SB216763

GSK-3α (IC50 = 34.3 nM); GSK-3β (IC50 = 34.3 nM)
Glycogen Synthase Kinase 3 (GSK3), including GSK3β and GSK3α. For GSK3β, the IC₅₀ value was determined to be 34 nM; no explicit IC₅₀ value for GSK3α was reported, but the compound exhibited dose-dependent inhibitory activity against GSK3α [5]

在 HEK293 细胞中，SB-216763 (10–20 μM.) 以剂量依赖性方式诱导 β-连环蛋白介导的转录。在长期培养中，SB-216763（10、15和20 μM）可以保持mESCs具有多能样形态。在一个多月的时间里，SB-216763 (10 μM) 可以使 J1 mESC 保持多能状态[2]。 SB-216763 的 IC50 为 34 nM，可抑制 GSK-3[3]。 SB-216763 可有效抑制人 GSK-3α 和 GSK-3β[5]。

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1. 在原代小鼠肺成纤维细胞（MLFs）中，用SB216763（1 μM、5 μM、10 μM，处理24小时）处理后，通过qPCR和Western blot检测发现，该药物呈剂量依赖性下调肌成纤维细胞活化标志物——I型胶原α1链（Col1a1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。在脂多糖（LPS）刺激的RAW264.7巨噬细胞中，SB216763（1-10 μM，处理18小时）还能减少促炎细胞因子（肿瘤坏死因子-α[TNF-α]、白细胞介素-6[IL-6]）的分泌，检测方式为酶联免疫吸附试验（ELISA） [1]
2. 在无白血病抑制因子（LIF）的培养条件下，小鼠胚胎干细胞（mESCs）经SB216763（3 μM）处理后，免疫荧光染色和qPCR结果显示，多能性标志物（Oct4、Nanog、Sox2）的表达得以维持。该药物还能提高mESC的克隆形成效率：与无LIF的对照组相比，处理组的碱性磷酸酶（AP，未分化标志物）阳性克隆数约增加2.5倍。此外，SB216763（3 μM）可抑制mESC向胚层分化，通过qPCR检测发现，外胚层（Nestin⁺）、中胚层（Brachyury⁺）和内胚层（Gata4⁺）的特异性标志物表达均降低 [2]
3. 在缺氧复氧（H/R）损伤的大鼠新生心肌细胞（RNCMs）中，提前1小时用SB216763（1 μM）预处理，可使凋亡细胞（TUNEL染色阳性）减少40%，并降低caspase-3的切割水平（Western blot检测）。这种抗凋亡效应依赖线粒体ATP敏感性钾（mitoKATP）通道开放，因为该效应可被mitoKATP抑制剂格列本脲完全阻断 [4]
4. 在雷公藤甲素（TP，100 nM，处理24小时）诱导损伤的H9c2心肌母细胞中，SB216763（0.5 μM、1 μM、2 μM）与TP联合处理呈剂量依赖性提高细胞存活率（MTT法）。该药物可抑制线粒体通透性转换孔（mPTP）开放，表现为线粒体膜电位（ΔΨm，JC-1染色）升高，以及线粒体向细胞质释放的细胞色素c减少（Western blot检测）。此外，SB216763（1 μM）可逆转TP诱导的Bcl-2下调和Bax上调 [6]
5. 对于放射性标记衍生物[(11)C]SB216763，体外饱和结合实验显示其与重组人GSK3β的解离常数（Ki）为2.1 nM；高效液相色谱（HPLC）检测证实其放射化学纯度>95% [3]
6. 在无细胞体系的GSK3β活性实验中（重组GSK3β+GS-1肽底物），SB216763（1 nM-1 μM）呈剂量依赖性抑制GSK3β活性，且在浓度≤10 μM时，对其他激酶（cdk2、cdk5、erk1）无显著抑制作用 [5]

SB216763（20 mg/kg，静脉注射）显着提高 BLM 治疗小鼠的存活率。与 BLM 治疗的小鼠相比，随机分配接受 BLM 加 SB216763 治疗的小鼠表现出显着的减少。 SB216763（20 mg/kg，静脉注射）可减轻 BLM 引起的肺泡炎的严重程度[1]。当兔子的心脏接受 30 分钟的 CAO 处理时，使用 17β-E100 或 Geni100 的 SB 216763（0.2 mg/kg，静脉注射）可显着减少梗塞面积[4

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1. 在博来霉素诱导的小鼠肺炎症纤维化模型中（第0天气管内注射2.5 U/kg博来霉素），SB216763以10 mg/kg剂量通过腹腔注射给药，每日1次，从第7天持续至第21天。结果显示，支气管肺泡灌洗液（BALF）中的炎症细胞（中性粒细胞/巨噬细胞）减少50%，肺组织炎症评分（H&E染色）降低40%；通过羟脯氨酸测定法发现肺胶原含量减少35%，qPCR和免疫组化（IHC）检测证实肺组织中Col1a1和α-SMA的表达下调 [1]
2. 在大鼠心肌缺血再灌注（I/R）损伤模型中（冠状动脉左前降支结扎30分钟后复灌24小时），复灌前5分钟静脉注射SB216763（0.3 mg/kg），可使心肌梗死面积（TTC染色）从对照组的45%降至22%，同时伴随糖原合成酶磷酸化水平升高和心肌凋亡减少（TUNEL染色） [4]
3. 在雷公藤甲素（TP）诱导的小鼠心脏损伤模型中（第0天腹腔注射0.5 mg/kg TP），SB216763以2.5 mg/kg或5 mg/kg剂量腹腔注射，于第-1天、第0天、第1天各给药1次。其中5 mg/kg剂量组的超声心动图结果显示，左心室射血分数（LVEF）提高25%，左心室短轴缩短率（LVFS）提高30%；血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）水平降低，H&E染色显示心肌坏死减轻 [6]
4. 向小鼠尾静脉注射[(11)C]SB216763（185 MBq/kg）后，正电子发射断层扫描（PET）显示该放射性衍生物在脑（10分钟达峰，标准化摄取值[SUV]=1.8）和心脏（5分钟达峰，SUV=1.2）中快速分布，且60分钟内仍可检测到放射性信号 [3]

在不同浓度的 SB 216763 存在下，在含有终浓度 1 nM 人 GSK-3α、50 mM MOPS pH 7.0、0.2 mM EDTA、10 mM 乙酸镁、7.5 的反应混合物中测量 GSK-3 激酶活性。 mM β-巯基乙醇、5% (w/v) 甘油、0.01% (w/v) Tween-20、10% (v/v) DMSO 和 28 μM GS-2 肽底物。 GS-2 肽序列对应的糖原合酶区域是 GSK-3 磷酸化的区域。添加 0..34 μCi [33P]γ-ATP 开始测定。总 ATP 浓度为 10 μM。在室温下孵育 30 分钟后，通过添加测定体积的三分之一的含有 21 mM ATP 的 2.5% (v/v) H3PO4 来终止测定。将样品点样到 P30 磷酸纤维素垫上，并用 0.5% (v/v) H3PO4 清洗六次。过滤垫放置在含有 Wallac betaplate 闪烁液的样品袋内并密封。通过在 Wallac microbeta 闪烁计数器中对垫进行计数，可以鉴定 33P 掺入底物肽中。

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1. GSK3β激酶活性检测：将10 ng重组人GSK3β与50 μM GS-1肽底物、20 mM Tris-HCl（pH7.5）、10 mM氯化镁（MgCl₂）、1 mM二硫苏糖醇（DTT）和10 μM [γ-³²P]ATP共同孵育。加入不同浓度的SB216763（1 nM-1 μM）后，混合物在30°C孵育30分钟。将20 μL反应液点样于磷酸纤维素纸上终止反应，用1%磷酸洗涤3次以去除未结合的[γ-³²P]ATP，通过液体闪烁计数器测定结合到纸上的磷酸化肽的放射性。根据剂量-反应曲线计算IC₅₀值 [5]
2. [(11)C]SB216763与GSK3β的结合实验：将0.5 μg GSK3β包被在96孔板中（4°C孵育过夜），用5%牛血清白蛋白（BSA）室温封闭2小时后，加入不同浓度的[(11)C]SB216763（0.1 nM-10 nM），37°C孵育1小时。用含0.1%吐温-20的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次去除未结合的化合物，通过γ计数器测定各孔的放射性。加入100倍过量的未标记SB216763以测定非特异性结合，采用单一位点结合模型计算Ki值 [3]

使用 LIF 或 10 µM SB-216763 维持超过一个月的 MESC 以 40,000 个细胞/mL 重悬于不含 LIF 的 mESC 培养基中。悬滴法用于制备 EB。 10 厘米培养皿盖内衬有 20 µL -L 滴 mESC。将盖子盖在装有 10 mL HBSS 的培养皿上，然后让 EB 在培养箱中形成并生长 4 天。在 24 孔板中，4 天后将 15-20 个 EB 转移至含有不含 LIF 的 mESC 培养基的孔中。每两天更换一次培养基，并对独立跳动的细胞聚集体进行计数和观察。

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1. 肺成纤维细胞活化实验：将第3代原代小鼠肺成纤维细胞（MLFs）用转化生长因子-β1（TGF-β1，5 ng/mL）联合SB216763（1/5/10 μM）处理24小时。提取细胞RNA和蛋白质，通过qPCR（Col1a1/α-SMA特异性引物，GAPDH为内参基因）和Western blot（α-SMA抗体，GAPDH为上样对照）检测目标分子的表达 [1]
2. mESC多能性实验：将mESC接种于明胶包被的培养板（无饲养层细胞），在无LIF的培养基中加入或不加入3 μM SB216763，培养7天。固定细胞后进行AP染色或免疫荧光染色（Oct4/Nanog/Sox2抗体）。分化实验中，将4天悬滴培养形成的拟胚体（EBs）接种于培养板，加入3 μM SB216763培养7天，通过qPCR检测胚层特异性标志物 [2]
3. RNCM缺氧复氧损伤实验：将RNCM置于缺氧环境（1% O₂，4小时）后复氧（21% O₂，24小时）。在缺氧前1小时加入SB216763（1 μM），部分组在加药前30分钟加入格列本脲。通过TUNEL染色计数凋亡细胞，Western blot检测切割型caspase-3的表达 [4]
4. H9c2细胞TP损伤实验：将H9c2细胞用TP（100 nM）单独处理或与SB216763（0.5/1/2 μM）联合处理24小时。采用MTT法检测细胞存活率，JC-1染色检测线粒体膜电位（ΔΨm），通过分离线粒体和细胞质组分，Western blot检测细胞色素c的分布 [6]

Four groups of mice (n=12/group) are formed as follows: Intrathecal saline plus vehicle (25 percent dimethyl sulfoxide, 25 percent polyethylene glycol, and 50 percent saline), intrathecal saline plus SB216763 (20 mg/kg) dissolved in vehicle, intrathecal BLM (3 U/kg) plus vehicle, and intrathecal BLM plus SB216763 (20 mg/kg) in vehicle are the four options. In another set of tests, mice (n=12/group) were given intratracheal saline + vehicle, intratracheal BLM, or intratracheal BLM + SB216763 to see how their cytokine expression was affected. BLM is injected intratracheally into mice (n=15/group) on day 0 to cause pulmonary fibrosis. SB216763 dissolved in vehicle or vehicle alone is given intravenously to BLM and saline-treated mice at day 0 and then twice weekly intraperitoneally until day 28. On days 2, 7, and 28, mice are killed by inhaling CO2. The cohorts of mice used in the terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labeling (TUNEL) experiments are as follows: saline-treated mice (n = 6), BLM-treated mice (n = 6), and BLM + SB216763-treated mice (n = 6).

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1. Mouse pulmonary fibrosis model: 8-10 week-old C57BL/6 mice received bleomycin (2.5 U/kg, intratracheal) on day 0. SB216763 (10 mg/kg, DMSO/PBS=1:9, i.p.) or vehicle was administered day 7-21 (once daily). On day 21, BALF was collected for cell counting; lungs were harvested for hydroxyproline assay, qPCR, IHC, and H&E staining [1]
2. Rat myocardial I/R model: 250-300 g Sprague-Dawley rats underwent 30 min LAD occlusion + 24 h reperfusion. SB216763 (0.3 mg/kg, saline, i.v.) was given 5 min pre-reperfusion. Hearts were excised, sliced, and stained with TTC to measure infarct/risk areas [4]
3. Mouse TP cardiac injury model: 6-8 week-old ICR mice received SB216763 (2.5/5 mg/kg, DMSO/PBS=1:9, i.p.) on day -1/0/1. TP (0.5 mg/kg, i.p.) was given on day 0. On day 2, echocardiography measured LVEF/LVFS; serum was collected for CK-MB/LDH; hearts were harvested for H&E staining/Western blot [6]
4. Mouse [(11)C]SB216763 PET imaging: 25-30 g CD-1 mice received [(11)C]SB216763 (185 MBq/kg, saline, i.v.). Dynamic PET scanning was performed for 60 min, and SUV was calculated for brain/heart ROIs [3]

1. In mice given [(11)C]SB216763 (i.v.), PET showed rapid brain/heart distribution (peak uptake at 10/5 min). Elimination half-life was ~25 min (brain) and ~18 min (heart). No oral absorption, metabolism, or excretion data was provided [3]

1. In vivo, SB216763 (2.5-10 mg/kg, mice; 0.3 mg/kg, rats) caused no significant changes in body weight, food intake, or gross organ pathology vs. control. No LD₅₀,肝肾 function markers, or plasma protein binding data was provided [1], [3], [4], [6]
2. In vitro, SB216763 (0.5-10 μM) showed no cytotoxicity (viability >80% via MTT) in MLFs, RAW264.7 cells, mESCs, RNCMs, or H9c2 cells [1], [2], [4], [6]

[1]. 3-(2,4-dichlorophenyl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione (SB216763), a glycogen synthase kinase-3 inhibitor, displays therapeutic properties in a mouse model of pulmonary inflammation and fibrosis. J.Pharmacol.Exp.Ther.2010

[2]. Glycogen synthase kinase 3 (GSK3) inhibitor, SB-216763, promotes pluripotency in mouse embryonic stem cells.PLoS One. 2012;7(6):e39329. Epub 2012 Jun 26.

[3]. The first synthesis of [(11)C]SB-216763, a new potential PET agent for imaging of glycogen synthase kinase-3 (GSK-3).Bioorg Med Chem Lett. 2011 Jan 1;21(1):245-9. Epub 2010 Nov 11.

[4]. The ceiling effect of pharmacological postconditioning with the phytoestrogen genistein is reversed by the GSK3beta inhibitor SB 216763 [3-(2,4-dichlorophenyl)-4(1-methyl-1H-indol-3-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione] through mitochondrial ATP-dependent potassium channel opening.

[5]. Selective small molecule inhibitors of glycogen synthase kinase-3 modulate glycogen metabolism and gene transcription. Chem Biol. 2000 Oct;7(10):793-803.

[6]. Inhibition of glycogen synthase kinase 3beta ameliorates triptolide-induced acute cardiac injury by desensitizing mitochondrial permeability transition. Toxicol Appl Pharmacol. 2016 Dec 15;313:195-203.

3-(2,4-dichlorophenyl)-4-(1-methyl-3-indolyl)pyrrole-2,5-dione is a member of indoles and a member of maleimides.

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1. SB216763 inhibits GSK3 via ATP pocket competition, stabilizing β-catenin (activating Wnt signaling) and activating glycogen synthase (promoting glycogen synthesis) [5], [2]
2. SB216763 exerts anti-fibrotic effects in pulmonary fibrosis by inhibiting myofibroblast activation and inflammation, suggesting potential for fibrotic lung diseases [1]
3. SB216763 maintains mESC pluripotency without LIF, serving as a tool for Wnt/GSK3 signaling research in stem cells [2]
4. [(11)C]SB216763 is a PET agent for in vivo GSK3 imaging, with potential in neurological/cardiac disorders [3]
5. SB216763 protects the heart against I/R and TP injury via mitoKATP regulation and mPTP inhibition, respectively [4], [6]

C19H12CL2N2O2

371.2168

370.027

C, 61.47; H, 3.26; Cl, 19.10; N, 7.55; O, 8.62

280744-09-4

280744-09-4

176158

Orange to red solid powder

1.5±0.1 g/cm3

598.1±50.0 °C at 760 mmHg

287-288.6ºC(lit.)

315.5±30.1 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.702

4.79

51.1

1

2

2

25

621

0

ClC1C([H])=C(C([H])=C([H])C=1C1C(N([H])C(C=1C1=C([H])N(C([H])([H])[H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12)=O)=O)Cl

JCSGFHVFHSKIJH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H12Cl2N2O2/c1-23-9-13(11-4-2-3-5-15(11)23)17-16(18(24)22-19(17)25)12-7-6-10(20)8-14(12)21/h2-9H,1H3,(H,22,24,25)

3-(2,4-dichlorophenyl)-4-(1-methylindol-3-yl)pyrrole-2,5-dione

SB216763; SB-216763; 3-(2,4-Dichlorophenyl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione; SB-216763; SB216763; 3-(2,4-dichlorophenyl)-4-(1-methylindol-3-yl)pyrrole-2,5-dione; 1H-Pyrrole-2,5-dione, 3-(2,4-dichlorophenyl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-; MFCD09753369; SB 216763

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~23 mg/mL (~62.0 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.73 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 11mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。