SC79

Akt

合成化合物SC79抑制PHAKT-GFP质膜易位，但增强细胞质溶胶中Akt的磷酸化和活化。 SC79增强Akt三种亚型的磷酸化，并在多种细胞类型中提高Akt的活化。 SC79特异性增强Akt磷酸化和激活受体酪氨酸激酶和gpcr介导的信号传导。 SC79直接结合Akt并将其转化为更容易被上游激酶磷酸化的活性构象。 SC79减少神经元兴奋毒性并防止中风引起的神经元死亡。[1]

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在 HEK293、HeLa、HL60、NB4 和 HsSulton（B 细胞）细胞中，SC79 减少 PHAKTM-GFP 质膜易位并增加所有三种 Akt 亚型的磷酸化。 SC79 减轻神经元兴奋毒性并阻止中风引起的神经元死亡。[1] SC79 增加 MitoSox 阳性细胞产生超氧化物的能力，同时减少 BRAT1 敲低细胞的增殖。 [2]

在永久性局灶性脑缺血的小鼠模型中，SC79（0.04 mg/g，腹腔注射）可激活细胞质中的 Akt，并模拟 Akt 信号传导的主要细胞功能，从而增加神经元存活率。 [1]

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为了确定SC79是否可以导致Akt过度激活并防止完整生物体中谷氨酸介导的神经毒性，我们使用了缺血性卒中模型。研究人员对小鼠进行大脑中动脉闭塞（MCAO），引起闭塞区域大量细胞死亡。大多数中风的临床症状，如瘫痪、失语、视觉障碍和记忆丧失，都是由缺氧-葡萄糖剥夺（OGD）引起的神经元死亡引起的，这是血液流动不足的结果。脑卒中诱发的OGD在受影响的脑区诱导突触间隙谷氨酸的显著升高，进而导致大量兴奋性毒性引起的神经元细胞死亡（27,28）。Akt被认为是治疗中风引起的神经元死亡的潜在靶点（29-32）。与此一致的是，在小鼠中使用SC79进行i.p.预处理可以有效地预防中风诱导的Akt失活（图4 C和D）。因此，SC79可以保护皮质区和纹状体免受兴奋性毒性诱导的脑损伤。SC79的作用是强大的，单剂量SC79, 0.04 mg/g体重（相当于0.5 μM），在MCAO后24小时将新皮质病变大小减少35%，MCAO后1周减少40%以上（图4E）。当多次注入SC79时，观察到更为剧烈的效果（图4F）。

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大鼠围手术期给予SC79（一种选择性Akt激活剂，可透过细胞和血脑屏障）0.05 mg/kg × 3 i.p.或载药i.p.。MCAO 1小时，再灌注2小时后，测定14C-α-氨基异丁酸（14C- aib，分子量104 Da）的传递系数（Ki）和3h -葡聚糖体积（分子量7万Da）分布，测定血脑屏障破坏程度。同一时间点，采用四氮唑染色法测定梗死面积。在另一组大鼠中，给予更高剂量的SC79 （0.5 mg/kg × 3）以确定梗死面积。与未给药的MCAO/再灌注动物相比，SC79增加了缺血再灌注皮质（IR-C, +32%, p < 0.05）和对侧皮质（CC, +35%, p < 0.05）的Ki。SC79对右旋糖酐分布体积无显著影响。SC79治疗显著降低皮质梗死占总皮质面积的百分比（12.7±1.7% vs 6.9±0.9%,p < 0.001）。SC79剂量增加10倍对皮质梗死面积无显著影响。与我们的假设相反，我们的数据表明，尽管血脑屏障破坏增加，但SC79减少了缺血再灌注皮层的梗死面积。我们的数据表明Akt的激活对于治疗窗口内早期脑缺血再灌注神经元存活的重要性，并且神经保护的机制可能与SC79的血脑屏障作用无关。[3]

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研究人员在这里报道，Akt激活剂SC79保护肝细胞免受TNF-α-诱导的凋亡，并保护小鼠免受d-半乳糖(d-Gal)/脂多糖（LPS）诱导的TNF-α-介导的肝损伤和损伤。SC79不仅在TNF-α刺激下增强核因子-κB （NF-κB）促生存信号，而且增加细胞FLICE （FADD-like il -1β-转换酶）抑制蛋白L和S （FLIPL/S）的表达，从而抑制procaspase-8的活化。此外，预处理PI3K/Akt抑制剂LY294002可逆转sc79诱导的所有肝保护作用。这些结果强烈提示SC79对TNF-α-诱导的肝细胞凋亡具有保护作用，提示SC79可能是一种有希望改善肝损伤发展的治疗药物。SC79可保护肝细胞免受TNF-α介导的凋亡，并可保护小鼠免受Gal/ lps诱导的肝损伤和损伤。SC79对TNF-α的细胞保护作用是通过akt介导的NF-κB活化和FLIPL/S上调来实现的。[5]

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先前的研究表明，Akt的激活可能减轻蛛网膜下腔出血（SAH）后的早期脑损伤（EBI）。本研究旨在确定铁代谢是否参与SAH后Akt激活的有益作用。因此，我们使用了一个新的分子SC79来激活实验性SAH大鼠模型中的Akt。将大鼠随机分为sham、SAH、SAH +载药、SAH + SC79 4组。结果证实，SC79有效增强了SAH后颞叶氧化应激的防御，减轻了EBI。有趣的是，我们发现SC79磷酸化Akt可减少SAH后细胞表面转铁蛋白受体介导的铁摄取，并促进铁转运蛋白介导的铁转运。结果表明，SC79降低了脑组织中的铁含量。此外，受损的Fe-S簇生物发生得到恢复，含Fe-S簇酶活性的丧失得到恢复，表明受损的线粒体功能恢复到健康水平。这些发现表明，铁稳态的破坏可能导致EBI， Akt的激活可能调节铁代谢以减轻铁毒性，进一步保护SAH后的神经元免受EBI。［6］

Hela 细胞血清饥饿 1 小时，并用 IGF (100ng/mL) 或 SC79 (4 μg/mL) 处理 30 分钟。将蛋白酶抑制剂添加到裂解缓冲液中，其中含有 250 mM 蔗糖、20 mM HEPES、10 mM KCl、1.5 mM MgCl2、1 mM EDTA 和 1 mM EGTA。用 25G 针多次穿过细胞，然后将其置于冰上 20 分钟。此时，收集整个细胞裂解物。将细胞裂解物以 100,000 g 离心 30 分钟。通过收集上清液获得胞质级分。代表膜部分的沉淀在裂解缓冲液中洗涤。 SDS-PAGE 用于分离总细胞裂解物、胞质和膜部分。然后使用蛋白质印迹法检查磷酸 Akt (S473)、总 Akt、微管蛋白（胞质标记物）和 Orai1（膜标记物）的存在。

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Akt质膜易位抑制剂的筛选。为了验证我们基于细胞的高通量筛选方法，我们首先使用生物活性化合物文库（大约3000种化合物）进行了中试筛选。筛选是在哈佛医学院化学和细胞生物学研究所（ICCB）进行的。实验的每一步都在高吞吐量模式下进行（图S3）。根据我们的初步数据，我们将血清饥饿（0.1%血清）的细胞与化合物一起培养30分钟，然后用IGF诱导PHAkt-GFP膜易位。我们的目标是鉴定直接抑制PtdIns(3,4,5)P3/Akt信号通路的化合物。因此，我们选择使用较短的孵育时间来排除间接阻断GFP-PH膜易位的化合物（例如，通过影响转录或翻译）。从先导筛选中，我们鉴定出21种阳性击中化合物（图S4和表S1）。正如预期的那样，几种已知的PI3激酶抑制剂和非特异性抑制PI3激酶活性的化合物被鉴定为阳性命中化合物，验证了我们的高通量筛选策略和方法。然后我们使用几个合成化合物文库进行了高通量筛选。ICCB化合物来自多种来源，包括商业文库、面向多样性的有机合成文库、已知的生物活性化合物和由不同合成策略产生的历史化合物。当ICCB购买化合物文库时，他们选择了富含复杂杂环化合物和高分子量化合物（平均分子量为350-400道尔顿）的集合，因为这些类型的化合物更有可能在高通量筛选中提供有趣的结果。此外，他们还试图减少潜在“有害”化合物的数量，即那些含有可能使它们不稳定或有毒的基团的化合物。特别是，它们消除了不稳定的亚胺，含有游离羧基的化合物，以及含有可能螯合金属的构建块元素的化合物。表S2是用于当前筛选的文库列表，其中包括6万多种合成化合物。高通量筛选进行了两次，以尽量减少假阳性击中化合物的数量。从第一次筛选中，我们确定了大约446个阳性命中化合物，其中125个在第二次筛选中被确认（表S3和图S5）。我们后来发现，其中25种阳性化合物可以产生自荧光，它们对PH-Akt膜转运的影响实际上是背景荧光大大增强的结果（表S3） [1]

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通过延时荧光成像确认阳性命中。在这项研究中，筛选了6万多种化合物，很难滴定出每种化合物的最佳浓度。以5 mg/ml的浓度保存于DMSO中。在我们的筛选中，将100 nl的化合物原液转移到50µl的测定体积中，得到500道尔顿化合物的最终浓度为20µM。这是工商银行通常使用的浓度。我们筛选试验的一个潜在问题是，由于孵育时间相对较短，转移的化合物可能无法在每个孔中均匀扩散。因此，某些正打击化合物对PH-Akt膜易位的影响可能是局部浓度非常高的结果。为了选择最有效的化合物进行进一步的表征，我们使用活细胞在35毫米板上培养进行了剂量范围实验。第二次筛选后确定的125种阳性命中化合物（图S5）是从几家公司购买的。新鲜原液用DMSO （5 mg/ml）新鲜配制。将原液直接加入培养基中，得到3种不同的终浓度（4、8、16µg/ml）。为了延时活细胞成像，将HeLa-PH-EGFP细胞镀于35mm玻璃底皿中，培养24 - 48小时。将细胞在2ml Leibovitz L15培养基中血清饥饿1至2h，然后用1ml新鲜的含所需浓度的每种化合物的无血清Leibovitz 3l15培养基替换培养基。预孵育30 min后，加入IGF1 (5 ng/mL)，在40×油物镜下每5 ~ 10 min拍照。测定细胞膜与邻近细胞质的相对荧光强度。在16µg/ml或低于16µg/ml时，对PH-EGFP膜易位抑制大于75%的化合物被鉴定并指定为确认命中。55个已确认命中化合物的代表性实时图像和结构如图S6和图S7所示。[1]

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圆二色性（CD） [1]
远紫外CD （260-195 nm）在氮气净化的Jasco-810分光偏光计上于25°C下进行。数据采集在1 mm石英试管中，带宽为1 nm，响应时间为2 s，扫描速度为10 nm/min，扫描4次。纯n端6his标记的重组全长人Akt1购自Millipore （www.millipore.com/catalogue/item/14-279）。采用化学合成纯化的SC79。蛋白质和配体样品在50 mM Tris pH 7.5, 150 mM NaCl中制备。Akt1与SC79在37°C下孵育30分钟。数据集一式两份。二级结构百分比的测定采用程序K2D （http://www.embl.de/~andrade/k2d.html）和K2D2 （http://www.ogic.ca/projects/k2d2/）。

将 HsSultan 或 NB4 细胞 (2.5 × 105) 接种于 24 孔板中，加入 500 μL 不含酚红的 RPMI 培养基（补充有 10% FBS）。每种化合物 (8 µg/mL) 在孵育 24 小时后添加，然后培养过夜（16-20 小时）。每个孔接受 50 微升 MTT 溶液（PBS 中 5 mg/mL）。孵育2小时后，将500 L异丙醇和0.1 M HCl直接添加到每个孔中以溶解紫色甲臜晶体。在570 nm波长处，离心去除细胞碎片后测量吸光度。

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western blotting分析SC79诱导的Akt胞质磷酸化。[1]
将Hela细胞血清饥饿1小时，然后用IGF （100ng/ml）或SC79（4µg/ml）处理30分钟。细胞在含有250 mM蔗糖、20 mM HEPES、10 mM KCl、1.5 mM MgCl2、1 mM EDTA、1 mM EGTA并添加蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液中裂解。25G针多次传代细胞，冰敷20分钟。此时取细胞总裂解液。细胞裂解液以100,000g离心30分钟。收集上清液作为细胞质组分。球团用裂解缓冲液洗涤，代表膜分数。用SDS-PAGE分离细胞总裂解液、胞浆和膜组分，用western blotting分析磷酸化Akt （S473）、总Akt、微管蛋白（胞浆标记物）和Orai1（膜标记物）。

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MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑）细胞活力测定。[1]
将HsSultan或NB4细胞（2.5 × 105）在500 μL添加10%胎牛血清的无酚红RPMI培养基中接种于24孔板。孵育24小时后，加入每种化合物（8µg/ml），培养过夜（16-20 h）。每孔加入50微升MTT溶液（PBS中5 mg/ ml）。孵育2 h后，每孔中直接加入500 μL异丙醇和0.1 M盐酸，将紫色甲醛晶体溶解。离心清除细胞碎片后，在570nm波长处测定吸光度。

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神经元细胞培养与细胞毒性[1]
原代皮层或海马神经元的培养如前所述。为了诱导兴奋毒性，用Trisbuffered对照盐（CSS）溶液（120 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 1.8 mMCaCl2, 25 mM Tris-HCl, pH 7.4和15 mM葡萄糖）对细胞进行预洗，并用含有50µM谷氨酸的CSS处理40分钟，然后在常规培养基中恢复4小时。在谷氨酸治疗前15 min和治疗期间给予SC79(4 μg/ml)。用计算机辅助细胞计数显微镜检查谷氨酸暴露4 h后的毒性。用Hoechst （0.5 ng/ml）和碘化丙啶（1 μg/ml）染色，分别测定总细胞和死亡细胞。孵育20 min后，在360 nm荧光显微镜下观察细胞。细胞死亡以死亡总细胞数之比确定，计数1000个细胞。

永久性局灶性脑缺血小鼠模型
0.04 mg/g
腹腔注射

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永久性局灶性脑缺血模型[1]
永久性局灶性脑缺血的建立方法基本如前所述(11)，即通过大脑中动脉闭塞(MCAO)诱导。简而言之，将体重17-25 g的小鼠(C57 Black/6)用4%异氟烷/66% N2O/30% O2麻醉，并用1.5%异氟烷维持麻醉。永久性局灶性缺血的建立方法如下：在左侧卵圆孔上方和外侧钻一个2 mm的孔，以暴露左侧大脑中动脉。使用双极电凝器永久性闭塞左侧大脑中动脉 (MCA) 近端，闭塞段位于豆纹动脉分支起始部远端 1 mm 处。在永久性 MCAO 前 5 分钟，腹腔注射 SC79（0.04 mg/g 小鼠体重）（图 4E）。在另一项实验中，额外注射 SC79（0.04 mg/g 小鼠体重，每小时一次，持续 6 小时）（图 4F）。

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通过免疫组织化学评估脑内 Akt 激活情况 [1]
从心脏心尖用 PBS 灌注小鼠脑组织，并用 4% 多聚甲醛 PBS 溶液进行灌注固定。将组织切片在4%多聚甲醛溶液中于4℃下摇动固定过夜，随后依次在4℃下用10%（2小时）、15%（2小时）、20%（2小时）和25%（过夜）蔗糖PBS溶液进行低温保护。之后将切片包埋于OCT包埋剂中，并迅速用异戊烷冷冻。在低温恒温器上制备10 µm厚的冠状冰冻切片，并保存于-80℃直至使用。将冰冻切片解冻，用PBS洗涤三次，在室温下用0.1% Triton X-100/PBS溶液透化5分钟，然后在5%脱脂奶粉/3% BSA/PBS溶液中封闭60分钟。分别使用抗Akt抗体和抗磷酸化Akt（Ser473）抗体检测总Akt/PKB和磷酸化Akt/PKB。将玻片与一抗（1:200）于4℃孵育过夜，再与二抗于室温孵育2小时，采用ABC法显色。

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本研究使用了28只体重220-250 g的雄性Fischer 344大鼠。它们被随机分为两组，每组14只：（1）MCAO/再灌注组，（2）SC79+MCAO/再灌注组。对于SC79+MCAO/再灌注组，分别在短暂性大脑中动脉（MCA）闭塞前10分钟、再灌注时以及再灌注后1小时，腹腔注射0.05 mg/kg的SC79（溶于5% DMSO生理盐水中）。对于MCAO/再灌注组，在每个注射时间点，均给予相同体积的溶剂。每组8只大鼠用于测定血脑屏障通透性参数，6只大鼠用于测定梗死面积。在另一组大鼠（SC79H + MCAO/再灌注组，n = 6）中，给予十倍剂量的SC79（0.5 mg/kg × 3），以确定梗死面积并验证高剂量SC79对神经元存活的影响。所有大鼠均通过气管插管，使用2%异氟烷/氧气混合气体进行通气，以模拟大脑中动脉闭塞。 [3]

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本动物实验采用雄性、年龄匹配（6～8周龄）的C57BL/6或BALB/c小鼠（中国科学院上海生命科学研究院，上海，中国），体重16～18 g。小鼠饲养于温湿度可控的房间内，自由摄取食物和水。在腹腔注射致死剂量（0.5 mg/kg）的抗Fas Jo2激动剂抗体（C57BL/6小鼠）或致死剂量（0.4 mg/kg）前0.5小时，小鼠腹腔注射10 mg/kg的SC79或二甲基亚砜进行预处理。小鼠IgG用作Jo2的对照。致死剂量攻击后，持续监测小鼠的死亡率。除死亡率分析外，在Jo2注射后不同时间点处死小鼠。采用标准临床全自动生化分析仪（型号7020；日立，京都，日本）测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。采集眼眶后静脉丛血样后，立即采用颈椎脱臼法处死小鼠。切除肝脏组织，切片后置于10%福尔马林溶液中4℃固定过夜，脱水，石蜡包埋，切片厚度为3 mm，并用苏木精-伊红染色进行组织学检查。取出肝组织后，立即用液氮速冻，并保存于-80℃直至分析。[4]

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本研究采用雄性、年龄匹配（6-8周龄）、体重16-18 g的C57BL/6小鼠。小鼠饲养于温湿度控制的房间内，可自由获取食物和水。每组10只小鼠在腹腔注射400 mg/kg d-半乳糖胺（d-Gal）和60 µg/kg LPS（C57BL/6小鼠）前0.5小时，分别腹腔注射10 mg/kg SC79或DMSO进行预处理。PBS作为d-Gal/LPS的对照。注射d-Gal/LPS 12小时后处死小鼠。使用标准临床全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平。采集眼眶后静脉丛血样后，立即采用颈椎脱臼法处死小鼠。切除的肝脏组织切片后，在4℃下用10%福尔马林溶液固定过夜，脱水，石蜡包埋，切片厚度为3 mm，并用苏木精-伊红染色进行组织学检查。提取肝组织后，立即用液氮速冻，并储存在−80°C直至分析。[5]

[1]. Small molecule-induced cytosolic activation of protein kinase Akt rescues ischemia-elicited neuronal death. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jun 26;109(26):10581-10586.

[2]. BRAT1 deficiency causes increased glucose metabolism and mitochondrial malfunction. BMC Cancer. 2014 Jul 29;14:548.

[3]. Activation of Akt by SC79 decreased cerebral infarct in early cerebral ischemia-reperfusion despite increased BBB disruption. Neurosci Lett. 2018 Aug 10;681:78-82.

[4]. A Novel AKT Activator, SC79, Prevents Acute Hepatic Failure Induced by Fas-Mediated Apoptosis of Hepatocytes. Am J Pathol. 2018 May;188(5):1171-1182.

[5]. AKT activator SC79 protects hepatocytes from TNF-α-mediated apoptosis and alleviates d-Gal/LPS-induced liver injury. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2019 Mar 1;316(3):G387-G396.

[6]. Phosphorylation of Akt by SC79 Prevents Iron Accumulation and Ameliorates Early Brain Injury in a Model of Experimental Subarachnoid Hemorrhage. Molecules. 2016 Mar 10;21(3):325.

使用Akt激活剂治疗神经系统疾病的一个注意事项是，Akt信号通路的过度激活可能诱发癌症。然而，通过增强PtdIns P3/Akt信号通路诱发癌症是一个渐进的过程，通常需要数月甚至数年。例如，在髓系特异性PTEN敲除小鼠中，我们在出生后3个月才发现肿瘤。当Akt激活剂用作谷氨酸兴奋性毒性引起的神经元死亡抑制剂时，给药时间通常仅为数天甚至数小时；因此，这种治疗不太可能导致肿瘤发生。有趣的是，最近有报道称，Akt1的激活会降低乳腺上皮细胞的迁移能力，并且Akt1能够阻止类似于转移所需事件的上皮-间质转化。另一项报告显示，在某些急性髓系白血病 (AML) 中，Akt 的激活出人意料地通过抑制 FOXO 来减少白血病细胞的生长，这表明 Akt 激活剂甚至可能用于治疗某些癌症。Akt 也是一种关键酶，参与细胞迁移、免疫细胞激活、胚胎发育、造血和间充质分化以及葡萄糖稳态等其他过程，因此 SC79 可能用于在其他生理和病理情况下调节细胞功能，例如伤口愈合、宿主防御和糖尿病中的血糖控制。例如，SC79 可能对调节 1 型和 2 型糖尿病的血糖调节反应和胰岛素敏感性具有潜在益处。GSK3β 的磷酸化和失活促进糖原合成，从而降低血糖。Akt 介导的 GLUT4 转位介导葡萄糖转运。GSK3β 和 FOXO 也参与糖异生相关基因（如 G6Pase 和 PEPCK4）的表达。在先天免疫中，已有报道指出，使用PTEN抑制剂可通过激活PI3K/Akt通路来增强中性粒细胞功能。SC79可能通过直接激活Akt发挥类似作用。此外，SC79可能还有助于预防心肌梗死，因为心肌梗死中细胞凋亡的获得性抵抗至少部分是由Akt的持续激活介导的。SC79可通过调节eNOS抑制细胞死亡和诱导血管生成，从而在心肌缺血/再灌注损伤、心肌肥大、高血压和血管疾病中发挥广泛的心脏保护作用。[1] 提高Akt激活水平是预防神经系统疾病中进行性神经元死亡的有效临床策略。然而，由于缺乏特异性Akt激活剂，这一努力一直受到阻碍。在此，我们通过基于细胞的高通量化学遗传筛选，鉴定出一种小分子SC79，它能抑制Akt的膜转位，但矛盾的是，它却能在胞质中激活Akt。SC79特异性地结合Akt的PH结构域。与SC79结合的Akt呈现出一种有利于上游蛋白激酶磷酸化的构象。在海马神经元培养系统和缺血性脑卒中小鼠模型中，SC79在胞质中激活Akt足以重现Akt信号通路的主要细胞功能，从而增强神经元存活。因此，SC79是一种独特的特异性Akt激活剂，可用于增强各种生理和病理条件下的Akt活性。[1]

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背景：BRAT1（BRCA1相关ATM激活因子1）与BRCA1、ATM和DNA-PKcs相互作用，并参与DNA损伤反应。然而，根据我们之前的研究结果，BRAT1除了参与DNA损伤反应外，还可能参与细胞生长和凋亡，这提示BRAT1可能存在尚未发现的功能。方法：我们利用RNA干扰技术敲低人BRAT1基因，构建了U2OS、Hela和MDA-MA-231三种癌细胞系的稳定BRAT1敲低株。我们检测了BRAT1敲低株与对照株的细胞生长特性以及体外/体内致瘤能力。为了验证BRAT1缺失是否会导致代谢异常，我们检测了BRAT1敲低株和对照株的糖酵解速率、ATP生成量以及丙酮酸脱氢酶（PDH）活性。 BRAT1在生长信号传导中的作用通过Akt/Erk的激活来确定，并使用Akt激活剂SC79进行验证。结果：利用BRAT1敲低的癌细胞系，我们发现BRAT1表达的缺失显著降低了体外和体内的细胞增殖和致瘤性。当BRAT1缺失时，细胞迁移也显著降低。有趣的是，在BRAT1敲低的HeLa细胞中，葡萄糖摄取和线粒体活性氧（ROS）的产生显著增加。此外，这些细胞中Akt和Erk激酶的基础活性和诱导活性均受到抑制，表明细胞生长信号级联异常。因此，用Akt激活剂处理BRAT1敲低的细胞可以改善其增殖并降低线粒体ROS浓度。[2]

C17H17CLN2O5

364.78

364.082

C, 55.98; H, 4.70; Cl, 9.72; N, 7.68; O, 21.93

305834-79-1

2810830

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

524.8±50.0 °C at 760 mmHg

271.2±30.1 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.564

3.23

112

1

7

7

25

611

0

ClC1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])C([H])(C(C(=O)OC([H])([H])C([H])([H])[H])=C(N([H])[H])O2)C([H])(C#N)C(=O)OC([H])([H])C([H])([H])[H]

DXVKFBGVVRSOLI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H17ClN2O5/c1-3-23-16(21)11(8-19)13-10-7-9(18)5-6-12(10)25-15(20)14(13)17(22)24-4-2/h5-7,11,13H,3-4,20H2,1-2H3

ethyl 2-amino-6-chloro-4-(1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethyl)-4H-chromene-3-carboxylate

SC79; SC-79; 305834-79-1; SC79; ethyl 2-amino-6-chloro-4-(1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethyl)-4H-chromene-3-carboxylate; SC 79; SC-79; 4H-1-Benzopyran-4-acetic acid, 2-amino-6-chloro-alpha-cyano-3-(ethoxycarbonyl)-, ethyl ester; 2-amino-6-chloro-alpha-cyano-3-(ethoxycarbonyl)-4h-1-benzopyran-4-acetic acid ethyl ester; MFCD02681303; SC 79

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 72 mg/mL (~197.4 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: 72 mg/mL (~197.4 mM)

配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (13.71 mM) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 5 中的溶解度: 2% DMSO+corn oil: 5mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。