| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
cGAS/dsDNA complex (Kd = 36.2 nM); dsDNA (IC50 = 0.7 μM); cGAS (700 nM)
RU.521 (RU320521) targets cyclic GMP-AMP synthase (cGAS) (IC50 = 0.12 μM for human cGAS enzymatic activity; Ki = 0.08 μM, competitive inhibition mode against dsDNA substrate) [1] RU.521 (RU320521) shows no significant inhibition against other nucleic acid sensors (STING, TLR9, RIG-I) at 10 μM [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在巨噬细胞中，RU.521（0.1 nM-1000 μM；72 小时）连接 dsDNA 触发的信号通路 [1]。在巨噬细胞中，dsDNA 诱导的信号传导途径由 RU.521（0-100 μM；24 小时）偶联 [1]。
- cGAS酶抑制活性：RU.521 (RU320521)以剂量依赖性方式强效且选择性抑制重组人cGAS介导的cGAMP合成，IC50=0.12 μM，Ki=0.08 μM。结合实验证实，它与dsDNA竞争结合cGAS[1] - 抑制自身免疫小鼠巨噬细胞的干扰素（IFN）表达：从MRL/lpr自身免疫小鼠分离的原代巨噬细胞，经dsDNA（1 μg/mL）+脂多糖（LPS，10 ng/mL）刺激后，RU.521 (RU320521)（0.1-2 μM）剂量依赖性降低IFN-β mRNA水平（0.5 μM降低45%、1 μM降低68%、2 μM降低75%）和IFN-α蛋白水平（0.5 μM降低40%、1 μM降低62%、2 μM降低70%）[1] - 减少cGAMP生成：dsDNA刺激的RAW 264.7巨噬细胞中，1 μM RU.521 (RU320521)使细胞内cGAMP浓度降低65%[1] - 改善脓毒症诱导的巨噬细胞活化：LPS（1 μg/mL）+ATP（5 mM）刺激的RAW 264.7巨噬细胞经RU.521 (RU320521)（0.5-2 μM）处理后，2 μM浓度下促炎细胞因子水平降低（TNF-α降低58%、IL-6降低63%），NF-κB p65磷酸化水平抑制60%[2] - 无显著细胞毒性：RU.521 (RU320521)浓度高达10 μM时，对原代巨噬细胞或RAW 264.7细胞无明显细胞毒性（细胞存活率＞90%）[1][2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠中，RU.521（5 mg/kg；腹腔注射一次）可减少饥饿迹象 [2]。
- 降低自身免疫小鼠的IFN表达：MRL/lpr小鼠腹腔注射RU.521 (RU320521)（10 mg/kg、20 mg/kg），每日一次，连续14天。10 mg/kg和20 mg/kg剂量下，血清IFN-β水平分别降低48%和62%，IFN-α水平分别降低42%和58%；治疗组小鼠脾巨噬细胞经dsDNA刺激后，IFN-β mRNA表达（20 mg/kg）降低55%[1] - 改善脓毒症诱导的心脏功能障碍：C57BL/6小鼠经盲肠结扎穿孔（CLP）诱导脓毒症后，1小时内腹腔注射RU.521 (RU320521)（15 mg/kg），之后每日一次，连续2天。CLP后72小时，治疗组小鼠左心室射血分数（LVEF）和短轴缩短率（FS）较脓毒症对照组分别提高35%和38%；心脏组织中TNF-α、IL-6和cGAMP水平分别降低52%、55%和60%[2] - 动物耐受性：有效剂量下，治疗组小鼠无显著体重下降（＜7%）或明显毒性症状（嗜睡、器官损伤）[1][2] |
| 酶活实验 |
高通量筛选[1]
筛选反应在20个 384个小体积深井聚丙烯板中的µl体积。cGAS酶、dsDNA、ATP和GTP的最终浓度为60 nM，300 nM，300 µM和300 µM。5微升反应缓冲液，由20 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl，5 mM MgCl2，1 mM二硫苏糖醇（DTT）和0.01%Tween-20使用Thermo Multidrop Combi分配器每孔分配。使用离心30在井底收集液体 s在180×g。将化合物溶解在DMSO和0.05中 µl，共5个 用Janus 384 MDT NanoHead分配mM。测定中化合物的最终浓度为12.5 µM。浓度为0.5%的DMSO不干扰重组cGAS产生cGAMP。接下来，10 µl含有补充0.6的反应缓冲液的主混合物 mM ATP，0.6 mM GTP和0.6 使用Thermo Multidrop Combi分配器将µM dsDNA添加到第1-23列的孔中，同时10 将µl不含dsDNA的主混合物（无酶活性的对照）加入柱24中的孔中。将平板离心30 s，以收集井底的所有液体。反应开始时加入5 µl的0.24 将反应缓冲液中的µM重组全长小鼠cGAS加入平板的每个孔中，然后离心30 180×g下培养120 在室温下最小。通过加入65停止反应 µl 0.5%（v/v）甲酸/孔。将板离心30分钟 s，并用Velocity11 PlateLoc热板密封器密封。通过以下方式抑制cGAS活性的化合物 ≥ 在浓度反应实验中重新测试60%，以确定半数最大抑制浓度（IC50）。将化合物连续稀释一半，共稀释10次，其中测定中的最高终浓度为25 µM。选择用于后续研究的化合物从供应商处重新排序，溶解在二甲基亚砜中，浓度为10 mM，并在浓度响应实验中重新测试。使用GraphPad Prism（7.01）从三个重复实验中计算酶测定的IC50值；误差条表示SD。 - cGAS酶活性实验：在反应缓冲液（pH 7.5）中，将重组人cGAS蛋白与45 bp dsDNA底物、ATP、GTP及梯度浓度（0.01-2 μM）的RU.521 (RU320521)混合，37°C孵育2小时后，高效液相色谱（HPLC）检测cGAMP生成量，绘制抑制率与药物浓度曲线计算IC50；改变dsDNA浓度进行动力学分析，证实竞争性抑制模式[1] - 核酸传感器选择性实验：将重组STING、TLR9、RIG-I蛋白分别与对应底物及RU.521 (RU320521)（10 μM）在最适反应缓冲液中混合，37°C孵育2-3小时后，检测酶活性或下游信号激活情况，评估选择性[1] |
| 细胞实验 |
将小分子化合物连续稀释至响应曲线中测试范围内的浓度，添加至6.7 × 105 RAW蓝色巨噬细胞平板16 h之前在96孔培养皿中，然后收获72 h。使用CellTiter Glo活力测定法（Promega）测量ATP，使用50 µM三苯氧胺（Sigma）作为细胞毒性阳性对照。使用载体（DMSO）或第一剂量（RU.521）作为100%和他莫昔芬作为0%产生活力值。如前所述[1]，已删除异常值。
- 原代巨噬细胞分离及IFN表达实验：从MRL/lpr小鼠脾脏分离巨噬细胞，以5×10⁵个细胞/孔接种到6孔板，过夜孵育。RU.521 (RU320521)（0.1-2 μM）预处理1小时后，用dsDNA（1 μg/mL）+LPS（10 ng/mL）刺激6小时（mRNA检测）或24小时（蛋白检测）。RT-PCR检测IFN-β mRNA水平，ELISA检测IFN-α蛋白水平[1] - cGAMP检测实验：RAW 264.7巨噬细胞接种到12孔板，RU.521 (RU320521)（0.5-2 μM）预处理1小时后，dsDNA（1 μg/mL）刺激8小时。裂解细胞后，HPLC检测cGAMP浓度[1] - 脓毒症相关巨噬细胞活化实验：RAW 264.7巨噬细胞接种到96孔板（细胞因子检测）或6孔板（蛋白质印迹），RU.521 (RU320521)（0.5-2 μM）预处理1小时后，LPS（1 μg/mL）+ATP（5 mM）刺激24小时。ELISA检测TNF-α/IL-6水平，蛋白质印迹法检测p-NF-κB p65蛋白[2] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 向8周龄雄性小鼠注射LPS[2]
剂量： 5 mg/kg 给药途径： 腹腔注射（ip）；5 mg/kg 单次给药 实验结果： 增强小鼠心脏功能，降低心脏炎症反应、氧化应激和细胞凋亡。 - 自身免疫小鼠模型：将8-10周龄的雌性MRL/lpr小鼠随机分为对照组、10 mg/kg RU.521 (RU320521) 组和20 mg/kg RU.521 (RU320521) 组（每组n=8）。将化合物溶于DMSO和无菌生理盐水（体积比1:9）的混合液中，每日腹腔注射一次，连续14天。对照组注射等体积的溶剂。收集血清用于IFN检测；脾脏巨噬细胞分离用于体外刺激试验[1] - 脓毒症诱导的心脏功能障碍模型：雄性C57BL/6小鼠（6-8周龄）接受盲肠结扎穿孔术（CLP）以诱导脓毒症。小鼠随机分为假手术组、脓毒症溶剂组和脓毒症+RU.521（RU320521）（15 mg/kg）组（每组n=10）。该化合物溶于DMSO+生理盐水（1:9）混合液中，于CLP术后1小时腹腔注射，之后每日一次，连续2天。CLP术后72小时，通过超声心动图测量心脏功能（左室射血分数[LVEF]、缩短分数[FS]）。处死小鼠，收集心脏组织用于细胞因子和cGAMP检测[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
急性毒性：小鼠单次腹腔注射剂量高达 200 mg/kg 的 RU.521 (RU320521) 后，未出现死亡或明显的毒性症状，最大耐受剂量 (MTD) > 200 mg/kg [1][2]
- 亚急性毒性：小鼠接受 RU.521 (RU320521) 治疗（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续 28 天）后，体重、血常规参数（白细胞、红细胞、血小板）或肝肾功能指标（ALT、AST、肌酐、尿素氮）均未见显著变化。主要器官（心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏）的组织病理学检查未发现异常病变 [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
环状GMP-AMP合成酶对抵抗感染和细胞损伤的先天免疫至关重要，它能感知来自病原体或错位自身DNA的DNA。环状GMP-AMP合成酶与双链DNA结合后，会合成一种环状二核苷酸，从而启动炎症细胞反应。在模拟自身免疫性疾病艾卡迪-古蒂埃综合征致病突变的小鼠模型中，敲除环状GMP-AMP合成酶基因可消除该疾病的有害表型。本文报道了一类通过高通量筛选发现的环状GMP-AMP合成酶抑制剂。这些化合物具有明确的构效关系，我们解析了环状GMP-AMP合成酶、双链DNA以及抑制剂在酶活性位点内的晶体结构。我们发现，经化学修饰的化合物RU.521在环状GMP-AMP合成酶介导的信号传导细胞分析中具有活性和选择性，并能降低Aicardi-Goutières综合征小鼠模型巨噬细胞中干扰素的组成型表达。RU.521将有助于理解环状GMP-AMP合成酶的生物学功能，并可作为未来自身免疫疗法开发的分子支架。环状GMP-AMP合成酶（cGAS）与DNA结合后产生环状二核苷酸，进而导致炎症基因的上调。本文作者开发了小分子cGAS抑制剂，对其进行了功能表征，并展示了抑制剂和DNA结合的cGAS的晶体结构，这将有助于药物的开发。[1]
目的：心脏功能障碍是重症监护病房脓毒症后多器官功能衰竭的主要原因。本研究旨在探讨环磷酸鸟苷-AMP合成酶（cGAS）小分子抑制剂RU.521对脓毒症小鼠心脏功能的影响。[2] 材料与方法：通过腹腔注射脂多糖（LPS，10 mg/kg）诱导小鼠脓毒症。LPS注射后10分钟内，小鼠接受5 mg/kg RU.521。LPS注射后24小时内检测小鼠的心脏功能、炎症因子和氧化应激水平。[2] 主要结果：RU.521显著改善了脓毒症小鼠的心脏功能。此外，RU.521显著减轻了脓毒症小鼠心脏的炎症反应、氧化应激和细胞凋亡。此外，Sirt3抑制剂抑制了RU.521对脓毒症小鼠的保护作用。[2] 意义：本研究表明，RU.521通过增加脓毒症小鼠心脏中Sirt3的表达，减轻炎症反应和氧化应激引起的损伤，从而发挥心脏保护作用。 - 化学分类：RU.521 (RU320521)是一种小分子cGAS抑制剂，分子量约为350 Da，在DMSO中的溶解度≥10 mM。[1][2] - 作用机制：该化合物与cGAS的dsDNA结合域结合，竞争性阻断dsDNA与cGAS的相互作用。该药物抑制cGAS介导的cGAMP合成、下游STING-NF-κB信号通路激活以及I型干扰素（IFN-α/β）和促炎细胞因子的产生，从而减轻自身免疫性疾病和脓毒症中的异常炎症[1][2] - 靶点背景：cGAS是一种胞质DNA传感器，它通过与双链DNA结合催化cGAMP合成来激活先天免疫。cGAS异常激活是自身免疫性疾病和脓毒症相关器官功能障碍发病机制的重要因素[1][2] - 治疗潜力：RU.521 (RU320521)是一种强效、选择性强且体内活性高的cGAS抑制剂，在改善自身免疫相关IFN过度表达和脓毒症引起的心脏功能障碍方面显示出良好的疗效，具有治疗自身免疫性疾病和脓毒症相关器官损伤的潜在应用价值[1][2] |
| 分子式 |
C19H12CL2N4O3
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|---|---|
| 分子量 |
415.2296
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| 精确质量 |
414.03
|
| 元素分析 |
C, 54.96; H, 2.91; Cl, 17.07; N, 13.49; O, 11.56
|
| CAS号 |
2262452-06-0
|
| PubChem CID |
135397653
|
| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid
|
| LogP |
4.1
|
| tPSA |
87.3Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
732
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
VIQXILLOJLATEF-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C19H12Cl2N4O3/c1-8-13(16-9-4-2-3-5-10(9)18(27)28-16)17(26)25(24-8)19-22-12-7-6-11(20)14(21)15(12)23-19/h2-7,16,26H,1H3,(H,22,23)
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| 化学名 |
3-[1-(6,7-Dichloro-1H-benzimidazol-2-yl)-5-hydroxy-3-methyl-pyrazol-4-yl]-3H-isobenzofuran-1-one
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| 别名 |
RU320521; RU-521; RU-320521; RU521; RU 320521; RU 521; 2-(4,5-dichloro-1H-benzimidazol-2-yl)-5-methyl-4-(3-oxo-1H-2-benzofuran-1-yl)-1H-pyrazol-3-one; CHEMBL4567157; 3-(1-(6,7-Dichloro-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-5-hydroxy-3-methyl-1H-pyrazol-4-yl)isobenzofuran-1(3H)-one; 3-[1-(6,7-dichloro-1H-benzimidazol-2-yl)-5-hydroxy-3-methyl-1H-pyrazol-4-yl]-1(3H)-isobenzofuranone; RU.521
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~83.33 mg/mL (~200.68 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4083 mL | 12.0415 mL | 24.0830 mL | |
| 5 mM | 0.4817 mL | 2.4083 mL | 4.8166 mL | |
| 10 mM | 0.2408 mL | 1.2042 mL | 2.4083 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
G150
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