Roniciclib   中文名称: 罗纳替尼

Cdk1/cyclin B (IC50 = 7 nM); CDK2/cyclinE (IC50 = 9 nM); CDK4/cyclin D (IC50 = 11 nM); CDK9/cyclinT1 (IC50 = 5 nM); CDK7/Cyclin H/MAT1 (IC50 = 25 nM)
Roniciclib (BAY-1000394; BAY1000394) inhibits the kinase activity of the cell-cycle CDKs CDK1/cyclin B, CDK2/cyclin E, and CDK4/cyclinDwith IC50 values of 7, 9, and 11 nM, respectively. The range of inhibition for the transcriptional CDKs CDK9/cyclin T1 and CDK7/cyclin H/MAT1 is comparable (5 and 25 nM)[1]. With a very balanced profile (mean IC50 on human tumor cells: 16 nM), riciclib potently inhibits the proliferation of several human and murine tumor cell lines[2].
Roniciclib (BAY 1000394) is a potent pan-cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitor. It inhibits the activity of cell-cycle CDKs CDK1/cyclin B (IC50 = 7 nmol/L), CDK2/cyclin E (IC50 = 9 nmol/L), CDK4/cyclin D1 (IC50 = 11 nmol/L), and transcriptional CDKs CDK9/cyclin T1 (IC50 = 5 nmol/L) and CDK7/cyclin H/MAT1 (IC50 = 25 nmol/L). It shows no off-target inhibition of carbonic anhydrase II (CA-II, IC50 > 10,000 nmol/L) [1, 2].

Roniciclib (BAY-1000394; BAY1000394) 抑制细胞周期 CDK CDK1/cyclin B、CDK2/cyclin E 和 CDK4/cyclinD 的激酶活性，IC50 值分别为 7、9 和 11 nM。转录 CDK CDK9/细胞周期蛋白 T1 和 CDK7/细胞周期蛋白 H/MAT1 在相似的范围内（5 和 25 nM）受到抑制[1]。 Roniciclib 可有效抑制各种人类和小鼠肿瘤细胞系的增殖，且具有非常平衡的特性（人类肿瘤细胞的平均 IC50：16 nM）[2]。

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Roniciclib 对广泛的人癌细胞系增殖具有抑制作用，IC50值在6至84 nmol/L之间（在25种人癌细胞系panel中平均IC50为16 nmol/L）。在40种人肺癌细胞系panel中，IC50范围为9至79 nmol/L（平均39 nmol/L）。在24种人乳腺癌和永生化细胞系panel中，IC50范围为6至84 nmol/L（平均37 nmol/L）。未发现IC50 >100 nmol/L的细胞系 [1]。
在HeLa细胞中，Roniciclib诱导浓度依赖性的caspase-3/7活性和DNA片段化增加，表明诱导凋亡细胞死亡。在洗脱实验中，随着暴露时间增加，IC50值从>1000 nmol/L降至14 nmol/L，约需16小时暴露以达到最大效应 [1]。
Roniciclib 在细胞周期中多个CDK依赖性步骤处阻滞细胞。在异步生长的HeLa细胞中，处理使G0-G1期细胞比例从69%降至52%，亚二倍体DNA含量（凋亡细胞）从1%增至16%。在双胸苷阻断释放实验中，该化合物将细胞阻滞在G1-S边界及其他多个CDK依赖性转换点 [1]。
Roniciclib抑制CDK下游靶点的磷酸化：在MCF7细胞中，30 nmol/L浓度完全抑制视网膜母细胞瘤蛋白Ser780磷酸化（表明CDK4/2抑制）；在诺考达唑阻滞的HeLa细胞中，30 nmol/L减少T199磷酸化的核磷蛋白，100 nmol/L完全消除（表明CDK1抑制）；在A549细胞中，100 nmol/L抑制RNA聚合酶II Ser2磷酸化并降低MCL-1蛋白水平（表明CDK9抑制）[1]。

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BAY 1000394 对一组25种人类癌细胞系表现出广泛的抗增殖活性，IC₅₀值在8至33 nM之间（平均16 nM）。在40种人肺癌细胞系（平均IC₅₀ 39 nM）和24种人乳腺癌细胞系（平均IC₅₀ 37 nM）中也观察到相似的效力，表明其对不同遗传背景（如p53、pRB、K-Ras状态）的细胞具有一致的敏感性。[1]
在HeLa细胞中，BAY 1000394 以浓度依赖的方式诱导凋亡性细胞死亡，表现为处理17小时后caspase-3/7活性增加和DNA断裂。[1]
HeLa细胞的细胞周期分析显示，BAY 1000394 (100 nM, 24h) 将细胞阻滞在不同的CDK依赖阶段，减少了G0-G1期细胞群，增加了亚2N（凋亡）细胞群。在从双胸腺苷阻滞中释放的同步化细胞中，该化合物将大部分细胞阻滞在G1-S期边界。[1]
在机制上，BAY 1000394 (30-100 nM) 在多种癌细胞系中抑制了视网膜母细胞瘤蛋白（pRb，CDK2/4底物）的磷酸化，降低了T199磷酸化的核仁磷蛋白（CDK1底物），并抑制了RNA聚合酶II（CDK9底物）的Ser-2磷酸化。[1]

肿瘤生长以剂量依赖性方式受到强烈抑制，较低剂量下的 T/C 值为 0.19，较高剂量下的 T/C 值为 0.02（肿瘤消退）。此外，Roniciclib 强烈抑制 HeLa-MaTu 肿瘤的生长，该肿瘤在治疗开始前（接种后第 8 天）已生长至约 50mm2 大小。用 1.5 和 1 mg/kg 剂量的 Roniciclib 治疗可分别减缓肿瘤生长至 T/C 值 0.15 和 0.62。在顺铂中添加 Roniciclib 可产生强烈的肿瘤生长抑制作用，T/C 值为 0.01（1.0 mg/kg Roniciclib）和 -0.02（1.5 mg/kg Roniciclib）[1]。 Roniciclib 在小鼠、大鼠和狗中的血液清除率较低（分别为 0.51、0.78 和 0.50 Lh-1kg-1）[2]。

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在携带HeLa-MaTu人宫颈肿瘤异种移植物的无胸腺小鼠中，口服Roniciclib每日一次连续21天产生剂量依赖性肿瘤生长抑制，0.5 mg/kg剂量T/C值为0.61，2 mg/kg剂量T/C值为0.03并出现肿瘤消退迹象。治疗耐受性良好，未见体重减轻至初始体重以下 [1]。
在间歇给药方案（给药2天/停药5天，共3个周期）中，Roniciclib 1.5、2.0和2.5 mg/kg每日两次显示剂量依赖性疗效，T/C值分别为0.19、0.02（肿瘤消退），在较大肿瘤（约50 mm²）中也观察到类似结果 [1]。
在三阴性MX-1人乳腺癌模型、顺铂耐药A2780-cis卵巢癌模型和多药耐药OVCAR-8-ADR卵巢癌模型中，Roniciclib比多柔比星、顺铂或紫杉醇更有效 [1]。
在细胞系来源和患者来源的小细胞肺癌异种移植模型（NCI-H82等）中，Roniciclib强烈抑制肿瘤生长，T/C值在0.12至0.19之间，与顺铂相当或更优 [1]。
在NCI-H82 SCLC异种移植模型中，Roniciclib (1.0-1.5 mg/kg) 与顺铂 (6 mg/kg) 或依托泊苷 (12 mg/kg) 联合用药产生超相加疗效（观察到的T/C值低于Bliss计算的相加值）。顺铂、依托泊苷和Roniciclib (0.75 mg/kg) 的三联组合产生T/C值为0.09，显著低于预期的相加T/C值0.40，且与单独顺铂/依托泊苷相比未加重体重减轻 [1]。
HeLa-MaTu肿瘤的药效动力学分析显示，单次口服Roniciclib (2 mg/kg) 抑制pRb磷酸化长达7小时，48小时恢复。游离药物浓度超过体外IC50 (11 nmol/L) 约24小时 [1]。

CDK1和CDK2激酶测定：重组人CDK1/cyclin B或CDK2/cyclin E GST融合蛋白（从杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞纯化）与测试化合物在含有Tris-HCl、MgCl2、二硫苏糖醇、Na3VO4、PEG、ATP、[γ-³³P]ATP和小牛胸腺组蛋白IIIS（作为底物）的测定缓冲液中22°C孵育10分钟。加入EDTA溶液终止反应。将反应混合物转移至P30滤板，用磷酸洗涤，并进行闪烁计数。IC50值确定为导致50%底物磷酸化的抑制剂浓度 [2]。
VEGF-R2激酶测定：从Sf9细胞纯化的GST标签重组人VEGF-R2激酶结构域与测试化合物在含有Tris-HCl、MgCl2、MnCl2、二硫苏糖醇、PEG、ATP、[γ-³³P]ATP和poly(Glu,Tyr)底物的缓冲液中22°C孵育10分钟。反应处理和IC50测定同上 [2]。
碳酸酐酶II抑制使用4-硝基苯乙酸酯水解技术在96孔分光光度计中测定 [2]。

细胞以1,000-5,000细胞/孔接种于96孔板，培养基含10% FCS。24小时后，加入系列稀释的Roniciclib，孵育96小时。通过结晶紫染色定量相对细胞数。使用四参数拟合计算IC50值 [1]。
凋亡测定：使用ApoONE Caspase-3/7 Assay测定caspase-3/7活性，使用Cell Death Detection ELISA Plus测定DNA片段化。结果对溶媒对照和细胞数进行归一化 [1]。
细胞周期分析：HeLa细胞异步生长或从双胸苷阻断释放，用溶媒或Roniciclib (100 nmol/L) 处理，在指定时间点收集，碘化丙啶染色，流式细胞术分析 [1]。
下游靶点分析：MCF7细胞从静止期刺激进入细胞周期并用Roniciclib处理；通过免疫印迹分析pRb磷酸化。诺考达唑阻滞的HeLa细胞用Roniciclib处理，分析磷酸化核磷蛋白。A549细胞用Roniciclib处理，通过免疫印迹分析磷酸化RNA聚合酶II和MCL-1水平 [1]。

Mice: Athymic mice with established HeLa-MaTu xenograft tumors measuring approximately 25 mm² are given oral doses of Roniciclib (BAY 1000394) once a day for 21 days. There is no weight loss below the starting body weight, indicating that the treatment is well tolerated. A cyclic intermittent dosing schedule is used to treat additional mouse groups. Doses of 1.5, 2.0, and 2.5 mg/kg are administered twice daily for two days, after which the mice receive no treatment for five days (2 on/5 off). Three treatment cycles have been finished in total[1].

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For efficacy studies, female athymic nu/nu mice (50 days old, 20-22 g) are subcutaneously implanted with 1.5×10⁶ tumor cells (HeLa-MaTu, MX-1, A2780-cis, OVCAR-8-ADR, NCI-H82, or patient-derived SCLC models) suspended in 50% Matrigel/50% culture medium. When tumors reach approximately 21-25 mm², mice are randomized into treatment and control groups (8 mice/group). Roniciclib is dissolved in vehicle (40% polyethylene glycol, 60% water) and administered orally (p.o.) at indicated doses and schedules (once daily or intermittent 2 days on/5 days off). Tumor area (length × perpendicular) and body weight are measured twice weekly. Statistical analysis uses one-way ANOVA with pairwise comparison versus control [1].
For pharmacodynamic studies, mice bearing HeLa-MaTu tumors receive a single oral dose of Roniciclib (2 mg/kg). Tumors are harvested at 1, 7, 24, and 48 hours post-dose, homogenized, and analyzed for pRb phosphorylation using Meso Scale Discovery Phospho (Ser780)/Total Rb Whole Cell Lysate Kit. Unbound drug concentrations in serum are determined [1].
For combination studies, cisplatin (6 mg/kg i.p. on day 1) and/or etoposide (12 mg/kg i.p. on days 1-3 or 3-5) are administered in 14-day cycles with Roniciclib (p.o. on days 1-3, 3-5, or 8-10) at indicated doses [1].

Roniciclib具有很高的水溶性：通过平衡摇瓶法测得，在pH 7.4的水中，其热力学溶解度为182 mg/L（比ZK 304709高22倍）；在低pH值和有机溶剂中，其溶解度甚至更高。熔点为 134°C [2]。
体外代谢稳定性：在人、小鼠和大鼠肝微粒体中，孵育 60 分钟后母体化合物的回收率分别为 94%、100% 和 100% [1, 2]。
细胞色素 P450 抑制：所有测试的 CYP 同工酶的 IC50 值均 >20 μmol/L [1]。
Caco-2 细胞渗透性：表观渗透系数 (Papp ap-bas) 为 79 nm/s，表明具有良好的肠道渗透性 [1]。
血浆蛋白结合率：在小鼠、大鼠、犬和人血浆中为 93-95% [1]。
体内药代动力学：静脉给药后，各物种的清除率均较低（小鼠：0.51 L·h⁻¹·kg⁻¹；大鼠：0.78 （L·h⁻¹·kg⁻¹；犬：0.50 L·h⁻¹·kg⁻¹）。分布容积较大（1.8-2.5 L/kg）。半衰期范围为2.1小时（大鼠）、3.7小时（小鼠）和4.3小时（犬）。口服给药后，各物种的生物利用度中等（48-56%）[1, 2]。

在疗效研究中，Roniciclib 在治疗剂量（最高达 2.5 mg/kg）下耐受性良好，所有治疗组（每日一次或间歇给药方案）均未观察到明显的体重减轻。在与顺铂和依托泊苷联合用药的研究中，与单独使用顺铂/依托泊苷相比，添加 Roniciclib 不会加重体重减轻 [1]。该化合物对碳酸酐酶 II 没有脱靶抑制作用（IC50 >10,000 nmol/L），从而消除了先前磺胺类药物类似物中观察到的红细胞蓄积问题 [2]。

[1]. BAY 1000394, a novel cyclin-dependent kinase inhibitor, with potent antitumor activity in mono- and in combination treatment upon oral application. Mol Cancer Ther. 2012 Oct;11(10):2265-73.

[2]. The lab oddity prevails: discovery of pan-CDK inhibitor (R)-S-cyclopropyl-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-hydroxy-1-methylpropyl]oxy}-5-(trifluoromethyl)pyrimidin-2-yl]amino}phenyl)sulfoximide (BAY 1000394) for the treatment of cancer. ChemMedChem. 2013 Jul;8(7):1067-85.

罗尼西利（Roniciclib）已被研究用于治疗小细胞肺癌。
罗尼西利是一种口服生物利用度高的细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。罗尼西利选择性地结合并抑制CDK1/细胞周期蛋白B、CDK2/细胞周期蛋白E、CDK4/细胞周期蛋白D1和CDK9/细胞周期蛋白T1的活性，这些丝氨酸/苏氨酸激酶在细胞周期进程和细胞增殖的调控中发挥关键作用。抑制这些激酶会导致细胞周期停滞于G1/S期，从而诱导细胞凋亡并抑制肿瘤细胞增殖。 CDK在癌细胞中常常失调。
另见：Roniciclib（注释已移至）。

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人肿瘤异种移植疗效研究：将已建立皮下HeLa-MaTu宫颈癌异种移植瘤（肿瘤大小约21-25 mm²）的雌性无胸腺裸鼠随机分为几组（n=8）。BAY 1000394以0.5、1.0、1.5和2.0 mg/kg的剂量，每日一次口服给药，连续21天。该化合物配制于40%聚乙二醇和60%水的溶剂中。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤生长情况。 [1]
间歇给药研究：在同一模型中，BAY 1000394以1.5、2.0和2.5 mg/kg的剂量，每日两次口服给药，连续给药2天，停药5天（2天给药/5天停药方案），共进行3个周期。[1]
药代动力学/药效学（PK/PD）研究：荷瘤小鼠（HeLa-MaTu）单次口服2 mg/kg的BAY 1000394（制剂如上所述）。分别于给药后1、7、24和48小时采集肿瘤和血浆样本，用于分析肿瘤组织中游离药物浓度和视网膜母细胞瘤蛋白（P-pRb）的磷酸化水平。 [1]Roniciclib (BAY 1000394) 是一种新型口服泛 CDK 抑制剂，旨在克服早期临床候选药物 ZK 304709 的局限性。ZK 304709 由于剂量限制性吸收和患者间差异大（归因于溶解度低和脱靶碳酸酐酶抑制），在 I 期临床试验中失败。Roniciclib 中引入亚砜亚胺基团，在保持强效 CDK 抑制活性的同时，消除了碳酸酐酶抑制活性并提高了溶解度。该化合物可抑制细胞周期 CDK（1、2、4）和转录 CDK（7、9），导致细胞周期在多个检查点停滞并诱导细胞凋亡。它在多种异种移植模型中显示出广泛的抗肿瘤活性，包括化疗耐药模型和患者来源的模型，并且在小细胞肺癌 (SCLC) 模型中与顺铂和依托泊苷联合用药时，显示出大于叠加效应的疗效。 Roniciclib在每日一次持续给药和间歇给药方案下均有效，为临床优化提供了灵活性。目前，它正处于治疗晚期实体瘤的I期临床试验阶段（ClinicalTrials.gov 注册号：NCT01188252）[1, 2]。

C18H21F3N4O3S

430.44500

430.129

C, 50.23; H, 4.92; F, 13.24; N, 13.02; O, 11.15; S, 7.45

1223498-69-8

1223498-69-8

45380979

White to off-white solid powder

4.993

116.57

3

10

7

29

661

2

C[C@@H](O)[C@H](OC1=NC(NC2=CC=C([S@@](=N)(C3CC3)=O)C=C2)=NC=C1C(F)(F)F)C

UELYDGOOJPRWGF-MFOHZAOFSA-N

InChI=1S/C18H21F3N4O3S/c1-10(26)11(2)28-16-15(18(19,20)21)9-23-17(25-16)24-12-3-5-13(6-4-12)29(22,27)14-7-8-14/h3-6,9-11,14,22,26H,7-8H2,1-2H3,(H,23,24,25)/t10-,11-,29?/m1/s1

(2R,3R)-3-[2-[4-(cyclopropylsulfonimidoyl)anilino]-5-(trifluoromethyl)pyrimidin-4-yl]oxybutan-2-ol

Roniciclib; BAY1000394; roniciclib; 1223498-69-8; 0W9Q8U337A; BAY10-00394; BAY-1000,394; BAY-1000394; BAY 1000394

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ≥ 250 mg/mL (~580.8 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。