RSL3

别名: (1S,3R)-RSL3; 1S,3R-RSL3; RSL3 (1S,3R-); CHEMBL4747331; (1S,3R)-Methyl 2-(2-chloroacetyl)-1-(4-(methoxycarbonyl)phenyl)-2,3,4,9-tetrahydro-1H-pyrido[3,4-b]indole-3-carboxylate; RSL3 1S,3R-; (1S,3R)-2-(2-氯乙酰基)-2,3,4,9-四氢-1-[4-(甲氧羰基)苯基]-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-3-羧酸甲酯;RSL3

目录号: V14062 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

RSL3是一种新型有效的谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）抑制剂，能够降低GPX4蛋白的表达，诱导头颈癌细胞铁死亡。

RSL3 CAS号: 1219810-16-8
产品类别: Peroxidases

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

规格	价格	库存	数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
2mg
5mg
10mg
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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

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产品描述

RSL3是一种新型有效的谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）抑制剂，能够降低GPX4蛋白的表达，并诱导头颈癌细胞铁死亡。 RSL3 增加 HN3-rslR 细胞中 p62 和 Nrf2 的表达并使 Keap1 失活。

生物活性&实验参考方法

靶点	GPX4/glutathione peroxidase 4
体外研究 (In Vitro)	RSL3（0-8 μM，72 小时）在 HN3-rslR 细胞中的 IC50 为 5.8 μM，在 HN3 细胞中为 0.48 μM，显着降低 HN3 细胞的活力 [1]。在 HN3-rslR 细胞中，RSL3（0-8 μM，24 小时）可使 Keap1 失活，提高 p62 和 Nrf2 的表达，并降低 GPX4 蛋白的表达 [1]。 RSL3或ML-162在不同程度上诱导了HNC细胞的铁凋亡。[1] RSL3处理的HNC细胞对铁下垂的抗性与p62和Nrf2的表达有关。[1] 体外抑制Nrf2致敏的化疗耐药HNC细胞对RSL3治疗的反应[1]。
体内研究 (In Vivo)	葫芦巴碱与RSL3联合使用（100 mg/kg，瘤内注射，每周两次，持续20天）可显着抑制HN3R因子细胞肿瘤生长[1]。在小鼠异种移植物模型中，所有小鼠在细胞植入和用载体、RSL3、胡芦巴碱或RSL3加胡芦巴林治疗期间和之后都存活良好。他们在治疗后20天被安乐死。与载体对照组相比，RSL3或胡芦巴碱单独使用并没有显著抑制体内肿瘤生长（P>0.1）（图6A和B）。然而，RSL3联合胡芦巴碱显著抑制了肿瘤生长（P<0.01）。对照组或治疗组的体重和每日食物摄入量没有显著变化（P<0.05）（图6C）。RSL3联合胡芦巴碱组体内肿瘤中测得的亚铁、脂质ROS和RPA水平明显高于对照组或其他治疗组（P<0.01）。对重要器官的组织学检查未发现两组之间有任何显著差异[1]。
酶活实验	ROS产生测量[1] 通过在37°C下加入10µM 2′，7′-二氯荧光素二乙酸酯（用于细胞质ROS）或2µM C11-BODIPY C11（用于脂质过氧化）30分钟，测量处理24小时的HNC细胞裂解物上清液中细胞ROS的产生。使用配备CellQuest Pro的FACSCalibur流式细胞仪分析ROS水平。不稳定铁池（LIP）和铁测定[1] 每个样品都接种在平板上，用指定的药物处理。4小时后，去除上清液，用Hank's平衡盐溶液（HBSS）洗涤板两次。通过在HBSS中加入8μg/ML钙黄绿素AM标记细胞，并在37°C的平板上孵育30分钟。30分钟后，去除标记溶液，用PBS洗涤细胞两次，然后用胰蛋白酶-EDTA进行胰蛋白酶消化。然后通过在HBSS中加入4%FBS中和它们，并在1500rpm下离心3分钟。收集的细胞在涡旋的同时用HBSS洗涤一次，并在1500rpm下离心3分钟。然后，在涡旋的同时将它们重新悬浮在250μL HBSS中，并进入FACS。使用配备CellQuest Pro的FACSCalibur流式细胞仪分析不稳定铁水平，并使用铁测定试剂盒测量细胞或组织提取物中的亚铁水平。 Nrf2转录活性测定[1] 根据制造商的说明，使用Cignal抗氧化剂反应报告试剂盒测定Nrf2的转录活性。
细胞实验	细胞活力测定[1] 细胞类型： HN3 细胞、HN3-rslR 细胞测试浓度： 0-8 μM 孵育持续时间：72小时实验结果：HN3和HN3-rslR细胞中的IC50值分别为0.48 µM和5.8 µM[1]。蛋白质印迹分析 [1] 细胞类型： HN3-rslR 细胞测试浓度： 0-8 μM 孵育持续时间：24 小时实验结果：抑制 GPX4 表达，增加 p62 和 Nrf2 水平，并降低 Keap1 水平。
动物实验	动物/疾病模型：携带 HN3R 细胞的 10 周龄无胸腺 BALB/c 雄性裸鼠 (nu/nu) [1] 剂量： 100 mg/kg 联合葫芦巴碱 (50 mg/kg)：瘤内注射，实验结果：每周两次、连续 20 天用葫芦巴碱治疗的小鼠肿瘤体积显著缩小。肿瘤异种移植[1] 使用 10 周龄无胸腺 BALB/c 雄性裸鼠 (nu/nu)，并将 HN3R 细胞皮下注射到每只小鼠的侧腹部。一旦检测到肿瘤植入物形成肉眼可见的结节，小鼠将接受以下四种治疗之一：载体；RSL3（100 mg/kg，每周两次瘤内注射）；葫芦巴碱（50 mg/kg，每日口服）；或RSL3联合葫芦巴碱。每组包含10只小鼠。每周测量两次肿瘤大小和体重，肿瘤体积计算公式为（长×宽²）/2。划痕后，分离肿瘤，并测定细胞内脂质活性氧（ROS）和亚铁离子水平。
参考文献	[1]. Nrf2 inhibition reverses resistance to GPX4 inhibitor-induced ferroptosis in head and neck cancer. Free Radic Biol Med. 2018 Dec;129:454-462. [2]. Mitochondrial fission links ECM mechanotransduction to metabolic redox homeostasis and metastatic chemotherapy resistance. Nat Cell Biol. 2022 Feb;24(2):168-180. [3]. CGI1746 targets σ1R to modulate ferroptosis through mitochondria-associated membranes. Nat Chem Biol. 2024 Jan 11. [4]. Mitochondrial transplantation rescues neuronal cells from ferroptosis. Free Radic Biol Med. 2023 Nov 1;208:62-72. [5]. Ibrutinib facilitates the sensitivity of colorectal cancer cells to ferroptosis through BTK/NRF2 pathway. Cell Death Dis. 2023 Feb 23;14(2):151. [6]. A potent GPX4 degrader to induce ferroptosis in HT1080 cells. Eur J Med Chem. 2024 Feb 5;265:116110. [7]. Sorafenib fails to trigger ferroptosis across a wide range of cancer cell lines. Cell Death Dis. 2021 Jul 13;12(7):698. [8]. The ferroptosis inducing compounds RSL3 and ML162 are not direct inhibitors of GPX4 but of TXNRD1. Redox Biol. 2023 Jun;62:102703. [9]. Inhibition of cannabinoid receptor type 1 sensitizes triple-negative breast cancer cells to ferroptosis via regulating fatty acid metabolism. Cell Death Dis. 2022 Sep 21;13(9):808. [10]. Prominin2 Drives Ferroptosis Resistance by Stimulating Iron Export. Dev Cell. 2019 Dec 2;51(5):575-586.e4.
其他信息	谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4) 是铁死亡（一种铁依赖性非凋亡性细胞死亡）的调节因子；抑制GPX4可使耐药癌细胞对铁死亡敏感。然而，一些癌细胞会发展出抵抗铁死亡的保护机制；了解这些机制有助于克服化疗耐药性。本研究探讨了GPX4抑制诱导头颈癌(HNC)细胞对铁死亡产生耐药性的分子机制。我们测试了两种GPX4抑制剂(1S, 3R)-RSL3和ML-162以及葫芦巴碱在HNC细胞系（包括顺铂耐药细胞系(HN3R)和获得性RSL3耐药细胞系(HN3-rslR)）中的作用。通过细胞活力、细胞死亡、脂质活性氧（ROS）生成和蛋白质表达，以及在小鼠肿瘤异种移植模型中，评估了抑制剂和葫芦巴碱的作用，以及p62、Keap1或Nrf2基因抑制的作用。RSL3或ML-162处理可诱导不同程度的头颈癌（HNC）细胞发生铁死亡。RSL3或ML-162处理可增加化疗耐药的HN3R和HN3-rslR细胞中p62和Nrf2的表达，使Keap1失活，并增加磷酸化PERK-ATF4-SESN2通路的表达。Nrf2的转录激活与铁死亡抵抗相关。通过抑制Keap1或Nrf2基因转染过表达Nrf2可使化疗敏感的HN3细胞对RSL3产生耐药性。然而，Nrf2抑制或p62沉默可使HN3R细胞对RSL3敏感。在移植了HN3R细胞的小鼠模型中，葫芦巴碱可使化疗耐药的头颈癌细胞对RSL3治疗敏感。因此，Nrf2-ARE通路激活导致头颈癌细胞对GPX4抑制剂产生耐药性，而抑制该通路则可逆转头颈癌细胞对铁死亡的耐药性。[1]

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C23H21CLN2O5
分子量	440.8762
精确质量	440.113
元素分析	C, 62.66; H, 4.80; Cl, 8.04; N, 6.35; O, 18.14
CAS号	1219810-16-8
PubChem CID	1750826
外观&性状	White to off-white solid powder
密度	1.4±0.1 g/cm3
沸点	641.3±55.0 °C at 760 mmHg
闪点	341.6±31.5 °C
蒸汽压	0.0±1.9 mmHg at 25°C
折射率	1.636
LogP	3.07
tPSA	88.7
氢键供体(HBD)数目	1
氢键受体(HBA)数目	5
可旋转键数目(RBC)	6
重原子数目	31
分子复杂度/Complexity	696
定义原子立体中心数目	2
SMILES	COC(=O)[C@H]1CC2=C([C@@H](N1C(=O)CCl)C3=CC=C(C=C3)C(=O)OC)NC4=CC=CC=C24
InChi Key	TXJZRSRTYPUYRW-NQIIRXRSSA-N
InChi Code	InChI=1S/C23H21ClN2O5/c1-30-22(28)14-9-7-13(8-10-14)21-20-16(15-5-3-4-6-17(15)25-20)11-18(23(29)31-2)26(21)19(27)12-24/h3-10,18,21,25H,11-12H2,1-2H3/t18-,21+/m1/s1
化学名	methyl (1S,3R)-2-(2-chloroacetyl)-1-(4-methoxycarbonylphenyl)-1,3,4,9-tetrahydropyrido[3,4-b]indole-3-carboxylate
别名	(1S,3R)-RSL3; 1S,3R-RSL3; RSL3 (1S,3R-); CHEMBL4747331; (1S,3R)-Methyl 2-(2-chloroacetyl)-1-(4-(methoxycarbonyl)phenyl)-2,3,4,9-tetrahydro-1H-pyrido[3,4-b]indole-3-carboxylate; RSL3 1S,3R-;
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意：请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO : ~100 mg/mL (~226.82 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (11.34 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More 配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 4 中的溶解度:* ≥ 0.56 mg/mL (1.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMF 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。配方 5 中的溶解度: 20 mg/mL (45.36 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO : ~100 mg/mL (~226.82 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (11.34 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 4 中的溶解度: ≥ 0.56 mg/mL (1.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMF 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。

配方 5 中的溶解度: 20 mg/mL (45.36 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	2.2682 mL	11.3410 mL	22.6819 mL
	5 mM	0.4536 mL	2.2682 mL	4.5364 mL
	10 mM	0.2268 mL	1.1341 mL	2.2682 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。