 cAMP 和 3',5'-环磷酸鸟苷 (cGMP) 水解为无活性的 5'-单磷酸酯。PDE4 在多种癌症中表达上调，可能导致化疗耐药；它在炎症中也发挥关键作用，尤其是在炎症性气道疾病中。
罗氟司特 是一种小分子药物，其临床试验阶段最高为 IV 期（涵盖所有适应症），于 2010 年首次获批，目前有 3 个已获批适应症和 19 个在研适应症。

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经过二十多年的磷酸二酯酶 4 (PDE4) 抑制剂研究，罗氟司特（3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基-N-[3,5-二氯吡啶-4-基]-苯甲酰胺）有望成为该类药物中首个获批用于全球患者治疗的药物。在已知的11种PDE同工酶中，罗氟司特对PDE4具有选择性，对A-D亚型也表现出平衡的选择性，且具有极高的亚纳摩尔级效力。罗氟司特在人体内发挥活性的成分是其代谢产物二氯吡啶N-氧化物，该代谢产物作为PDE4抑制剂的效力与母体化合物相似。由于该代谢产物半衰期长且效力高，因此可以每日口服一次500微克的罗氟司特片剂。罗氟司特的分子作用机制——抑制PDE4并随后提高cAMP水平——已得到充分阐明。为了进一步了解罗氟司特在慢性阻塞性肺疾病（COPD）中的作用机制（罗氟司特目前正在开发用于治疗COPD），我们开展了一系列体外和体内临床前研究。
COPD是一种进行性、破坏性肺部疾病，与对有害颗粒和气体（尤其是烟草烟雾）的异常炎症反应有关。此外，根据全球慢性阻塞性肺疾病倡议（GOLD）的建议，显著的肺外效应（包括合并症）可能会加重患者的病情，而口服药物可以优先解决这些效应。COPD的患病率和死亡率都在不断上升，其治疗仍然是一个亟待解决的重大医疗需求。
在体内，罗氟司特可以减轻COPD相关的关键疾病机制，例如烟草烟雾引起的肺部炎症、黏液纤毛功能障碍、肺纤维化和肺气肿性重塑、氧化应激、肺血管重塑和肺动脉高压。体外实验表明，罗氟司特N-氧化物能够影响多种细胞类型的功能，包括中性粒细胞、单核细胞/巨噬细胞、CD4+和CD8+ T细胞、内皮细胞、上皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞。这些细胞效应被认为是罗氟司特对慢性阻塞性肺疾病（COPD）疾病机制产生有益作用的原因，从而减少急性加重并改善肺功能。COPD是一种多组分疾病，需要采用广泛的治疗方法，而PDE4抑制剂可能有助于实现这一目标。然而，作为一种PDE4抑制剂，罗氟司特并非直接的支气管扩张剂。总之，罗氟司特可能是首个用于COPD治疗的PDE4抑制剂。除了作为一种非甾体类抗炎药，旨在靶向肺部炎症外，本综述中描述的临床前药理学研究表明，罗氟司特具有广泛的功能性作用机制，可能针对慢性阻塞性肺疾病（COPD）的其他机制。这使得罗氟司特能够为COPD提供有效的口服维持治疗，具有可接受的耐受性，并有可能对该疾病的肺外效应产生积极影响。[1]磷酸二酯酶4 (PDE4) 是磷酸二酯酶超家族的成员，可灭活环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷，是参与慢性阻塞性肺疾病（COPD）等炎症性气道疾病的细胞中的主要PDE同工酶。COPD是一种可预防和可治疗的疾病，其特征是气流阻塞，且这种阻塞不能完全逆转。慢性进行性症状，尤其是呼吸困难、慢性支气管炎和整体健康状况受损，在频繁出现急性症状加重的患者中更为严重。尽管多种实验性PDE4抑制剂正处于临床开发阶段，但高选择性PDE4抑制剂罗氟司特是首个获批上市的同类药物，并已在多个国家获批用于治疗重度慢性阻塞性肺疾病（COPD），每日一次口服给药。临床试验表明，罗氟司特可改善COPD患者的肺功能并降低急性加重频率。此外，其独特的作用机制可能有助于靶向治疗COPD的潜在炎症过程。罗氟司特与所有类型的支气管扩张剂联合使用均有效，甚至对接受吸入性糖皮质激素治疗的患者也有效。因此，罗氟司特为COPD合并慢性支气管炎患者（包括那些尽管接受治疗但仍有症状的患者）提供了重要的治疗选择。本文综述了PDE4抑制剂的现状，重点关注罗氟司特的药代动力学、疗效和安全性。文章特别概述了罗氟司特对肺功能和急性加重、葡萄糖稳态和体重减轻的影响，以及与长效β2-肾上腺素能受体激动剂和短效毒蕈碱受体拮抗剂联合用药的情况。[2]慢性阻塞性肺疾病（COPD）中持续性气道炎症的驱动机制尚未完全阐明。由于已有报道称COPD患者小气道中存在分泌型免疫球蛋白A（SIgA）缺乏，我们假设SIgA减少导致的免疫屏障功能障碍会加剧慢性气道炎症并促进疾病进展。本文研究表明，缺乏SIgA的聚合免疫球蛋白受体缺陷（pIgR^-/-）小鼠会随着年龄增长自发出现类似COPD的病理改变。 pIgR(-/-)小鼠进行性气道壁重塑和肺气肿与肺部微生物群改变、细菌侵入气道上皮、NF-κB激活、白细胞浸润以及基质金属蛋白酶-12和中性粒细胞弹性蛋白酶表达增加有关。在无菌条件下重新培育pIgR(-/-)小鼠或使用抗炎磷酸二酯酶-4抑制剂罗氟司特治疗可预防类似慢性阻塞性肺疾病的肺部炎症和重塑。这些发现表明，气道中pIgR/SIgA的缺乏会导致对肺部固有微生物群的先天免疫反应持续激活，从而驱动进行性小气道重塑和肺气肿。 [4]

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目的
证明磷酸二酯酶4型抑制剂可通过调节全身炎症反应治疗肥胖相关性膀胱过度活动症。
方法
本研究为期12周，将90只雌性Sprague-Dawley大鼠分为三组：（1）正常饮食（ND）组（载体对照组）；（2）高脂饮食（HFD）组（载体对照组）；（3）高脂饮食（HFD）组（罗氟司特治疗组）。试验组在高脂饮食喂养的最后4周给予口服罗氟司特（5 mg/kg/天）。12周后，对每组10只大鼠进行尿动力学检查。提取膀胱组织，在显微镜下分离膀胱黏膜，并采用蛋白质印迹法和定量逆转录-聚合酶链式反应（qRT-PCR）分析膀胱逼尿肌平滑肌（DSM）中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-1β和核因子κB（NF-κB）的表达。
结果
高脂饮食喂养的大鼠体重显著增加，且罗氟司特治疗未能缓解这一现象。膀胱测压显示肥胖大鼠排尿频率增加，且出现非排尿性收缩，而罗氟司特可抑制这些变化。这些改变伴随着肥胖大鼠DSM中TNF-α、IL-6、IL-1β和NF-κB表达的显著增加。此外，罗氟司特降低了膀胱深部组织中炎症因子的表达。
结论
在喂食高脂饮食的大鼠中，口服罗氟司特可恢复正常的膀胱功能并下调膀胱中炎症因子的表达。[5]

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顺铂（CIS）引起的睾丸损伤是其作为抗肿瘤药物应用的主要障碍。本研究探讨了PDE4抑制剂罗氟司特（ROF）对顺铂诱导的大鼠睾丸毒性的保护作用及其机制。此外，还评估了顺铂在有无罗氟司特存在下对PC3细胞系的细胞毒性作用。罗氟司特逆转了顺铂引起的精子特征异常，使血清睾酮水平恢复正常，改善了顺铂引起的睾丸和附睾重量变化，并恢复了正常的睾丸结构。此外，ROF可提高细胞内cAMP水平、PKA和HO-1活性以及Nrf2、NQO-1和HO-1基因表达，改善睾丸氧化应激参数（TBARS、NO、GSH水平和CAT活性）和炎症介质（IL-1β和TNF-α以及NF-κβ p65基因表达），并降低促凋亡蛋白caspase-3和Bax的表达，同时增加Bcl-2的表达。最后，体外分析表明，ROF可增强CIS的抗癌功效，增强CIS诱导的Nrf2、HO-1和NQO-1基因表达的增加以及NF-κβ p65基因表达的抑制，并增强其在PC3细胞中的凋亡作用。总之，PDE4抑制并诱导Nrf2/HO-1和NQO-1的表达，是一种潜在的治疗方法，可以保护男性生殖系统免受CIS的有害影响，并增强CIS的抗肿瘤作用。[6]

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本研究结果表明，作为PDE4抑制剂的ROF对CIS诱导的男性生殖毒性具有保护作用。此外，研究还表明，ROF对PDE4的抑制作用能够激活cAMP/Nrf2/HO-1和NQO-1信号通路，该通路在减轻CIS诱导的氧化损伤和炎症反应以及睾丸损伤方面发挥着至关重要的作用。此外，ROF单独使用或与CIS联合使用均可通过增加caspase-3、Bax蛋白和基因表达以及Bax/Bcl-2比值，并降低Bcl-2蛋白和基因表达，诱导前列腺癌PC3细胞凋亡。这种作用可归因于Nrf2/HO-1表达的刺激和NF-κB p65基因表达的下调。因此，本研究提供了一种新的有前景的策略，即通过与ROF联合使用，增强CIS的抗癌作用并进一步减轻其睾丸毒性。未来需要开展进一步的研究，以评估该联合方案在癌症化疗中的潜在临床应用价值。[6]

C17H14CL2F2N2O3

403.2075

402.034

C, 50.64; H, 3.50; Cl, 17.58; F, 9.42; N, 6.95; O, 11.90

162401-32-3

Roflumilast N-oxide;292135-78-5;Roflumilast-d4 N-Oxide;1794760-31-8;Roflumilast Impurity E;1391052-76-8;Roflumilast-d4;1398065-69-4;Roflumilast-d3;1189992-00-4

449193

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

430.6±45.0 °C at 760 mmHg

158°C

214.2±28.7 °C

0.0±1.0 mmHg at 25°C

1.604

4.84

60.45

1

6

7

26

475

0

C1CC1COC2=C(C=CC(=C2)C(=O)NC3=C(C=NC=C3Cl)Cl)OC(F)F

MNDBXUUTURYVHR-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H14Cl2F2N2O3/c18-11-6-22-7-12(19)15(11)23-16(24)10-3-4-13(26-17(20)21)14(5-10)25-8-9-1-2-9/h3-7,9,17H,1-2,8H2,(H,22,23,24)

3-(cyclopropylmethoxy)-N-(3,5-dichloropyridin-4-yl)-4-(difluoromethoxy)benzamide

Daliresp; BY217; BY-217; Roflumilast; 162401-32-3; DAXAS; 3-(CYCLOPROPYLMETHOXY)-N-(3,5-DICHLOROPYRIDIN-4-YL)-4-(DIFLUOROMETHOXY)BENZAMIDE; Daliresp; BYK20869; Benzamide, 3-(cyclopropylmethoxy)-N-(3,5-dichloro-4-pyridinyl)-4-(difluoromethoxy)-; B 9302-107;BYK 20869;B-9302-107;APTA 2217, B9302-107, BY 217, BYK-20869; BYK20869; Daxas;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.20 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol:30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。