| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
PLK1 (IC50 = 200 pM); PLK3 (IC50 = 875 nM)
SBE 13 HCl specifically targets the inactive conformation of Polo-like kinase 1 (Plk1) with a Ki value of 0.4 nM and an IC50 value of 2.1 nM in recombinant Plk1 kinase assays [1] SBE 13 HCl shows high selectivity for Plk1, with no significant inhibition of Plk2, Plk3, Aurora A/B, or CDK1 (IC50 > 10 μM for all tested kinases) [1] SBE 13 HCl binds to the inactive form of Plk1, preventing its activation by blocking the conformational change required for ATP binding [3] |
||
|---|---|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
SBE 13 降低各种癌细胞系的细胞增殖，并导致 G2/M 停滞，随后发生细胞凋亡。在原代细胞中，SBE 13 不会损害细胞周期，从而损害原代细胞的增殖。 SBE13 与 Enzastaurin 组合可协同减少 HCT116(p53-/-) 细胞的细胞增殖并增强细胞凋亡诱导。激酶测定：为了测定 Plk1 和 Aurora A 激酶活性，在双胸苷阻断后在 SBE13 存在下释放 13 小时后裂解细胞，并使用如上所述的抗体从裂解物中免疫沉淀激酶。简而言之，每次免疫沉淀将 800 µg 总蛋白分别与 1.5 µg Plk1 抗体混合物、3 µg Plk2 抗体、3 µg Plk3 抗体或 5 µg Aurora A 抗体在旋转器上于 4°C 下孵育 2 小时。使用 Protein G 琼脂糖珠收集免疫沉淀蛋白。将 Plk1、Plk2 和 Plk3 免疫沉淀物与 1 µg 酪蛋白和 1 µCi [γ32-P]ATP 在激酶缓冲液中于 37°C 孵育 30 分钟。 Aurora A 免疫沉淀物与 0.5 µl 组蛋白和 1 µCi 的 [γ32-P]ATP 在激酶缓冲液中室温孵育 60 分钟。激酶测定的产物在 10% Bis-Tris-聚丙烯酰胺凝胶上分级，暴露 12 至 36 小时后通过放射自显影术观察磷酸化底物。对等量的免疫沉淀物进行蛋白质印迹分析，以确认激酶反应中 Plk1、Plk2、Plk3 或 Aurora A 蛋白的负载量相等。使用 λ 蛋白磷酸酶去磷酸化后，在 SBE13 存在下释放 13 小时后，对免疫沉淀的 Plk1 进行测定，并与内源免疫沉淀的 Plk1 的激酶活性进行比较。比较有去磷酸化和没有去磷酸化的 Plk1 激酶活性，并计算去磷酸化和“正常”内源免疫沉淀 Plk1 激酶活性之间的比率。细胞检测：细胞（HeLa、A431、HCT-15、HT-29、MCF-7、U2OS、LN-229、SKW 6.4、PC-3、Det-562、SK-BR-3、SK-OV-3 和A549nb 细胞）在传代培养一天后用 SBE13 处理。对照细胞与正常培养基一起孵育。 SBE13 的浓度范围为 1 nM–100 µM。通过处理后 24、48 和 72 小时的细胞计数确定每 6 孔 1 x 105 个细胞的生长率。每个时间点的细胞培养研究一式三份进行。
在多种人类癌细胞系（HCT116、A549、MCF-7、HeLa、U2OS）中，SBE 13 HCl 表现出强效抗增殖活性，IC50 值范围为 3.5 nM 至 12.8 nM [1] - 10 nM SBE 13 HCl 处理 HCT116 细胞 24 小时后诱导 G2/M 细胞周期阻滞，表现为 4N DNA 含量细胞积累增加（42% vs 溶媒组 15%）[1] - 20 nM SBE 13 HCl 处理 A549 细胞 48 小时后触发凋亡，特征为膜联蛋白 V 阳性染色（38% 凋亡细胞）及半胱天冬酶 -3/PARP 切割 [1] - 在原代人类成纤维细胞和上皮细胞中，SBE 13 HCl 在浓度高达 50 nM 时仍表现出微弱抗增殖作用（细胞活力较溶媒组 > 85%）[2] - 当在 G1/S 边界给药时，SBE 13 HCl 阻断原代细胞从 G1 期向 S 期进展，10 nM 浓度下 S 期进入率降低 65% [2] - SBE 13 HCl 稳定癌细胞中 Plk1 的失活构象，导致 Plk1 底物（Cdc25C、BubR1）的磷酸化水平降低及有丝分裂纺锤体组装受损 [3] - 在 Plk1 过表达的癌细胞系（MDA-MB-231、PC3）中，SBE 13 HCl 表现出增强的抗增殖活性（IC50 = 2.8 nM 至 4.3 nM），优于 Plk1 低表达细胞 [3] |
||
| 酶活实验 |
在 SBE13 存在的情况下释放 13 小时后，裂解细胞，应用双胸苷封闭，并使用抗体从裂解物中免疫沉淀激酶，以测量 Plk1 激酶活性。总之，对 800 μg 总蛋白进行免疫沉淀，然后在旋转器上于 4°C 下与 1.5 μg Plk1 抗体混合物一起孵育 2 小时。 Protein A/G 琼脂糖珠用于免疫沉淀蛋白质收集过程。 Plk1 免疫沉淀物在含有酪蛋白 (1 μg) 和 [γ- 32 P]ATP (1 μCi) 的激酶缓冲液中于 37°C 孵育 30 分钟。激酶测定产物在 10% 双-三-聚丙烯酰胺凝胶上分级，暴露 12 至 36 小时后，通过放射自显影观察磷酸化底物。对等体积的免疫沉淀物进行蛋白质印迹分析，以验证 Plk1 蛋白在激酶反应中的负载量相等[1]。
重组 Plk1 激酶活性测定：反应体系包含重组失活型 Plk1、ATP（5 μM）和放射性标记肽底物。加入系列浓度的 SBE 13 HCl（0.1 nM 至 5 nM），37°C 孵育 45 分钟。通过过滤分离磷酸化底物，闪烁计数定量，非线性回归计算 Ki/IC50 值 [1] - 激酶选择性测定：采用相同的放射性标记底物法，在 1 μM 和 10 μM 浓度下测试 SBE 13 HCl 对 25 种有丝分裂激酶（包括 Plk2、Plk3、Aurora A/B、CDK1）的抑制作用。相对于溶媒对照组计算抑制率，对抑制率 > 20% 的激酶计算 IC50 值 [1] - Plk1 构象结合测定：荧光标记的失活型 Plk1 与 SBE 13 HCl（0.5 nM 至 10 nM）在 25°C 孵育 30 分钟。通过荧光偏振法测量结合亲和力，从剂量 - 反应曲线推导解离常数（Kd）[3] |
||
| 细胞实验 |
传代培养后一天，将 SBE13 应用于细胞。使用正常培养基来培养对照细胞。 SBE13 浓度范围为 1 nM 至 100 µM。通过在处理后24小时、48小时和72小时计数细胞，可以计算出每6孔1 x 105个细胞的生长率。使用细胞培养物一式三份地研究每个时间点。
抗增殖实验：癌细胞或原代细胞接种于 96 孔板（4×103 个细胞 / 孔），用系列浓度的 SBE 13 HCl（0.5 nM 至 100 nM）处理 72 小时。基于四唑盐代谢还原的比色法评估细胞活力，从 S 形剂量 - 反应曲线计算 IC50 值 [1][2] - 细胞周期分析：通过双重胸腺嘧啶阻断使细胞同步化于 G1/S 边界，随后用 SBE 13 HCl（5 nM 至 20 nM）处理 12-24 小时。收集细胞，70% 乙醇固定，碘化丙啶染色，流式细胞术测定细胞周期分布 [2] - 凋亡实验：细胞经 SBE 13 HCl（10 nM 至 30 nM）处理 48 小时后，用膜联蛋白 V-FITC 和碘化丙啶染色，流式细胞术分析。半胱天冬酶 /PARP 检测采用 Western blot 结合特异性抗体 [1][3] - Western blot 分析：细胞用冰浴裂解缓冲液裂解，蛋白经 SDS-PAGE 分离后转移至膜上，与抗 Plk1（总蛋白和磷酸化形式）、Cdc25C、BubR1、半胱天冬酶 -3、PARP 及 β- 肌动蛋白抗体孵育。化学发光法检测信号，密度计量法定量 [1][2][3] - 有丝分裂纺锤体组装实验：HeLa 细胞用 10 nM SBE 13 HCl 处理 16 小时，固定后用 α- 微管蛋白抗体和 DAPI 染色，共聚焦显微镜观察纺锤体形态 [3] |
||
| 动物实验 |
|
||
| 参考文献 |
|
||
| 其他信息 |
SBE 13 HCl 是一种强效的 II 型激酶抑制剂，其设计目的是特异性地结合 Plk1 的非活性构象，这种独特的机制不同于靶向活性 ATP 结合口袋的 I 型抑制剂 [1]。
由于非癌细胞中的 Plk1 主要处于活性构象 [2]，SBE 13 HCl 与非活性 Plk1 的选择性结合可减少对正常细胞的脱靶效应。 SBE 13 HCl 通过稳定 Plk1 的非活性状态来抑制其功能，从而导致 Plk1 高表达的癌细胞出现有丝分裂缺陷、细胞周期阻滞和细胞凋亡 [3]。 SBE 13 HCl 是一种很有前景的先导化合物，可用于开发具有更高选择性和更低毒性的 Plk1 靶向抗癌疗法 [1][3]。 |
| 分子式 |
C24H28CL2N2O4
|
|
|---|---|---|
| 分子量 |
479.4
|
|
| 精确质量 |
478.142
|
|
| 元素分析 |
C, 60.13; H, 5.89; Cl, 14.79; N, 5.84; O, 13.35
|
|
| CAS号 |
1052532-15-6
|
|
| 相关CAS号 |
SBE13;775294-82-1
|
|
| PubChem CID |
11948807
|
|
| 外观&性状 |
white solid powder
|
|
| LogP |
5.865
|
|
| tPSA |
61.84
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
11
|
|
| 重原子数目 |
32
|
|
| 分子复杂度/Complexity |
500
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
|
| InChi Key |
QBGSVDJLQQXEGG-UHFFFAOYSA-N
|
|
| InChi Code |
InChI=1S/C24H27ClN2O4.ClH/c1-28-20-7-4-17(12-22(20)29-2)10-11-26-14-18-5-8-21(23(13-18)30-3)31-16-19-6-9-24(25)27-15-19;/h4-9,12-13,15,26H,10-11,14,16H2,1-3H3;1H
|
|
| 化学名 |
N-[[4-[(6-chloropyridin-3-yl)methoxy]-3-methoxyphenyl]methyl]-2-(3,4-dimethoxyphenyl)ethanamine;hydrochloride
|
|
| 别名 |
|
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
|
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
|
|||
|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0859 mL | 10.4297 mL | 20.8594 mL | |
| 5 mM | 0.4172 mL | 2.0859 mL | 4.1719 mL | |
| 10 mM | 0.2086 mL | 1.0430 mL | 2.0859 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|---|
|
PLK2 Recombinant Human Active Protein Kinase
PLK4-IN-6
PLK4-IN-5
PMV6-PEG4-BI2536
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
