PKMYT1 (IC50 = 14 nM)
Lunresertib targets PKMYT1, a kinase that phosphorylates CDK1 at Thr14 and negatively regulates CDK1 activity, thereby controlling cell cycle progression and DNA damage response. PKMYT1 inhibition decreases CDK1 phosphorylation, leading to cell cycle arrest, apoptosis, and decreased tumor growth. The compound displays selectivity for PKMYT1 and is part of a synthetic lethal strategy targeting cancer cells with specific genetic vulnerabilities, such as CCNE1 amplification.

在HCC1569乳腺癌细胞系中，RP-6306（500 nM；持续24小时）处理产生了泛γH2AX，表明肿瘤来源的CCNE1也使细胞在PKMYT1转录后易受DNA损伤诱导[2]。在CCNE1过表达的细胞中，CDK1被突然且选择性地激活，从而促进启动DNA合成的细胞早期进入有丝分裂[2]。

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- PKMYT1抑制：RP-6306能有效抑制PKMYT1激酶活性，激酶活性测定结果显示IC₅₀为2.4 nM。该化合物对EPHA1-2、EPH B2-4和WEE1的选择性超过35倍[1]
- 抗增殖活性：在CCNE1扩增的癌细胞系（例如OVCAR3、HCC1569）中，RP-6306表现出剂量依赖性的生长抑制作用，其GI₅₀值在低纳摩尔范围内。相比之下，非CCNE1扩增的细胞的敏感性显著降低[2]
- DNA损伤诱导：用RP-6306（500 nM）处理HCC1569细胞可诱导泛γH2AX的形成，表明DNA损伤反应被激活。这种效应选择性地在CCNE1过表达细胞中观察到[2]
- CDK1激活：RP-6306破坏了PKMYT1介导的CDK1抑制，导致CDK1过早激活和S期有丝分裂进入，最终导致有丝分裂灾难[2]
- 克隆形成实验：长期使用RP-6306（10 nM）处理CCNE1扩增的卵巢癌细胞可完全抑制克隆形成，而非扩增细胞则显示出残余的克隆生长[2]
体外实验表明，Lunresertib在细胞实验中对PKMYT1的IC50为14 nM，在nanoBRET实验中为2 nM。它能抑制多种临床前异种移植模型中CCNE1扩增的肿瘤细胞的生长。该化合物可抑制肿瘤组织中 CDK1 Thr14 的磷酸化。在多种癌细胞系中，Lunresertib 与 Wee1 抑制剂 MK-1775 联合使用时，显示出协同杀伤细胞的作用。

在CCNE1（OVCAR3）的产前异种移植模型中，RP-6306（15、50和300 ppm；口服；每日一次；持续21天）可显著抑制OVCAR3肿瘤的生长，且呈剂量依赖性[1]。

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- 肿瘤生长抑制：在OVCAR3异种移植模型中，口服RP-6306（3-60 mg/kg/天）可显著抑制肿瘤生长，且呈剂量依赖性。与载体对照组相比，60 mg/kg 剂量下肿瘤体积减少了 75% [1]
- CDK1 磷酸化：在肿瘤组织中，RP-6306 治疗抑制了 PKMYT1 介导的 CDK1 在 Thr14 位点的磷酸化，导致 CDK1 活性增加和 DNA 损伤标志物 (γ-H2AX) 的诱导 [1]
- 联合治疗：在 CCNE1 扩增的 PDX 模型中，RP-6306 (50 mg/kg) 与顺铂 (3 mg/kg) 联合使用可使肿瘤生长抑制率达到 82%，而单药治疗的抑制率为 55%。这种协同作用归因于DNA损伤增强和有丝分裂缺陷[2]
- 生存获益：在CCNE1扩增的子宫内膜癌模型中，接受RP-6306（60 mg/kg）治疗的小鼠的中位生存期比对照组延长了30%[2]
在体内，Lunresertib在多个临床前异种移植模型中抑制CCNE1扩增的肿瘤细胞生长。该化合物具有良好的口服生物利用度，并在肿瘤组织中显示出良好的暴露量。它在体内抑制CDK1 Thr14磷酸化，表明其靶向性强。Wee1和MYT1抑制的联合应用已被提出作为一种潜在的癌症治疗策略。Lunresertib目前正在进行临床开发。

PKMYT1 酶活性测定 (ADP GLO)[1]
为了确定 PKMYT1 抑制剂化合物的 IC50，使用了 ADP-GLO 测定。首先，将人重组PKMYT1酶用酶测定缓冲液（70 mM HEPES、3 mM MgCl₂、3 mM MnCl₂、50 μg/mL PEG20000、3 μM原钒酸钠（新鲜添加）、1.2 mM二硫苏糖醇（新鲜添加））稀释至5 μL，并加入白色384孔板中。然后，将5 μL抑制剂或DMSO对照用酶测定缓冲液稀释后加入孔板中。将酶/化合物混合物在室温下孵育15分钟。最后，加入5 μL ATP（用酶测定缓冲液稀释）启动酶促反应，使最终ATP浓度为10 μM，PKMYT1酶浓度为18.5 nM。随后，将酶促反应在30℃下孵育。在培养箱中孵育 1 小时。孵育结束后，加入 15 μL ADP-GLO 试剂，并在室温下孵育 40 分钟。最后，加入 30 μL 激酶检测试剂，并在室温下孵育 30 分钟，之后使用 Envision 酶标仪测量发光值。然后确定每种化合物在检测中的 IC50 值。本文中报告的 IC50 值是至少 n=3 个重复实验的几何平均值。[1]

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PKMYT1/激酶 NanoBRET 检测[1]
为了确定化合物在 NanoBRET 靶标结合检测中的亲和力，使用 Fugene HD 转染试剂在 Opti-MEM 无酚红缓冲液中，将 HEK293 T 细胞转染 NanoLuc 融合载体 DNA（PKMYT1 NanoLuc 融合载体或其他目标激酶和转染载体 DNA）。过夜孵育后，将转染的HEK293 T细胞置于37℃/5% CO2培养箱中培养，然后用胰蛋白酶消化、计数，并重悬于不含酚红的Opti-MEM缓冲液中，细胞浓度为200000个/mL。将85 μL细胞悬液（17000个细胞/孔）接种于白色96孔板中，并加入5 μL用示踪剂稀释缓冲液稀释的20倍浓度示踪剂溶液。最后，加入10 μL用不含酚红的Opti-MEM缓冲液稀释的10倍浓度化合物溶液，并将孔板置于37℃/5% CO2培养箱中孵育2小时。孵育结束后，向细胞中加入50 μL 3倍浓度的底物/抑制剂混合溶液。然后将孔板转移至Perkin Elmer EnVision多功能酶标仪，检测受体发射波长（610 nm）和供体发射波长。测量 (450 nm)。本文中报告的 IC50 值是至少 n=3 个重复实验的几何平均值。

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- PKMYT1 激酶活性测定：将重组人 PKMYT1 与 ATP 和荧光标记的肽底物在 RP-6306 (0.1–1000 nM) 存在下孵育。使用 HTRF 技术定量磷酸化，并通过剂量反应曲线拟合确定 IC₅₀ [1]
- 选择性分析：RP-6306 针对 450 种激酶进行了测试，包括 WEE1 和 CDK 家族成员。该化合物对 PKMYT1 的选择性比非靶标激酶高 35 倍以上 [1]
对于体外激酶测定，将重组 PKMYT1 蛋白与肽底物（例如在激酶活性测定缓冲液中加入 CDK1 衍生肽和 ATP。测试化合物的浓度范围为 0.1-1000 nM。激酶活性可通过放射性 ATP 掺入法或发光 ADP 检测法进行测定。NanoBRET 检测可用于测定活细胞中靶标的结合情况。IC50 值通过拟合剂量反应曲线计算得出。

PKMYT1 细胞活性测定（CDK1 pThr14 AlphaLISA）[1]
为测定化合物 IC50，将 FUOV1 细胞以 50000 个细胞/孔的密度接种于 96 孔 TC 处理的培养板中，每孔加入 100 μL 培养基。将培养板置于生物安全柜中平衡 30 分钟，然后在 37 °C、5% CO2 的加湿培养箱中过夜培养。第二天，使用 Biomek FX 液体处理工作站，将 2 μL PKMYT1 抑制剂或 DMSO 溶于 400 μL 预热的培养基中，并加入 96 孔板。将化合物与培养基混合后，取 25 μL 加入 96 孔板的每个孔中。将培养板以 300 g 离心 10 秒，然后在培养箱中培养 2 小时。与化合物孵育2小时后，使用多通道移液器吸取培养基。向每个孔中加入30 μL添加了蛋白酶和磷酸酶抑制剂以及1 mM PMSF的1X AlphaLISA裂解缓冲液（Perkin Elmer）。将培养板以500 g旋转20分钟以促进细胞裂解。然后用铝箔密封培养板，并在−80 °C下冷冻至少1小时。将裂解液在37 °C下解冻10分钟，然后将每份裂解液取10 μL，一式两份转移至白色384孔检测板中。将抗体混合物配制于含有抗体的 1X AlphaLISA 检测缓冲液中（兔 pThr14-CDK1 和鼠总 CDK1 的终浓度均为 5 nM）。向检测板的每个孔中加入 5 μL 抗体混合物。密封检测板，并在 4 °C 下过夜保存。第二天，将 AlphaLISA 磁珠混合物配制于 1X AlphaLISA 检测缓冲液中。将抗兔 IgG 受体磁珠和抗鼠 IgG 供体磁珠配制至 80 μg/ml 的浓度。向检测板的每个孔中加入 5 μL 磁珠混合物（每种磁珠的终浓度为 20 μg/ml）。避光孵育，室温孵育 2 小时。孵育 2 小时后，使用 Perkin Elmer EnVision 多功能酶标仪读取吸光度值，激发波长为 680 nm，发射波长为 615 nm。[1]

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细胞增殖实验[2]
将 RPE1-hTERT Cas9 TP53−/−、FT282-hTERT TP53R175H 及其各自的 CCNE1 高表达同源对接种于 96 孔板（Corning Costar 货号 5595）中，RPE1-hTERT Cas9 TP53−/− CCNE1 (C2) 组每孔接种 150 个细胞，其他组每孔接种 100 个细胞。24 小时后，使用 D300e 自动数字分液器，以 0.15 nM 至 3 µM 的药物浓度处理细胞。每 3-4 天更换一次培养基和药物，并使用 IncuCyte S3 活细胞成像仪监测细胞汇合度，直至 6 个群体倍增。以未处理的对照组为基准，计算细胞汇合度百分比，以评估测试化合物诱导的生长抑制作用。RP-6306 与羟基脲或使用在线 SynergyFinder v2.0 工具，采用 ZIP 模型（https://synergyfinder.fimm.fi）分析吉西他滨。

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- 增殖实验：将 CCNE1 扩增的细胞（5×10³/孔）用 RP-6306（1–1000 nM）处理 72 小时。采用 MTT 法检测细胞活力，并使用非线性回归计算 GI₅₀ 值。CCNE1 扩增细胞的 GI₅₀ 值为 5–20 nM，而非扩增细胞的 GI₅₀ > 100 nM [2]
- γH2AX 检测：将细胞用 RP-6306（500 nM）处理 24 小时后，进行固定、透化处理，并用抗 γH2AX 抗体染色。免疫荧光法显微镜观察显示，与对照组相比，CCNE1扩增细胞中γH2AX灶增加[2]
克隆形成实验：将细胞以低密度（500个细胞/孔）接种，并用RP-6306（10 nM）处理14天。用结晶紫染色并计数克隆。与未处理的对照组相比，CCNE1扩增细胞的克隆形成减少了90%[2]
对于细胞增殖实验，将具有CCNE1扩增或其他基因改变的癌细胞系接种于96孔板中，并用浓度范围为0.01-10 µM的Lunresertib处理72-96小时。使用CellTiter-Glo或MTT法评估细胞活力。IC50值根据剂量反应曲线计算。通过Western blotting检测CDK1 Thr14磷酸化以确认靶点结合。联合用药研究使用 Wee1 抑制剂可以评估协同作用。

动物/疾病模型： OVCAR3 小鼠 [1]
剂量： 15、50 和 300 ppm（相当于约 3、10 和 60 mg/kg/天）
给药途径： 口服；每日一次；持续 21 天
实验结果： 诱导 OVCAR3 肿瘤。肿瘤生长呈统计学显著且剂量依赖性地减少。

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将 OVCAR3 细胞以 5×10⁶ 个/只的密度接种到雌性 SCID-beige 小鼠（5-7 周龄；Charles River）的右侧腹部，接种物为 1:1 的基质胶：培养基。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 的目标大小时，将小鼠（n=8）随机分组，并开始接受 RP-6306 治疗。涉及细胞来源异种移植的体内研究在Repare Therapeutics公司进行，该研究在加拿大动物护理委员会（CCAC）认证的动物房内进行，并遵循机构动物护理委员会批准的实验方案。RP-6306以15-300 ppm的浓度溶于饲料中，或溶于0.5%甲基纤维素中，每日两次（BID，0-8小时）口服给药，最多持续21天。在给予含药饲料前，饲料组小鼠先适应3-5天的空白饲料。肿瘤体积使用数字游标卡尺测量，并使用公式0.52×L×W²计算。 TGI 定义为：% TGI = ((TVvehicle/last – TVvehicle/day0) - (TVtreated/last – TVtreated/day0)) / (TVvehicle/last – TVvehicle/day0) x 100，基于治疗组在第 0 天和最后一次测量时的平均值计算得出。体重变化 (BW) 的计算公式为：% BW 变化 = (BWlast-BWday0/ BWday0) x 100。体重变化是根据个体相对于第 0 天的体重变化计算的。与载体对照组或其他测试组相比的统计学显著性通过单因素方差分析 (ANOVA) 确定，多组比较采用 Fisher's LSD 检验，两组比较采用非配对 t 检验（GraphPad Prism v9.0）。[1]

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将 HCC1569、OVCAR3 和 SUM149PT 细胞以每只小鼠 5 × 10⁶ 个细胞的密度分别植入雌性 CB17-SCID、SCID-beige 和 NOD-SCID 小鼠（5-7 周龄；Charles River）的右侧腹部，细胞以 1:1 的 Matrigel:培养基混合液进行接种。当肿瘤体积达到目标值 100–150 mm³ 时，使用 Studylogv4.4 软件中的“分层”方法，根据肿瘤体积和体重将小鼠（n = 8）随机分配到治疗组，并开始使用 RP-6306 进行治疗。[2]
收集新鲜的原发性人肿瘤组织，并将其切成小块（直径约 2–3 mm）。将这些肿瘤碎片皮下接种到 5–7 周龄雌性 BALB/c 裸鼠的右侧腹部，以诱导肿瘤生长，随后通过移植传代至疗效研究的小鼠队列中。当平均肿瘤体积达到约 150 (100–200) mm³ 时，使用 Studylogv4.4 软件中的分层方法，根据肿瘤生长速度将小鼠随机分配到治疗组（n = 6）。 PDX模型中涉及动物饲养和使用的程序在实施前已由CrownBio的机构动物护理和使用委员会（IACUC）审查并批准。研究期间，动物的饲养和使用均符合实验动物评估和认证协会（AAALAC）的规定。[2]
RP-6306配制于0.5%甲基纤维素溶液中，每日两次（BID，0-8小时）口服给药，最多持续21天。吉西他滨每周一次腹腔注射，溶于生理盐水中。每周三次监测动物的肿瘤体积、临床症状和体重。肿瘤体积使用数字游标卡尺测量，并使用公式0.52 × L × W²计算，其中L为长度，W为宽度。治疗反应通过肿瘤生长抑制率（% TGI）进行评估。肿瘤生长抑制率 (TGI) 定义为：TGI = ((TVvehicle/last − TVvehicle/day0) − (TVtreated/last − TVtreated/day0))/(TVvehicle/last − TVvehicle/day0) × 100%，基于第 0 天和最后一次测量时各治疗组的平均值计算得出。TV 为肿瘤体积，下标表示治疗组和采样时间。根据 NIACC 和 IACUC 批准的动物实验方案，当小鼠肿瘤体积超过 2,000 mm³ 时，立即对其进行安乐死。体重变化 (BW) 的计算公式为：%BW 变化 = (BWlast − BWday0/BWday0) × 100。体重变化基于个体相对于第 0 天的体重变化计算得出。采用单因素方差分析 (ANOVA) 确定与载体对照组或其他试验组的统计学显著性，多组比较采用 Fisher 最小显著性差异检验，两组比较采用非配对 t 检验（GraphPad Prism v9.0）。数据收集和分析过程中，研究人员未采用盲法。[2]

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- 异种移植模型：将携带 OVCAR3 肿瘤（100 mm³）的雌性 NSG 小鼠随机分组，分别每日灌胃给予 RP-6306（3、10 或 60 mg/kg）或载体（0.5% 甲基纤维素），持续 21 天。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积[1]
- 制剂：RP-6306悬浮于0.5%甲基纤维素溶液中，以10 mL/kg的剂量给药[1]
- 联合治疗：在PDX4013模型中，小鼠每周接受RP-6306（50 mg/kg）+顺铂（3 mg/kg，腹腔注射）治疗，持续3周。监测肿瘤生长情况，并采集组织进行免疫组织化学分析[2]
在体内疗效研究中，将CCNE1扩增的肿瘤异种移植瘤植入免疫缺陷小鼠体内。当肿瘤体积达到约100-200 mm³时，将小鼠随机分组，并根据药代动力学研究确定的剂量，通过灌胃给予Lunresertib治疗。每周两次测量肿瘤体积。在研究终点，收集肿瘤组织进行 CDK1 Thr14 磷酸化蛋白的蛋白质印迹分析，以确认靶点抑制情况。可进行与 Wee1 抑制剂的联合研究，以评估其协同抗肿瘤作用。

口服生物利用度：RP-6306 在临床前动物模型中显示出较高的口服生物利用度（>70%），血浆峰浓度 (Cmax) 在 1-2 小时内达到 [1]
- 半衰期：小鼠体内的终末半衰期为 4.5 小时，可每日给药一次 [1]
- 组织分布：该化合物具有广泛的组织分布，在异种移植模型中肿瘤/血浆浓度比 >2 [1]
Lunresertib 具有口服生物利用度。该化合物可溶于 0.1N HCl(aq)、DMSO 和乙醇。建议在 -20°C 下储存以保持长期稳定性。更详细的药代动力学参数，包括半衰期、Cmax、AUC 和组织分布，可从原始文献和临床数据中获得。该化合物的分子量为 324.38，表明其具有良好的成药特性。

安全性：RP-6306（每日剂量高达 100 mg/kg）在啮齿动物研究中未显示出显著毒性。主要器官（肝脏、肾脏、心脏）的血液学、血清学和组织病理学结果均在正常范围内。[1] - 选择性毒性：在正常组织中未观察到不良反应，这与靶向 CCNE1 扩增的肿瘤的合成致死机制相符。[2]
Lunresertib 的毒理学数据可从临床前和临床研究报告中获得。作为一种临床阶段化合物，它已进行了广泛的安全性评估。细胞周期抑制剂常见的副作用可能包括骨髓抑制、胃肠道紊乱和疲劳。具体的毒性数据属于专有信息，可在监管申报和临床试验披露文件中获取。

[1]. Discovery of an Orally Bioavailable and Selective PKMYT1 Inhibitor, RP-6306. J Med Chem. 2022 Aug 11;65(15):10251-10284.

[2]. CCNE1 amplification is synthetic lethal with PKMYT1 kinase inhibition. Nature. 2022 Apr;604(7907):749-756.

Lunresertib 是一种口服生物利用度高的抑制剂，可抑制人膜相关酪氨酸和苏氨酸特异性 CDC2 抑制性激酶 (PKMYT1)，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，Lunresertib 可靶向并结合 PKMYT1，抑制其活性。这导致 CDK1 磷酸化受到抑制，可能促进过早有丝分裂和持续有丝分裂阻滞，最终导致易感肿瘤细胞（例如，CCNE1 过表达的肿瘤细胞）中未修复的 DNA 损伤积累和细胞凋亡。PKMYT1 与细胞周期蛋白形成复合物时，特异性地磷酸化 CDK1，从而阻断细胞从 G2 期进入有丝分裂期。作用机制：RP-6306 抑制 PKMYT1，阻止 CDK1 在 Thr14/Tyr15 位点的磷酸化。这会导致 CDK1 过早激活，在 DNA 合成期间进入有丝分裂，最终导致有丝分裂灾难 [2]
- 合成致死性：CCNE1 扩增驱动 CDK2 过度激活，从而加剧复制压力和 DNA 损伤，使细胞对 PKMYT1 抑制剂更敏感 [2]
- 临床潜力：RP-6306 目前正在进行针对卵巢癌、子宫内膜癌和膀胱癌中 CCNE1 扩增的 I/II 期临床试验，初步数据显示，在既往接受过广泛治疗的患者中观察到了客观缓解 [1,2]
Lunresertib (RP-6306) 是一种首创的、强效的、选择性的、口服生物利用度高的 PKMYT1 抑制剂，其 IC50 值分别为 14 nM（细胞）和 2 nM（nanoBRET）。它能抑制异种移植模型中 CCNE1 扩增的肿瘤细胞的生长。该化合物正在研发用于治疗CCNE1扩增及其他基因改变的癌症。Lunresertib是一种研究性药物，尚未获准用于临床。

C18H20N4O2

324.3770

324.158625

C, 66.65; H, 6.21; N, 17.27; O, 9.86

2719793-90-3

(Rac)-RP-6306;2719749-28-5;(R)-RP-6306;2719793-91-4

156869388

Off-white to gray solid powder

3.1

107Ų

3

4

2

24

488

0

O([H])C1C([H])=C([H])C(C([H])([H])[H])=C(C=1C([H])([H])[H])N1C(=C(C(N([H])[H])=O)C2C([H])=C(C([H])([H])[H])C(C([H])([H])[H])=NC1=2)N([H])[H]

ARBRHWRTXPWZGN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H20N4O2/c1-8-5-6-13(23)10(3)15(8)22-16(19)14(17(20)24)12-7-9(2)11(4)21-18(12)22/h5-7,23H,19H2,1-4H3,(H2,20,24)

2-amino-1-(3-hydroxy-2,6-dimethylphenyl)-5,6-dimethylpyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carboxamide

(Rac)-RP-6306; lunresertib; 2719793-90-3; (R)-RP-6306; 2719749-28-5; CHEMBL5199076; N95U3A7N57;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~154.14 mM)

配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (15.41 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。