SC-560

COX-1 (IC50 = 9 nM); COX-2 (IC50 = 6.3 μM)

COX-1 和 SC-560的预稀释以浓度依赖性方式防止花生四烯酸转化为 PGE2。与 COX-1 相比，SC-560 对 COX-2 的 IC50 为 6.3 μM，大约高 1,000 倍[1]。 SC-560 对 HCC 细胞的发育具有剂量和时间依赖性抑制作用。在软琼脂中，SC-560 还可以防止集落形成并刺激剂量依赖性 HCC 细胞增殖。此外，SC-560 以依赖于剂量和时间的方式激活半胱天冬酶 3 和 7，并减少抗肿瘤细胞生长苏丹蛋白 Svivin 和 XIAP 的量 [2]。

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环氧化酶（COX）的两种亚型是已知的，迄今为止，大多数研究都表明COX-2与各种人类癌症的发展和进展有关。越来越多的证据表明COX-1也可能发挥类似的作用。事实上，我们最近观察到，COX-1/CO-2双重抑制剂吲哚美辛比选择性COX-2抑制剂更有效地诱导人肝细胞癌（HCC）细胞系的凋亡，这可能与COX-1在HCC中的作用有关。在这项研究中，我们研究了COX-1在非肿瘤和恶性人类肝组织中的表达，以及高选择性COX-1抑制剂SC-560对人类HCC细胞系细胞生长和凋亡的影响。在几乎所有检测的样本中都检测到COX-1的表达，尽管非肿瘤（NT）和恶性组织之间存在高度差异。NT组织中COX-1阳性细胞的百分比明显高于肿瘤（p<0.0001）。在分化良好的HCC中，COX-1的表达明显高于分化较差的组织（p<0.05）。SC-560对HCC细胞生长显示出剂量和时间依赖性的抑制作用。COX-1抑制剂与尼美舒利和CAY10404这两种选择性COX-2抑制剂的组合对细胞生长抑制产生了相加作用。SC-560还抑制软琼脂中的集落形成，并以剂量依赖的方式诱导HCC细胞凋亡。此外，SC-560降低了抗凋亡蛋白survivin和XIAP的水平，并以剂量和时间依赖的方式激活了caspase-3和-7。总之，我们首次报道选择性COX-1抑制剂SC-560在人HCC细胞中表现出抗肿瘤和凋亡作用。总体而言，我们之前和现在的研究结果表明，COX-1和COX-2抑制剂可能对HCC患者具有潜在的治疗意义[2]。

测试前 1 小时，离子载体刺激的 TxB2 产生被 10 或 30 mg/kg SC-560 的损伤完全抑制，表明 SC-560 具有生物损伤可用性并在体内抑制 COX-1 [1]。在支架组织中，SC-560广泛分散，CL靠近肝静脉血流。该药物显示出肾毒性、有限的生物利用度以及表皮制剂后制剂依赖性低于 15% [3]。

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静脉注射SC-560剂量（10mg/kg）后，血清AUC、t（1/2）、CL和Vd分别为9704+/-4038ng/h/mL、5.4+/-0.8h、1.15+/-0.46L/h/kg和9.1+/-4.6L/kg（平均+/-SD，n=5）。口服10mg/kg SC-560-PEG和MC（n=5只大鼠）的血清AUC、C max、t（max）和t（1/2）分别为1203.4+/-130.3和523+/-208ngh/mL、218.5+/-86.9和119.8+/-15.5ng/mL、1.00+/-1.8和2.0+/-0h、3.7+/-1.6和2.7+/-1.7h（平均+/-SD，n=5）。单次口服10mg/kg的SC-560 PEG会导致尿液中NAG排泄量增加，0-24小时尿钠、钾和氯化物排泄量减少。 结论：SC-560广泛分布于大鼠组织中，其CL接近肝血浆流量。口服后，该药物显示出低<15%的生物利用度和制剂依赖性，并显示出肾毒性。[3]

环氧化酶-1和环氧化酶-2（COX-1和COX-2）催化花生四烯酸转化为前列腺素（PG）H2，前列腺素是前列腺素和血栓素的前体。这些脂质介质在炎症和疼痛以及正常生理功能中起着重要作用。虽然有大量数据表明诱导型异构体COX-2在炎症和疼痛中很重要，但组成型表达的异构体COX-1也被认为在炎症过程中发挥作用。为了从药理学上解决后一个问题，我们使用了一种高选择性的COX-1抑制剂SC-560（COX-1 IC50=0.009微M；COX-2 IC50=6.3微M）。SC-560抑制COX-1衍生的血小板血栓素B2、胃PGE2和皮肤PGE2的产生，表明其具有口服活性，但不抑制脂多糖诱导的大鼠气囊中COX-2衍生的PGE。在大鼠卡拉胶脚垫模型中，SC-560的治疗性或预防性给药在显著抑制体内COX-1活性的剂量下不影响急性炎症或痛觉过敏。相比之下，选择性COX-2抑制剂塞来昔布在该模型中具有抗炎和镇痛作用。矛盾的是，SC-560和塞来昔布都将爪子PG降低到了同等水平。注射卡拉胶后，脑脊液中PG水平升高，塞来昔布显著降低了PG水平，但SC-560不影响PG水平。这些结果表明，除了外周产生的PG的作用外，炎症性疼痛还有一个关键的、中枢介导的神经成分，至少部分由COX-2介导[1]。

在这项研究中，我们研究了COX-1在非肿瘤和恶性人类肝组织中的表达，以及高选择性COX-1抑制剂SC-560对人类HCC细胞系细胞生长和凋亡的影响。在几乎所有检测的样本中都检测到COX-1的表达，尽管非肿瘤（NT）和恶性组织之间存在高度差异。NT组织中COX-1阳性细胞的百分比明显高于肿瘤（p<0.0001）。在分化良好的HCC中，COX-1的表达明显高于分化较差的组织（p<0.05）。SC-560对HCC细胞生长表现出剂量和时间依赖性的抑制作用。COX-1抑制剂与尼美舒利和CAY10404这两种选择性COX-2抑制剂的组合对细胞生长抑制产生了相加作用。SC-560还抑制软琼脂中的集落形成，并以剂量依赖的方式诱导HCC细胞凋亡。此外，SC-560降低了抗凋亡蛋白survivin和XIAP的水平，并以剂量和时间依赖的方式激活了caspase-3和-7。总之，我们首次报道选择性COX-1抑制剂SC-560在人HCC细胞中表现出抗肿瘤和凋亡作用。总体而言，我们之前和现在的研究结果表明，COX-1和COX-2抑制剂可能对HCC患者具有潜在的治疗意义[1]。

本研究在Sprague-Dawley大鼠（每组n=5）中考察了SC-560的药代动力学。SC-560分别以单次静脉注射（iv）和口服（10 mg/kg）的方式溶于聚乙二醇（PEG）600溶液，以及以单次口服（10 mg/kg）的方式溶于1%甲基纤维素（MC）溶液。通过插入右侧颈静脉的导管连续采集血样，并使用反相高效液相色谱法（HPLC）分析血清中SC-560的浓度。口服SC-560（溶于PEG）后，收集24小时尿液，并分析尿钠、氯、钾以及NAG的含量。[3]

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给药和采样[3]
在研究当日早晨，称取SC-560，并将其溶解于PEG 600溶液或悬浮于1%甲基纤维素（MC）溶液中（约0.5 mL）。本研究采用灌胃、静脉注射或口服给药的方式对大鼠进行给药。5只大鼠静脉注射10 mg/kg的SC-560（PEG）。另有5只大鼠口服10 mg/kg的SC-560（PEG或MC）。每次注射药物后（约0.25 mL）以及每次采血后，均用生理盐水冲洗导管。静脉给药前，以及给药后2、10分钟、0.5、1、2、4、8、12和24小时，通过导管采集250 μL血液样本；口服给药后，分别于0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时采集血液样本。在另一项研究中，五只大鼠经口给予约0.5 mL溶剂或10 mg/kg的SC-560聚乙二醇溶液，并收集24小时尿液并测量体积。所有样本均保存在-70°C直至分析。尿液在室温下解冻，涡旋振荡30秒，并根据制造商的说明，每次分析使用0.05 mL样本。3-甲酚磺酞-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷钠盐可被NAG水解，释放出3-甲酚磺酞钠盐（3-甲酚紫），该钠盐在580 nm处进行光度测定。

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测定方法[3]
采用经验证的高效液相色谱法测定大鼠血清中的SC-560。向血清样品（0.1 ml）中加入50 ml浓度为10 mg/ml的17-丙酸睾酮内标溶液和1 ml冰冷的乙腈。混合物涡旋振荡1分钟，然后在4℃下以15000 rpm离心5分钟。收集上清液，并使用真空浓缩仪（Heto Vac）蒸干。将残余物用100 ml 70%甲醇溶液（v/v）复溶，涡旋振荡1分钟，然后在4℃下以8000 rpm离心5分钟，取40 ml上清液注入色谱柱。所用高效液相色谱系统为岛津高效液相色谱仪，包括LC-10AT VP泵、SIL-10AF自动进样器、SPD-M10A VP二极管阵列检测器和SCL-10A VP系统控制器。数据采集和积分使用岛津EZ Start 7.1.1 SP1软件完成。分析柱为贝克曼Ultrasphere辛基柱（150 × 2 mm内径，5 μm粒径），并配备一根相同填料的预柱（7.5 × 2 mm内径，5 μm）。流动相为甲醇和水（7:3，v/v），使用前经过滤并在减压下脱气。分离在室温（25 ± 1°C）下进行，流速为0.25 mL/min，采用240 nm紫外检测。所有实验均设置质控样品以确保结果的可靠性。标准曲线呈线性，在高浓度（5000 ng/mL）和低浓度（20 ng/mL）药物浓度下，偏差和精密度数据均小于10%。准确度基于测量浓度与实际浓度的平均百分比误差进行评估。

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药代动力学分析[3]
消除速率常数 (λn) 通过对数线性末端相血清浓度进行线性回归估算。使用 WinNonlin®（版本 1.0）软件，根据血清浓度曲线估算每只大鼠血清中 SC-560 的峰浓度 (Cmax) 和相应的达峰时间 (Tmax)。为了估算静脉注射 SC-560 后立即测得的血清浓度 (C0)，使用 WinNonlin®（版本 1.0）软件，将房室模型拟合到血清浓度-时间数据。然后将估算的 C0 与实际测量的血清浓度结合使用，以确定血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC)。采用对数线性梯形法计算AUC0∞·，数据范围为给药时间至最后一次测得的浓度，加上最后一次测得的浓度除以λn。采用非房室药代动力学方法计算静脉给药后的清除率（CL）和分布容积（Vd）。口服生物利用度（F）的计算方法如下：

所有药代动力学分析均采用非房室模型。每次静脉注射和口服给药后，平均外推AUC均小于20%。静脉注射后，SC-560的平均分布容积（Vd）为9.1 ± 4.6 L/kg。SC-560的平均半衰期（t1/2）约为5小时（表1）。口服给药后，每只大鼠在首次给药后15分钟（15 min）的血清中均可检测到PEG制剂的药物浓度（图2）。达峰时间（tmax）为0.5至4小时，峰浓度（Cmax）为150至316 ng/mL（图2，表1）。口服给药后，每只大鼠在首次给药后15分钟（15 min）的血清中均可检测到MC制剂的药物浓度（图2）。平均达峰时间（tmax）为 2 小时，峰浓度（Cmax）范围为 102 至 132 ng/mL（图 2，表 1）。将静脉注射剂量的 AUC 与口服 PEG 和 MC 后的 AUC 进行比较，估计 SC-560 在大鼠体内的平均口服生物利用度（表 1）分别为 15% 和 5%。[3]
与对照组相比，SC-560 还显著降低了 24 小时内的尿钠、氯和钾排泄量（图 4）。SC-560 治疗组和对照组的血清肌酐或尿素氮浓度均无显著变化。
由于其分布容积（Vd）（平均 9.1 ± 4.6 L/kg）远大于体液组成，表明 SC-560 在大鼠组织中分布广泛。 SC-560 在大鼠体内的药代动力学参数与塞来昔布相似，二者均具有较大的分布容积 (Vd) (11)。SC-560 是一种亲脂性很强的药物，在水性缓冲液中的溶解度很低。这种理化性质可能是其分布容积较大的原因之一，因为它会促进药物被高脂组织（如脂肪组织和脑组织）吸收。口服生物利用度低的原因包括肝脏首过代谢率高和/或药物从胃肠道到门静脉的转运不完全。在大鼠中，平均肝血流量为 3.3 L/h/kg，血细胞比容为 0.48；由此计算出的平均肝血浆流量约为 1.74 L/h/kg。因此，大鼠给予10 mg/kg剂量的SC-560后，其血清清除率为1.15 ± 0.46 L/h/kg，接近平均肝血浆流量。由于SC-560在PEG中的生物利用度比MC悬浮液高3倍，表明其可能存在胃肠道转运不完全的情况。
以往对SC-560的体内药效学和药理学研究采用静脉和口服给药，但对其药代动力学并不了解。目前的研究表明，SC-560的药代动力学与给药途径和制剂有关。
此外，炎症可能会降低经肝脏清除的药物的清除率，在肝脏疾病（例如肝硬化）动物模型中，SC-560的给药可能会改变其药代动力学。
与之前的研究一致，我们发现SC-560具有口服活性。 SC-560 显著提高了 24 小时尿液总量中 NAG 的活性。NAG 是一种存在于肾小管中的溶酶体酶，分子量为 150,000 道尔顿，由于其分子量较大，无法通过肾小球滤过进入肾小管腔。NAG 被认为是肾小管损伤的特异性标志物。此外，尿钠、尿钾和尿氯的排泄量也显著降低。电解质排泄量的降低可能与肾脏中 COX-1 的组成型抑制有关。值得注意的是，单次给药后，SC-560 并未引起 BUN 水平或血清肌酐的显著变化。我们发现，在给予大鼠单次治疗剂量的非甾体抗炎药和其他各种 COX 抑制剂后，血清肌酐和 BUN 对肾毒性的敏感性相对较低。另一项关于SC-560对肾功能药效学影响的研究是在肝硬化腹水大鼠中进行的，该研究也表明，静脉注射20 mg/kg剂量后，尿钠显著降低，肾小球滤过率、肾血浆流量和肾脏前列腺素E2水平也显著下降。值得注意的是，在肝硬化大鼠中，选择性COX-1抑制剂SC-560对呋塞米诱导的利尿和排泄反应的影响呈剂量依赖性。
总之，SC-560是一种亲脂性药物，其特点是清除率接近肝血浆流量，分布容积（Vd）高，生物利用度低且依赖于制剂。单次口服10 mg/kg剂量即可降低尿电解质水平，并诱导肾小管损伤，表现为NAG水平升高。本研究首次报道了SC-560的药代动力学和生物利用度，以及其对无病动物NAG排泄和肾脏电解质的影响。目前正在进行进一步的研究，以表征选择性COX-1抑制剂的药代动力学/药效学关系。[3]

[1]. Pharmacological analysis of cyclooxygenase-1 in inflammation. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998 Oct 27;95(22):13313-8.

[2]. The selective cyclooxygenase-1 inhibitor SC-560 suppresses cell proliferation and induces apoptosis in human hepatocellular carcinoma cells. Int J Mol Med. 2006 Feb;17(2):245-52.

[3]. Formulation dependent pharmacokinetics, bioavailability and renal toxicity of a selective cyclooxygenase-1 inhibitor SC-560 in the rat. J Pharm Pharm Sci. 2003 May-Aug;6(2):205-10.

SC560 属于吡唑类化合物，其结构为 1H-吡唑，分别在 1、3 和 5 位被 4-甲氧基苯基、三氟甲基和 4-氯苯基取代。与许多二芳基杂环环氧合酶 (COX) 抑制剂不同，SC-560 对 COX-1 具有选择性。它可作为环氧合酶 1 抑制剂、非甾体类抗炎药、细胞凋亡诱导剂、抗肿瘤药和血管生成调节剂发挥作用。它属于吡唑类化合物、有机氟化合物、芳香醚和一氯苯类化合物。
5-(4-氯苯基)-1-(4-甲氧基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑已在云南鸡骨常山(Alstonia yunnanensis)中被报道，并有相关数据。

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环氧合酶-1和环氧合酶-2 (COX-1和COX-2)催化花生四烯酸转化为前列腺素(PG)H2，后者是前列腺素和血栓素的前体。这些脂质介质在炎症、疼痛和正常生理功能中发挥重要作用。虽然大量数据表明诱导型同工酶COX-2在炎症和疼痛中发挥重要作用，但组成型表达的同工酶COX-1也被认为在炎症过程中发挥作用。为了从药理学角度解答后一个问题，我们使用了一种高选择性COX-1抑制剂SC-560（COX-1 IC50 = 0.009 μM；COX-2 IC50 = 6.3 μM）。SC-560抑制了COX-1衍生的血小板血栓素B2、胃PGE2和皮肤PGE2的生成，表明其具有口服活性，但并未抑制脂多糖诱导的大鼠气囊模型中COX-2衍生的前列腺素（PGs）。在角叉菜胶诱导的大鼠足垫模型中，SC-560的治疗或预防性给药剂量显著抑制了体内COX-1活性，但并未影响急性炎症或痛觉过敏。相比之下，选择性COX-2抑制剂塞来昔布在该模型中表现出抗炎和镇痛作用。然而，SC-560和塞来昔布均能将足爪PGs降低至相同水平，这与预期相悖。注射角叉菜胶后，脑脊液中前列腺素（PGs）水平升高，塞来昔布可显著降低其水平，但SC-560对其无影响。这些结果表明，除了外周产生的PGs的作用外，炎症性疼痛还存在一个重要的、由中枢介导的神经成分，该成分至少部分由COX-2介导。[1]

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目的：阐明新型环氧合酶-1 (COX-1) 特异性抑制剂 SC-560 在大鼠体内的制剂依赖性药代动力学和生物利用度，并研究其对肾小管酶 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG) 和尿电解质的影响。
方法：在 Sprague-Dawley 大鼠（每组 n = 5）中，分别单次静脉注射 (iv) 和口服 (10 mg/kg) 溶于聚乙二醇 (PEG) 600 的 SC-560，以及单次口服 (10 mg/kg) 溶于 1% 甲基纤维素 (MC) 的 SC-560，研究其药代动力学。通过插入右侧颈静脉的导管采集系列血样，并使用反相高效液相色谱法 (HPLC) 分析血清中 SC-560 的浓度。口服聚乙二醇（PEG）中的SC-560后，收集24小时尿液，并分析尿钠、氯、钾以及NAG。
结果：静脉注射SC-560（10 mg/kg）后，血清AUC、t(1/2)、CL和Vd分别为9704±4038 ng·h/mL、5.4±0.8 h、1.15±0.46 L/h/kg和9.1±4.6 L/kg（平均值±标准差，n=5）。口服 10 mg/kg SC-560-PEG 和 MC（n=5 只大鼠）后，血清 AUC、Cmax、t(max) 和 t(1/2) 分别为 1203.4±130.3 和 523±208 ng·h/mL、218.5±86.9 和 119.8±15.5 ng/mL、1.00±1.8 和 2.0±0 h、3.7±1.6 和 2.7±1.7 h（平均值±标准差，n=5）。单次口服10 mg/kg的聚乙二醇（PEG）制剂SC-560可增加尿液中NAG的排泄，并降低0-24小时尿钠、钾和氯的排泄。
结论：SC-560广泛分布于大鼠组织中，其清除率接近肝血浆流量。口服给药后，该药物的生物利用度低于15%，且与制剂相关，并表现出肾毒性。[3]

C17H12CLF3N2O

352.7382

352.059

C, 57.89; H, 3.43; Cl, 10.05; F, 16.16; N, 7.94; O, 4.54

188817-13-2

4306515

White to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

440.6±45.0 °C at 760 mmHg

63 °C

220.3±28.7 °C

0.0±1.0 mmHg at 25°C

1.564

6.13

27.05

0

5

3

24

407

0

ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C1=C([H])C(C(F)(F)F)=NN1C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OC([H])([H])[H]

PQUGCKBLVKJMNT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H12ClF3N2O/c1-24-14-8-6-13(7-9-14)23-15(10-16(22-23)17(19,20)21)11-2-4-12(18)5-3-11/h2-10H,1H3

5-(4-chlorophenyl)-1-(4-methoxyphenyl)-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole

SC-560; SC 560; SC-560; 5-(4-chlorophenyl)-1-(4-methoxyphenyl)-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole; SC 560; 5-(4-chlorophenyl)-1-(4-methoxyphenyl)-3-(trifluoromethyl)pyrazole; SC560; 5-(4-Chlorophenyl)-1-(4-methoxyphenyl)-3-trifluoromethylpyrazole; 1H-Pyrazole, 5-(4-chlorophenyl)-1-(4-methoxyphenyl)-3-(trifluoromethyl)-; SC560.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 100 mg/mL (~283.49 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (8.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 30.0 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。