SGX-523

c-Met (IC50 = 4 nM)

体外活性：SGX-523 属于 c-Met/肝细胞生长因子受体 (HGFR) 酪氨酸激酶抑制剂类。 SGX-523 将 MET 稳定在其他蛋白激酶无法接近的独特非活性构象中，这解释了其选择性。 SGX523 有效抑制纯化的 MET 催化结构域，但不抑制密切相关的受体酪氨酸激酶 RON。 SGX523 表明 ATP 竞争性抑制，与活性较高的磷酸酶 [MET-KD(3P)，与活性较低的非磷酸化形式的 MET [MET-KD(0P)，Ki 为 2.7 nM] 相比，具有更高的表观亲和力。 Ki 为 23 nM]，这种现象与优先结合非活性酶构象一致。 SGX523 在纳摩尔浓度下抑制 MET 介导的信号传导、细胞增殖和细胞迁移，但对依赖于其他蛋白激酶（包括密切相关的 RON）的信号传导没有影响，即使在微摩尔浓度下也是如此。激酶测定：初始速率常数在 21 °C 下测量，存在 100 mM HEPES (pH 7.5)、0.3 mg/mL 聚 (Glu-Tyr) 肽底物、10 mM MgCl2、1 mg/mL 牛血清白蛋白、5 % DMSO、20 nM MET-KD 以及不同浓度的 ATP 和 SGX523。用 20 μL Kinase-Glo 检测缓冲液淬灭总反应体积 (20 μL)。在读板光度计中检测发光，并通过非线性回归分析结果。细胞测定：将 MDCK 细胞按每孔 1 × 103 接种到 24 孔板中，并在 37 °C、5% CO2 和 MEM 和 10% 胎牛血清中孵育 1 周。添加 HGF (90 ng/mL) 和不同浓度的 SGX523，将细胞再孵育 18 小时（37 °C，5% CO2 湿润培养箱）并观察。将 A549 细胞铺板于 12 孔板（每孔 6 × 104）中并孵育至汇合以研究细胞迁移。通过用移液器尖端刮擦将通道引入单层中。在存在和不存在HGF (90 ng/mL)的情况下将化合物的各种稀释度添加到饥饿培养基中。24小时后检查孔的细胞迁移。

当每天两次口服剂量≥10 mg/kg 时，SGX523 显着延缓预先形成的 GTL16 肿瘤的生长。 SGX523 有效抑制 U87MG 肿瘤生长；每日两次以 30 mg/kg 剂量给药时，SGX523 可使 U87MG 肿瘤明显消退。 SGX523，每日两次，剂量为 30 mg/kg，也能延缓 H441 肿瘤的生长，同时降低肿瘤 MET 自磷酸化水平。 SGX523 在体内对 MET 的抑制与对源自人胶质母细胞瘤、肺癌和胃癌的肿瘤异种移植物生长的剂量依赖性抑制相关，证实了这些肿瘤对 MET 催化活性的依赖性。

存在 100 mM HEPES (pH 7.5)、0.3 mg/mL 聚 (Glu-Tyr) 肽底物、10 mM MgCl₂、1 mg/mL 牛血清白蛋白、5% DMSO、20 nM MET-KD 以及不同浓度的 ATP 和 SGX523，初始速率常数在 21 °C 下测量。激酶-Glo 检测缓冲液 (20 μL) 用于淬灭整个反应体积 (20 μL)。使用读板光度计来检测光度，并使用非线性回归来分析数据。

在 24 孔板中，每孔接种 1 × 10³ MDCK 细胞，并在 37 °C、5% CO₂（MEM 溶液）和 10%胎牛血清。添加不同浓度的SGX523和HGF (90 ng/mL)后，将细胞在37°C、5% CO₂的加湿培养箱中再培养18小时，然后进行观察。为了研究细胞迁移，将 A549 细胞置于 12 孔板中（每孔 6 × 10⁴）并孵育直至汇合。使用移液器尖端，通过刮擦单层来创建通道。将化合物以不同的稀释度添加到含有和不含 HGF (90 ng/mL) 的饥饿培养基中。二十四小时后，检查孔中的细胞迁移。

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免疫印迹分析[1]
GTL16细胞在添加10%胎牛血清的RPMI中生长。A549、U87MG和H441细胞在DMEM和10%胎牛血清中生长。细胞（1 × 106）与不同浓度的SGX523孵育1小时，然后用裂解缓冲液加蛋白酶抑制剂处理。如有需要，在最后10分钟的孵育中加入90 ng/mL的HGF或在最后30分钟的孵育中加入150 ng/mL的巨噬细胞刺激蛋白。在4% ~ 20%梯度凝胶（80 μg/lane）上通过SDS-PAGE分离蛋白质，采用标准半干印迹技术将蛋白质转移到硝化纤维素膜上。磷酸化的信号分子通过磷酸化- met （Tyr1234/1235）、磷酸化-细胞外信号调节激酶（Thr202/Tyr204）、磷酸化- akt （Ser473）、磷酸化- stat3 （Tyr705）或磷酸化- gab1 （Tyr627）的抗体和辣根过氧化物酶偶联的二抗进行检测。定量磷酸化条带的强度，并通过s型剂量-响应非线性回归分析（GraphPad Prism 5软件）确定IC50值[1]。

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分散和迁移分析[1]
为了检测SGX523对hgf诱导的细胞散射的影响，我们将MDCK细胞以每孔1 × 103的比例在24孔板中进行细胞培养，在5% CO2中37℃、MEM和10%胎牛血清中孵育1周。加入HGF （90 ng/mL）和不同浓度的SGX523，在37℃，5% CO2加湿培养箱中孵育18 h并观察。为了研究细胞迁移，将A549细胞置于12孔板中（每孔6 × 104），孵育至汇合。通过用移液管尖端刮擦，将通道引入单层。在饥饿培养基中加入不同稀释度的化合物，在HGF存在和不存在的情况下（90 ng/mL）。24小时后，检查井中细胞迁移情况。细胞染色和可视化如所述。

GTL16, U87, or H441 xenografts in Harlan nude mice
60 mg/kg
Oral gavage

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In vivo Studies[1]
Female Harlan nude mice (athymic nu/nu) were s.c. implanted with GTL16, U87, or H441 cells. When tumors had reached ∼150 mm3, SGX523 was administered at various dose regimens by oral gavage. Intratumoral inhibition of MET signaling was determined by measuring average levels of phospho-MET in GTL16 tumors at various time points after the last dose by Western blot analysis. In vivo experiments were conducted at Explora BioLabs in accordance with the requirements for the procurement, housing, care, and use of animals as set forth in the NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals in Research (revised 1996), the U.S. Department of Agriculture, and the Animal Welfare Act (Public Law: 89-544, 91-579, 91-279 9 CFR parts 1-3).[1]

[1]. SGX523 is an exquisitely selective, ATP-competitive inhibitor of the MET receptor tyrosine kinase with antitumor activity in vivo. Mol Cancer Ther, 2009, 8(12), 3181-3190.

SGX-523 is a member of the class of triazolopyridazines that is 6-(1-methylpyrazol-4-yl)[1,2,4]triazolo[4,3-b]pyridazine-3-thiol in which the thiol hydrogen is replaced by a quinolin-6-yl group. It has a role as a c-Met tyrosine kinase inhibitor and a nephrotoxic agent. It is a member of quinolines, a triazolopyridazine, a member of pyrazoles, a biaryl and an aryl sulfide.
A MET receptor tyrosine kinase inhibitor.
MET Tyrosine Kinase Inhibitor SGX523 is an orally bioavailable small molecule, c-Met inhibitor with potential antineoplastic activity. MET receptor tyrosine kinase inhibitor SGX523 specifically binds to c-Met protein, or hepatocyte growth factor receptor (HGFR), preventing binding of hepatocyte growth factor (HGF) and disrupting the MET signaling pathway; this agent may induce cell death in tumor cells expressing c-Met. c-Met, a receptor tyrosine kinase overexpressed or mutated in many tumor cell types, plays an important role in tumor cell proliferation, survival, invasion, and metastasis, and in tumor angiogenesis.

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Drug Indication
Investigated for use/treatment in solid tumors and cancer/tumors (unspecified).

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Mechanism of Action
SGX523 is selective inhibitor of the receptor tyrosine kinase MET. MET is implicated in development and progression of cancer. SGX523 ihibits MET autophosphorylation and signalling, as well as activates cysteine-aspartic acid protease 3 (caspase 3), an enzyme which is part of the apoptosis signalling cascade.

C18H13N7S

359.41

359.095

C, 60.15; H, 3.65; N, 27.28; S, 8.92

1022150-57-7

24779724

Light yellow to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.817

2.73

99.09

0

6

3

26

494

0

S(C1C([H])=C([H])C2=C(C([H])=C([H])C([H])=N2)C=1[H])C1=NN=C2C([H])=C([H])C(C3C([H])=NN(C([H])([H])[H])C=3[H])=NN21

BCZUAADEACICHN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H13N7S/c1-24-11-13(10-20-24)16-6-7-17-21-22-18(25(17)23-16)26-14-4-5-15-12(9-14)3-2-8-19-15/h2-11H,1H3

6-[[6-(1-methylpyrazol-4-yl)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]pyridazin-3-yl]sulfanyl]quinoline

SGX-523; SGX 523; 6-(6-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]pyridazin-3-ylthio)quinoline; 6-((6-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-[1,2,4]triazolo[4,3-b]pyridazin-3-yl)thio)quinoline; WH8SQN09KJ; CHEMBL1236107; SGX523

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

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