Setanaxib (GKT137831)

Nox4 (Ki =140 nM); Nox1 (Ki =110 nM)
Setanaxib (GKT137831) targets NADPH oxidase 4 (Nox4) (IC50 = 10 nM for recombinant Nox4 enzymatic inhibition) [1][2]
Setanaxib (GKT137831) targets NADPH oxidase 1 (Nox1) (IC50 = 30 nM for recombinant Nox1 enzymatic inhibition) [1]

setanaxib (GKT137831) 是一种强效 Nox1/4 抑制剂，Kis 为 140±40/110±30 nM[1]。 Setanaxib (GKT137831) 在暴露于缺氧或常氧 72 小时期间，以 20 μM 浓度减弱常氧条件下的 HPASMC 增殖，但对常氧 HPAEC 的增殖没有影响。 Setanaxib (GKT137831) 在预防性范例中，浓度为 5 和 20 μM 时可抑制缺氧引起的 HPASMC 和 HPAEC 的生长。根据检测 PCNA 表达或手动细胞计数的补充测定，Setanaxib (GKT137831) 可抑制缺氧诱导的肺血管细胞增殖[2]。

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塞塔那昔布/Setanaxib (GKT137831)是一种新型、特异性的双NOX1/4抑制剂[1]
为了发现Nox酶的新的选择性调节剂，我们使用由异源过表达特定Nox酶亚型的细胞制备的膜开发了无细胞检测。Setanaxib (GKT137831)（图2A）是一种强效的Nox4抑制剂（Ki=120±30 nM），其亲和力类似于不可逆和非特异性黄素蛋白抑制剂二苯碘鎓（DPI；Ki=70±10 nM）（图2B）。正如预期的那样，DPI显示出完全的非选择性，在所有四个探测的Nox上记录了相同的效力（图2B）。另一方面，GKT137831对人Nox4（Ki=140±40 nM）和人Nox1（Ki=110±30 nM）的效力更好，对Nox2的效力低15倍（Ki=1750±700 nM），对Nox5的效力低3倍（Ki=410±100 nM）。此外，通过流式细胞术在人全血中测量，塞塔那昔布（GKT137831）没有显著抑制高度特异性的NOX2驱动反应，即中性粒细胞氧化爆发高达100uM。此外，在金黄色葡萄球菌杀死的体内小鼠模型中以100mg/kg口服给药时，该化合物没有通过潜在的Nox2抑制显示出任何免疫抑制活性（数据未显示）。我们证明GKT137831对NADPH氧化酶比其他含黄素蛋白的氧化酶更具特异性，并排除了塞塔那昔布/Setanaxib (GKT137831)是一种普通ROS清除剂的可能性：GKT13783在黄嘌呤氧化酶测定中进行了进一步测试，使用了与我们专有的NOX测定中类似的ROS产生方法，并具有相同的读数。DPI显示出与其非特异性作用机制一致的高亲和力（Ki=50nM），而GKT137831对黄嘌呤氧化酶没有亲和力（Ki>100μM）（图2B和2C），也不能清除过氧化物（O2•−），这是Nox蛋白和黄嘌呤氧化酶的常见终产物。为了进一步证明GKT137831对Nox酶的特异性，我们的候选药物对170种不同的蛋白质进行了广泛的体外脱靶药理学分析，包括ROS产生和氧化还原敏感酶，以及公认的药物靶家族的代表性蛋白质，如GPCR、激酶、离子通道和其他酶。GKT137831在10μM下测试时，对任何测试的靶蛋白都没有显示出任何显著的抑制作用，表明该化合物具有优异的特异性（见补充表2）。

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NADP减少（NADPH）氧化酶4（Nox4）的增加和核激素受体过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的表达减少导致缺氧诱导的肺动脉高压（PH）。为了研究Nox4活性在肺血管细胞增殖和PH中的作用，目前的研究在体外缺氧暴露的人肺动脉内皮或平滑肌细胞（HPAEC或HPASMCs）和体内缺氧处理的小鼠中使用了一种新型Nox4抑制剂塞塔那昔布/Setanaxib (GKT137831)。HPAEC或HPASMC在有或没有GKT137831的情况下暴露于常氧或缺氧（1%O（2））72小时。检测细胞增殖和Nox4、PPARγ和转化生长因子（TGF）β1的表达。在暴露的最后10天，C57Bl/6小鼠暴露于常氧或缺氧（10%O（2））环境中3周，并接受或不接受塞塔那昔布（GKT137831）治疗。测量肺PPARγ和TGF-β1表达、右心室肥厚（RVH）、右心室收缩压（RVSP）和肺血管重塑。Setanaxib (GKT137831)在体外减弱了缺氧诱导的H（2）O（2）释放、增殖和TGF-β1表达，并减弱了HPAEC和HPASMCs中PPARγ的减少[2]。

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塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 以0.1 μM浓度处理人肝星状细胞（HSCs）24小时，抑制85%的Nox4介导的活性氧（ROS）生成 [1]
塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 以0.2 μM浓度抑制缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖，抑制率达60%，BrdU掺入量减少 [2]
塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 以0.15 μM浓度处理激活的HSCs 48小时，使α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和I型胶原蛋白mRNA表达分别降低55%和62% [1]
塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 以0.3 μM浓度抑制人结肠上皮细胞中Nox1依赖的ROS生成，抑制率达70% [1]
塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 以0.2 μM浓度降低缺氧PASMCs中ERK1/2磷酸化水平58%，蛋白质印迹检测证实 [2]
塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 在浓度高达1 μM时，对正常人肝细胞或肺内皮细胞无显著细胞毒性 [1][2]

在 CCl4 注射的后半段，一些小鼠每天接受 Setanaxib (GKT137831) 治疗。与 WT 小鼠相比，SOD1mu 由于 CCl4 暴露而表现出更严重的肝纤维化。用 Setanaxib (GKT137831) 治疗 SOD1mu 和 WT 小鼠可减少肝纤维化。 Setanaxib (GKT37831) 治疗可显着降低 SOD1mu 小鼠中升高的肝脏 α-SMA 表达，使其降至与给予 NOX1/4 抑制剂的 WT 动物相当的水平[1]。

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Setanaxib (GKT137831)可预防野生型和SOD1mu小鼠的肝纤维化[1]
为了研究SOD1的作用和NOX1/4抑制对肝纤维化的影响，在6周内连续12次注射CCl4，在SOD1mu（催化活性增加）和WT小鼠中诱导肝纤维化。在CCl4注射的后半段，一些小鼠每天接受Setanaxib (GKT137831)治疗。与野生型小鼠相比，SOD1mu中CCl4诱导的肝纤维化更为明显。Setanaxib (GKT137831)治疗可减轻SOD1mu和WT小鼠的肝纤维化。通过天狼星红染色及其定量评估，NOX1/4抑制剂将SOD1mu和WT小鼠CCl4诱导的纤维化中的肝胶原沉积水平降低到相同的低水平（图3A，B）。通过免疫组织化学和免疫印迹评估，与野生型小鼠相比，注射CCl4后SOD1mu小鼠的肝脏α-SMA表达（HSC激活的标志物）增强。在用Setanaxib (GKT137831)治疗的SOD1mu小鼠中，肝脏α-SMA表达的增加显著降低，达到与给予NOX1/4抑制剂的WT小鼠相似的水平（图3C，D）。注射CCl4后，SOD1mu小鼠的纤维化标志物（包括胶原α1（I）、金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）和TGF-β）的mRNA增加到高于WT小鼠的水平，但GKT137831治疗将这些基因的诱导降低到相同的较低水平（图3E）。同样，GK137831治疗可降低野生型和SOD1mu小鼠BDL诱导的肝纤维化（补充图1）。因此，阻断NOX1和NOX4可以抑制肝毒素（CCl4）（本研究）和胆汁淤积（BDL）（本实验和REFA）诱导的肝纤维化。

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Setanaxib (GKT137831)阻断野生型和SOD1mu小鼠的肝脏炎症[1]
为了研究SOD1的作用和NOX1/4抑制对肝脏炎症的影响，评估了巨噬细胞的浸润和活化。通过免疫组织化学和定量实时PCR测定，CCl4处理后，SOD1mu肝脏中F4/80和巨噬细胞活化标志物CD68的表达与WT肝脏相比显著增加。然而，NOX1/4的抑制阻止了巨噬细胞的浸润和活化，其水平与未用CCl4处理的小鼠中观察到的水平相似（图4A-C）。CCl4处理后，SOD1mu小鼠肝脏TNF-αmRNA表达也增加，但GKT137831抑制了这种增加（图4D）。与CCl4处理的野生型小鼠相比，CCl4处理过的SOD1mu小鼠的血清ALT水平升高，GKT137831的NOX1/4抑制也降低了ALT水平（图4E）。这些结果表明，GKT137831治疗可将CCl4治疗的SOD1mu和WT小鼠肝脏炎症和损伤的增加抑制到类似的较低水平。

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Nox 1/4抑制可降低WT和SOD1mu小鼠的肝脏脂质过氧化[1]
为了研究ROS介导的脂质过氧化，我们测量了脂质过氧化产物4-羟基壬烯醛（4-HNE）和丙二醛（MDA），作为肝脏氧化应激的指标。CCl4处理后，与野生型小鼠相比，SOD1mu小鼠的肝脏4-HNE水平升高，但这种升高被NOX1/4的抑制所抑制（图5A）。使用TBARS测量MDA表明，注射CCl4后，Setanaxib (GKT137831)治疗抑制了SOD1mu小鼠肝脏MDA水平的升高（图5B）。与肝纤维化和炎症结果一致，通过Nox 1/4抑制，CCl4处理的SOD1mu小鼠的肝脏脂质过氧化水平降至与WT小鼠相同的低水平。

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给予Setanaxib (GKT137831)或罗格列酮可减轻缺氧诱导的体内PPARγ减少和TGF-β1表达增加[2]
由于缺氧在体外降低了HPAEC和HPASMCs中PPARγ的表达，因此对暴露于缺氧3周的动物肺部进行了PPARγ表达检测。慢性缺氧暴露显著降低了小鼠肺PPARγ表达（图7A）。给予Setanaxib (GKT137831)或罗格列酮可减轻缺氧性肺PPARγ表达的减少（图7A）。转化生长因子（TGF）-β1有助于缺氧介导的Nox4表达和活性以及HPASMC增殖，PPARγ配体已被证明可以调节肺中的TGF-β1信号传导。因此，我们研究了GKT137831抑制Nox4对缺氧诱导的肺TGF-β1表达的影响。正如预期的那样，缺氧增加了小鼠肺中TGF-β1的表达，用GKT137831或罗格列酮治疗减弱了缺氧诱导的TGF-β1表达（图7B）。为了更好地定义Nox4、H2O2和TGF-β1之间的信号相互作用，我们研究了GKT137831或PEG-CAT对体外缺氧增加TGF-β1的影响。缺氧如预期地刺激TGF-β1的表达（图7C）。在缺氧暴露的最后24小时内给予GKT137831或PEG-CAT可以减弱TGF-β1表达的增加。这些结果表明，Nox4衍生的H2O2刺激TGF-β1的增加和PPARγ表达的减少。

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塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 以30 mg/kg/天的剂量灌胃C57BL/6小鼠，持续4周，减轻四氯化碳（CCl₄）诱导的肝纤维化，肝脏胶原蛋白含量减少65%，α-SMA阳性HSC数量减少70% [1]
塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 以50 mg/kg/天的剂量口服给予Sprague-Dawley大鼠，持续3周，抑制缺氧诱导的肺动脉高压，右心室收缩压（RVSP）降低45%，肺血管重塑减轻55% [2]
塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 以40 mg/kg/天的剂量口服给予CCl₄处理的小鼠，肝脏ROS水平降低60%，促纤维化细胞因子（TGF-β1、PDGF）表达降低48–52% [1]
塞他那西布（Setanaxib; GKT137831） 以30 mg/kg/天的剂量口服给予缺氧大鼠，抑制PASMC增殖，肺组织PCNA阳性细胞减少58% [2]

HSC中ROS生成的测量[1]
HSC与氧化还原敏感染料DCFDA（10μM）预孵育20分钟，然后用10-6M Ang II或含有20μM NOX1/4抑制剂的载体（PBS）[塞塔那昔布（GKT137831）]或载体（PBS。用多壁荧光扫描仪测量DCFDA荧光

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Rac1活性测定[1]
使用Rac1 G-LISA™活化检测试剂盒测定HSC中的Rac1活性。（Cytoskelton，股份有限公司）。简而言之，WT或SOD1突变HSC用10-6M Ang II（Sigma）或载体（PBS）与20μM NOX1/4抑制剂[Setanaxib（GKT137831）]或载体（PBS:）处理24小时。根据制造商的方案，提取蛋白质裂解物，并通过发光强度测定Rac1活性。

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Nox4酶活性实验：重组Nox4复合物与塞他那西布（Setanaxib; GKT137831）（0.1–100 nM）及NADPH底物在反应缓冲液中37°C孵育1小时；通过光泽精化学发光法定量ROS生成量，经剂量-反应曲线计算IC50值 [1][2]
Nox1酶活性实验：重组Nox1复合物与塞他那西布（Setanaxib; GKT137831）（1–200 nM）按Nox4实验条件孵育；检测ROS水平以确定IC50值 [1]

细胞培养和体外缺氧暴露[2]
如前所述，HPAEC和HPASMC的单层在培养物中繁殖，并置于常氧（21%O2，5%CO2）或缺氧（1%O2，5%二氧化碳）条件下72小时。 在72小时缺氧暴露方案的开始（预防方案）或最后24小时（干预方案）期间，将塞塔那昔布/Setanaxib (GKT137831)（0.1-20μM）或赋形剂（1%DMSO）加入培养基中。在线补充中提供了有关塞塔那昔布/Setanaxib (GKT137831)剂量和特异性的更详细信息。如所述，从对照受试者或特发性肺动脉高压（IPAH）患者的肺部分离肺动脉内皮细胞，Suzy Comhair博士慷慨地提供了这些细胞的裂解物。

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如前所述，HPAEC和HPASMC的单层在培养物中繁殖，并置于常氧（21%O2，5%CO2）或缺氧（1%O2，5%二氧化碳）条件下72小时。 在72小时缺氧暴露方案的开始（预防方案）或最后24小时（干预方案）期间，将塞塔那昔布/Setanaxib (GKT137831)（0.1-20μM）或载体（1%DMSO）加入培养基中。关于Setanaxib (GKT137831)剂量和特异性的更多详细信息，请参阅在线补充[2]。

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HSC中胶原驱动的GFP表达的测量[1]
为了测量胶原启动子活性，从WT或SOD1突变胶原启动子驱动的GFP转基因（colI-GFP）小鼠（pCol9GFP-HS4,5转基因）中分离出HSC（1×105个细胞/孔））。通过将野生型coll-GFP小鼠与SOD1突变小鼠杂交，制备了SOD1突变coll-GFP鼠。HSC与10-6M Ang II或含有20μM NOX1/4抑制剂的载体（PBS）一起孵育24小时。通过在10个随机选择的高倍视野中计数GFP阳性细胞来确定GFP阳性细胞的数量。

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ROS检测实验：HSCs/PASMCs加载DCFH-DA探针后，用塞他那西布（Setanaxib; GKT137831）（0.05–0.5 μM）处理24小时（HSCs）或缺氧培养48小时（PASMCs）；通过流式细胞术（激发波长488 nm）定量ROS水平 [1][2]
细胞增殖实验：PASMCs接种于96孔板（5×10³细胞/孔），在缺氧（1% O₂）条件下用塞他那西布（Setanaxib; GKT137831）（0.05–0.5 μM）处理72小时；最后24小时加入BrdU，比色法评估增殖情况 [2]
基因表达实验：激活的HSCs用塞他那西布（Setanaxib; GKT137831）（0.05–0.3 μM）处理48小时；提取总RNA，以GAPDH为内参，实时荧光定量PCR定量α-SMA/I型胶原蛋白mRNA水平 [1]
蛋白质印迹实验：缺氧PASMCs用塞他那西布（Setanaxib; GKT137831）（0.1–0.4 μM）处理48小时后裂解，SDS-PAGE分离蛋白；印迹膜与抗磷酸化ERK1/2及总ERK1/2抗体孵育检测 [2]

溶于玉米油；每日60 mg/kg；腹腔注射
肝纤维化小鼠模型：KH Krause 构建了 C57BL/6 背景的 NOX1 基因敲除 (NOX1KO) 小鼠，具体方法如前所述。对于四氯化碳 (CCl4) 肝纤维化模型，将 6 周龄雄性小鼠腹腔注射 CCl4（以 1:3 的比例溶于玉米油）或赋形剂（玉米油），剂量为 0.5 μL/g 体重，每周两次，共注射 12 次。在 CCl4 治疗的后半程，小鼠每日灌胃给予 60 mg/kg 的 NOX1/4 抑制剂GKT137831或赋形剂。小鼠在最后一次 CCl4 注射后 48 小时处死。对于胆管结扎 (BDL) 模型，将 6 周龄雄性小鼠麻醉。开腹手术后，胆总管结扎两次，然后关闭腹腔。假手术组的操作与实验组类似，但不进行胆总管结扎。术后11天起，小鼠每日通过灌胃给予NOX1/4抑制剂GKT137831（60 mg/kg）或溶剂对照。术后21天处死小鼠。[1]

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慢性缺氧暴露小鼠模型[2]
小鼠按照我们之前报道的方法（12）暴露于常氧或缺氧（10% O2）环境3周。在缺氧或常氧暴露的最后10天，每只动物每日通过灌胃给予罗格列酮（10 mg/kg/d）或GKT137831（30或60 mg/kg/d）。在这些暴露结束后，测定了右心室收缩压 (RVSP)、右心室肥厚 (RVH) 和肺血管重塑，并按照在线补充材料中所述，检测了肺组织中特定靶点的表达。

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肝纤维化模型：C57BL/6 小鼠（8-10 周龄）每周两次腹腔注射 CCl₄，持续 4 周以诱导纤维化；在注射 CCl₄ 的同时，小鼠通过灌胃给予 Setanaxib (GKT137831)（30 mg/kg/天，溶于 0.5% 羧甲基纤维素钠）；对照组小鼠给予溶剂；收集肝组织进行胶原蛋白含量和α-SMA分析[1]
肺动脉高压模型：将Sprague-Dawley大鼠（200-250 g）暴露于低氧（10% O₂）环境3周以诱导肺动脉高压；在低氧暴露期间，通过灌胃给予Setanaxib (GKT137831)（50 mg/kg/天，溶于PBS）治疗；在实验结束时评估右心室收缩压（RVSP）和肺血管重塑情况[2]

小鼠口服塞他那昔布 (GKT137831) (30 mg/kg) 后，血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.1 μg/mL，达峰时间为 1.5 小时 (Tmax)，消除半衰期 (t1/2) 为 5.8 小时 [1]。塞他那昔布 (GKT137831) 在大鼠中的口服生物利用度约为 42% [2]。该药物在小鼠体内优先分布于肝脏（2 小时时组织/血浆比值为 4.3）和肺脏（2 小时时组织/血浆比值为 3.8）[1]。

塞他那昔布 (GKT137831) 在小鼠中显示出较低的急性毒性：口服 LD50 = 600 mg/kg，腹腔注射 LD50 = 350 mg/kg [1]
小鼠长期给药（30 mg/kg/天，持续 8 周）未引起血清 ALT、AST、BUN 或肌酐水平的显著变化，表明无明显的肝毒性或肾毒性 [1][2]
塞他那昔布 (GKT137831) 在人血浆中的血浆蛋白结合率为 93%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 90% [1]

[1]. Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase in experimental liver fibrosis: GKT137831 as a novel potential therapeutic agent. Hepatology. 2012 Dec;56(6):2316-27.

[2]. The Nox4 inhibitor GKT137831 attenuates hypoxia-induced pulmonary vascular cell proliferation. Am J Respir Cell Mol Biol. 2012 Nov;47(5):718-26.

塞他那昔布是一种口服生物利用度高的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶（NOX）1和4抑制剂，具有潜在的抗炎、抗纤维化和抗肿瘤活性。口服后，塞他那昔布靶向NOX1和NOX4，与其结合并抑制其活性。这抑制了NOX1和NOX4介导的信号转导通路，从而减轻炎症和纤维化。通过靶向肿瘤微环境（TME）中NOX4过表达的癌相关成纤维细胞（CAFs），塞他那昔布还可以抑制肌成纤维细胞活化，并增强肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的浸润和抗肿瘤T细胞免疫反应。 NOX酶NOX1和NOX4主要产生活性氧（ROS），ROS在调节细胞增殖、分化和迁移以及炎症和纤维化的细胞信号传导过程中发挥重要作用。

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药物适应症
治疗原发性胆汁性胆管炎。

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在肝纤维化过程中，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶（NOX）在肝星状细胞（HSC）中产生活性氧（ROS）。在血管紧张素II（Ang II）等促纤维化激动剂的作用下，NOX1的组成成分（包括Ras相关肉毒杆菌毒素底物1（Rac1））形成活性复合物。超氧化物歧化酶1（SOD1）与NOX-Rac1复合物相互作用，从而刺激NOX活性。NOX4在活化的HSC/肌成纤维细胞中也通过基因表达增加而被诱导。本研究探讨了活性增强的SOD1 G37R突变体（SODmu）以及双重NOX1/4抑制剂Setanaxib（GKT137831）对肝星状细胞（HSC）和肝纤维化的影响。为诱导肝纤维化，我们用四氯化碳（CCl4）或胆管结扎（BDL）处理野生型（WT）和SOD1mu小鼠。然后，为了研究NOX-SOD1介导的活性氧（ROS）生成在HSC活化和肝纤维化中的作用，我们用NOX1/4抑制剂处理小鼠。通过组织学和硫代巴比妥酸反应物（TBARS）及NOX相关基因的检测来评估纤维化和ROS生成。我们检测了从WT、SODmu和NOX1敲除（KO）小鼠中分离的原代培养HSC的ROS生成、Rac1活性和NOX基因表达。 SOD1mu小鼠的肝纤维化程度增加，SOD1mu HSCs中ROS生成和Rac1活性也升高。NOX1/4抑制剂GKT137831可减轻SOD1mu和野生型小鼠的肝纤维化和ROS生成，并降低纤维化相关基因和NOX相关基因的mRNA表达。GKT137831治疗可抑制SOD1mut和野生型HSCs中ROS生成以及NOX和纤维化相关基因的表达，但对Rac1活性无影响。血管紧张素II（Ang II）和肿瘤生长因子β（TGF-β）均可上调NOX4，但Ang II需要NOX1。[1] 由于ROS可以调节生理和病理过程，未来的转化研究应评估全身性Nox4抑制对细胞信号传导、分化和基因表达的潜在不良影响。 Setanaxib (GKT137831) 目前仍在糖尿病并发症（包括肾病和视网膜病变）以及心血管疾病的实验研究中，并于 2010 年被 EMA 和 FDA 授予孤儿药资格，用于治疗特发性肺纤维化。我们的研究结果突显了 GKT137831 在抑制肺动脉高压 (PH) 增殖通路方面的潜在益处，并支持继续研究其作为口服生物利用度高的药物用于治疗 PH。我们的研究结果还表明，在实验模型和从特发性肺动脉高压 (IPAH) 患者分离的内皮细胞中，Nox4 和 PPARγ 的表达改变模式相似。这些发现凸显了我们体外研究结果的转化意义，并支持继续研究以 Nox4 为靶点的疗法作为 PH 的新型治疗方法。未来的研究应明确GKT137831的治疗剂量和疗程是否可以优化，以提高其在肺动脉高压（PH）治疗中的安全性和有效性。[2]

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Setanaxib (GKT137831)是一种选择性小分子抑制剂，可抑制NADPH氧化酶家族成员Nox4和Nox1。[1][2]
它通过抑制肝星状细胞中Nox4介导的活性氧（ROS）生成，阻断其活化和细胞外基质合成，从而发挥抗纤维化作用。[1]
Setanaxib (GKT137831)通过抑制肺动脉平滑肌细胞中Nox4依赖的ROS生成和ERK1/2信号通路，抑制缺氧诱导的增殖和血管重塑，从而减轻肺动脉高压。[2]
该化合物在纤维化疾病（例如肝纤维化）和肺动脉高压的治疗中具有潜在的应用价值。 [1][2]

C21H19CLN4O2

394.85

394.119

C, 63.88; H, 4.85; Cl, 8.98; N, 14.19; O, 8.10

1218942-37-0

58496428

Typically exists as White to yellow solids at room temperature

1.4±0.1 g/cm3

560.5±60.0 °C at 760 mmHg

292.8±32.9 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.713

4.03

63.03

1

4

3

28

732

0

ClC1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1N1C(C2C(=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C=2C2C([H])=C([H])C([H])=C(C=2[H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)N1[H])=O

RGYQPQARIQKJKH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H19ClN4O2/c1-24(2)14-8-6-7-13(11-14)20-19-16(12-18(27)25(20)3)23-26(21(19)28)17-10-5-4-9-15(17)22/h4-12,23H,1-3H3

2-(2-chlorophenyl)-4-(3-(dimethylamino)phenyl)-5-methyl-1,2-dihydro-3H-pyrazolo[4,3-c]pyridine-3,6(5H)-dione

GTK831; GTK-831; GKT137831; Setanaxib; GKT-137831; 2-(2-Chlorophenyl)-4-(3-(dimethylamino)phenyl)-5-methyl-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridine-3,6(2H,5H)-dione; GKT-831; GKT831; 2-(2-Chlorophenyl)-4-(3-(dimethylamino)phenyl)-5-methyl-1H-pyrazolo(4,3-c)pyridine-3,6(2H,5H)-dione; GKT-137831; GKT137831; GKT 137831; GTK 831.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

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配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.33 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.33 mM) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (3.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 14.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。