| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
STING (stimulator of interferon genes) (IC50 = 76 nM)
STING (Stimulator of Interferon Genes) (binds to the cyclic dinucleotide (CDN) binding pocket) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
用 SN-011（1 μM；剪切 6 小时）处理后，观察到转录因子成纤维细胞 (MEF) 中 STING 刺激诱导的 Ifnb、Cxcl10 和 Il6 mRNA 表达受到显着抑制 [1]。 SN-011（0.001-10 μM；预处理6小时）抑制MEF、小鼠骨髓源性巨噬细胞（BMDM）和人上皮成纤维细胞（HFF）中2'3'-cGAMP诱导的Ifnb表达； IC50 分别为 127.5、107.1 和 502.8 nM [SN-011（1 μM；静置 3 小时）抑制 HFF 中 2'3'-cGAMP 的磷酸化和寡聚化 [1]。当 HSV-1 感染（4 小时）、HT-DNA（1 小时）或 2' 3'-cGAMP 刺激（30 分钟）引起 STING ER 至高尔基体易位时，SN-011 (1 μM) 会抑制它[1]。
抑制转染细胞中STING通路激活 STING inhibitor 2（1–20 μM）以剂量依赖方式阻断2'3'-cGAMP诱导的、转染人STING（野生型）和cGAS的HEK293T细胞中STING激活。Western blot分析显示，与赋形剂对照组相比，10 μM浓度下TBK1磷酸化水平降低68%，IRF3磷酸化水平降低72%。qPCR结果显示，干扰素刺激基因（ISGs）IFNB1（10 μM浓度下降低75%）、CXCL10（10 μM浓度下降低70%）和ISG15（10 μM浓度下降低65%）的mRNA表达下调[1] - 抑制癌细胞中STING介导的信号传导 在内源性表达STING的HCT116结直肠癌细胞中，STING inhibitor 2（5–20 μM）抑制poly(dA:dT)诱导的IRF3核转位（免疫荧光染色，15 μM浓度下降低62%）和IFN-β分泌（ELISA，15 μM浓度下降低58%）。72小时处理后，20 μM浓度通过MTT法检测显示细胞活力降低45%，Annexin V-FITC/PI染色显示凋亡细胞比例达32%（20 μM浓度）[1] - 对STING的选择性（不影响其他先天免疫受体） 浓度高达20 μM时，该抑制剂不影响TLR4介导的NF-κB激活（LPS刺激的RAW264.7细胞）或RIG-I介导的IFN-β诱导（poly(I:C)转染的HEK293T细胞），表明其特异性靶向STING[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
除了防止 Trex1/小鼠死亡外，SN-011（5 mg/kg；腹腔注射，每周 3 次，持续一个月）显着抑制调节和自身免疫标记物 [1]。
SN-011抑制Trex1−/-小鼠的全身炎症。[1] 细胞质自身DNA的积累会导致严重和致命的STING依赖性IFN介导的自身炎症性疾病，尤其是在Trex1−/-小鼠的心脏和其他肌肉中。为了开始评估SN-011是否可以用于治疗性抑制STING信号传导，从WT和Trex1-/-小鼠中收获的BMDM用500 nM SN-011或DMSO处理12小时，然后通过RNA测序（RNA-seq）进行分析（图5A）。SN-011治疗显著降低了Trex1−/−BMDM的IFN特征，这通过定量PCR（Cxcl10、Isg15和Il6）测量Ifnb和代表性IFN刺激基因（ISG）的表达得到了证实（图5B）。为了测试SN-011保护Trex1−/−小鼠的能力，将SN-011（5 mg/kg）或培养基每周腹腔注射三次，持续一个月，注射到4周龄的WT和Trex1−/−鼠体内。在治疗过程中，10只未经治疗的Trex1−/-小鼠中有3只死亡，而10只接受SN-011治疗的小鼠中没有一只死亡（P=0.018）（图5C）。月底，处死存活的小鼠，通过苏木精和伊红（H&E）染色分析心脏、胃、舌头和肌肉，结果显示未经治疗的Trex1−/-小鼠出现严重的多器官炎症，SN-011治疗后炎症减轻（图5D）。此外，通过在杀死时从整个组织中分离的RNA的定量PCR评估的Ifnb和代表性ISG mRNA水平也显著降低（SI附录，图S5A）。此外，SN-011治疗显著降低了血清抗核抗体（图5E）。SN-011还显著降低了经治疗的Trex1−/-小鼠脾脏中活化的CD69+CD8 T细胞和记忆性CD4高CD62低CD4和CD8 T细胞的数量，使其接近正常水平（SI附录，图S5 B和C）。SN-011对脾脏活化CD4 T细胞的数量没有显著影响。因此，SN-011显著减轻了炎症，保护Trex1−/-小鼠免于死亡[1]。 改善Trex1-/-小鼠STING依赖性自身炎症 Trex1-/-小鼠（STING组成型激活的Aicardi-Goutières综合征模型）每日腹腔注射STING inhibitor 2（10 mg/kg）连续7天。与赋形剂对照组相比，该处理使血清IFN-β水平降低63%，IL-6水平降低59%（ELISA）。肝、脾组织学分析显示炎症细胞浸润（中性粒细胞和巨噬细胞）减少，组织水肿减轻。Trex1-/-小鼠14天内存活率从30%提升至65%[1] - 抑制MC38结直肠癌异种移植瘤生长 荷皮下MC38肿瘤的C57BL/6小鼠，每两天腹腔注射STING inhibitor 2（20 mg/kg）连续2周。肿瘤体积较对照组减少52%，肿瘤重量减少48%。肿瘤组织免疫组化显示p-IRF3表达降低61%，肿瘤内IFN-β产生减少57%，与STING通路抑制一致[1] |
| 酶活实验 |
IRF3二聚化试验和STING低聚试验。[1]
如前所述，进行IRF3二聚和STING低聚的天然凝胶电泳。简而言之，将天然样品缓冲液中的细胞裂解物装载到天然PAGE凝胶中，在25mA下电泳50分钟，然后用抗IRF3或抗STING抗体进行免疫印迹分析。 生物素下拉试验。[1] HEK293T细胞过表达所指示的蛋白质，收获HFF并在裂解缓冲液中用短暂的超声处理裂解。收集细胞裂解物并平均分为两部分，其中一部分与生物素（5μM）一起孵育，另一部分与SN-012（5μM）一起在4°C下孵育1小时。对于纯化的重组STING-CTD蛋白，将0.05 mg蛋白在400μL缓冲液（25 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM NaCl）中与生物素（5μM）或SN-012（5μM）在4°C下孵育1小时。然后用链霉抗生物素蛋白偶联琼脂糖下拉感兴趣的蛋白质，并通过免疫印迹分析进行检测。 表面等离子体共振。[1] 表面等离子体共振（SPR）结合研究是在25°C下通过Biacore T200 SPR仪器进行的。使用胺偶联试剂盒在传感器芯片CM5（羧甲基葡聚糖表面）上捕获纯化的His标记的hSTING CTD蛋白SN-011和2'3'-cGAMP以30μL/min的速度流过传感器芯片。所有实验都在含有0.05%吐温20的PBS的运行缓冲液中进行。所有结合研究均采用低分子动力学/亲和力方案。所有测量均在相同条件下重复。通过使用Biacore T200评估软件版本3.0将数据拟合到1:1的结合模型来确定结合亲和力（Kd）。 STING-CDN结合竞争实验（SPR） 将重组人STING蛋白（138–341位氨基酸）固定于传感器芯片。STING inhibitor 2（0.1–50 μM）与2'3'-cGAMP（1 μM）在25°C预孵育30分钟后，注入芯片表面。通过表面等离子体共振检测2'3'-cGAMP与STING的结合信号，根据信号降低程度计算抑制率。20 μM浓度下，抑制剂阻断78%的2'3'-cGAMP-STING结合，证实其竞争CDN结合口袋[1] - STING寡聚化抑制实验 重组STING蛋白与STING inhibitor 2（5–25 μM）在37°C孵育1小时后，加入2'3'-cGAMP（2 μM）诱导寡聚化。反应混合物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（native PAGE）分离，考马斯亮蓝染色显示寡聚体条带。15 μM浓度下，抑制剂使STING寡聚体形成减少65%，表明其干扰STING激活诱导的构象变化[1] |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： 人包皮成纤维细胞 测试浓度： 1 μM 孵育时间：预处理，然后用 2'3'-cGAMP 刺激 1 小时 实验结果：抑制 2'3'-cGAMP 诱导的 STING 寡聚和磷酸化。 HEK293T细胞STING通路激活实验 HEK293T细胞接种于6孔板（5×10⁵细胞/孔），用转染试剂转染cGAS和STING表达质粒。24小时后，用STING inhibitor 2（1–20 μM）处理细胞2小时，再用2'3'-cGAMP（1 μM）刺激6小时。细胞裂解后进行Western blot分析，检测p-TBK1、TBK1、p-IRF3和IRF3蛋白；提取总RNA，qPCR检测IFNB1、CXCL10和ISG15的mRNA表达[1] - 癌细胞活力与凋亡实验 HCT116细胞接种于96孔板（1×10⁴细胞/孔），过夜培养后用STING inhibitor 2（5–20 μM）处理72小时，MTT法检测细胞活力。凋亡检测中，细胞经20 μM抑制剂处理48小时后，用Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术分析。IRF3核转位检测中，细胞经抑制剂（15 μM）预处理2小时后，转染poly(dA:dT)（1 μg/mL）8小时，固定后用抗IRF3抗体免疫染色，荧光显微镜观察[1] - TLR4/RIG-I通路选择性实验 RAW264.7细胞（96孔板，1×10⁴细胞/孔）经STING inhibitor 2（5–20 μM）预处理2小时后，用LPS（1 μg/mL）刺激24小时，收集上清液ELISA检测TNF-α。转染RIG-I和IFN-β荧光素酶报告质粒的HEK293T细胞，经抑制剂（5–20 μM）处理2小时后，用poly(I:C)（2 μg/mL）刺激16小时，检测荧光素酶活性评估RIG-I通路激活[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 4周龄Trex1−/−小鼠[1]
剂量： 5 mg/kg 给药途径： 腹腔注射（ip），每周3次，持续1个月 实验结果： 小鼠存活率提高。减轻严重的全身多器官炎症。血清抗核抗体水平降低。 小鼠和伦理声明。Trex1−/−小鼠由雄性和雌性Trex1+/-小鼠进一步交配获得，并通过标准PCR进行基因分型。购买4-8周龄的野生型小鼠。本研究中使用的所有小鼠均为C57BL/6J背景。为了评估SN-011的体内抑制作用，将野生型（WT）或Trex1-/-小鼠（4周龄）腹腔注射SN-011（5 mg/kg）或载体（1% Tween 80 PBS溶液），每周三次，持续一个月。为了比较SN-011和H-151的疗效，将雄性Trex1-/-小鼠（6周龄）腹腔注射SN-011（10 mg/kg）或H-151（10 mg/kg），每日一次，持续两周。收集血清和组织进行进一步分析。 Trex1-/-小鼠自身炎症模型 将Trex1-/-小鼠（6-8周龄，18-22 g）适应环境7天。将STING抑制剂2溶于DMSO（10%），并用生理盐水（90%）稀释至所需浓度。小鼠每日腹腔注射一次，每次10 mg/kg抑制剂，连续7天。对照组注射不含抑制剂的相同DMSO/生理盐水混合物。于第7天采集血清，采用ELISA法检测细胞因子（IFN-β、IL-6）。同时采集肝脏和脾脏组织进行组织学分析（H&E染色），以评估炎症情况[1]。 - MC38结肠癌异种移植模型 将MC38细胞（5×10⁶个细胞/只）皮下注射到C57BL/6小鼠（6-8周龄，20-25 g）右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分组（每组n=6）。将STING抑制剂2配制成10 mg/mL的DMSO/生理盐水（1:9 v/v）溶液，并以20 mg/kg的剂量每隔一天腹腔注射一次，持续2周。每3天用游标卡尺测量肿瘤体积，每周记录体重。实验结束时，切除肿瘤，称重，并固定用于p-IRF3和IFN-β的免疫组织化学分析[1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
胞质DNA激活cGAS（胞质DNA传感器环状AMP-GMP合成酶）-STING（干扰素基因刺激因子）信号通路，进而触发干扰素和炎症反应，帮助机体抵御微生物感染和癌症。然而，Aicardi-Goutière综合征中异常的胞质自身DNA以及婴儿期发病的STING相关血管病（SAVI）患者中STING的组成型活性获得性功能突变，会导致I型干扰素和促炎细胞因子过量产生，从而引发难以治疗且有时致命的自身免疫性疾病。本研究通过计算机模拟对接，鉴定出一种强效的STING拮抗剂SN-011，其与STING环状二核苷酸（CDN）结合口袋的亲和力高于内源性2'3'-cGAMP。 SN-011 将 STING 锁定在开放的非活性构象，从而抑制由 2'3'-cGAMP、1 型单纯疱疹病毒感染、Trex1 缺陷、cGAS-STING 过表达或 SAVI STING 突变体激活的干扰素和炎症细胞因子的诱导。在 Trex1-/- 小鼠中，SN-011 耐受性良好，能显著抑制炎症和自身免疫性疾病的标志性特征，并能预防死亡。因此，一种能与 STING 环二核苷酸结合口袋结合的特异性 STING 抑制剂，是治疗 STING 驱动疾病的一种很有前景的先导化合物。[1]
作用机制 STING 抑制剂 2与 STING 的环二核苷酸结合口袋竞争性结合，阻止内源性配体（例如 2'3'-cGAMP）的结合以及随后的 STING 寡聚化。该抑制剂可阻断TBK1-IRF3和NF-κB信号通路的下游激活，从而抑制I型干扰素和促炎细胞因子的产生，进而抑制自身炎症和肿瘤相关免疫反应[1] - 治疗潜力 该抑制剂有望用于治疗STING依赖性自身免疫性疾病（例如，艾卡迪-古蒂埃综合征、系统性红斑狼疮）和STING驱动的肿瘤，在这些疾病中，STING异常激活是导致疾病进展的原因[1] - 结构特征 STING抑制剂2是一种小分子化合物，其核心结构经过优化，可与STING CDN口袋完美契合，并与人STING的关键氨基酸残基（Asn213、Ser214和Thr267）形成氢键相互作用[1] |
| 分子式 |
C25H19FN2O4S
|
|---|---|
| 分子量 |
462.4928
|
| 精确质量 |
462.105
|
| 元素分析 |
C, 64.92; H, 4.14; F, 4.11; N, 6.06; O, 13.84; S, 6.93
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| CAS号 |
2249435-90-1
|
| PubChem CID |
138005721
|
| 外观&性状 |
Off-white to gray solid powder
|
| LogP |
4.7
|
| tPSA |
104
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
736
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
GPXQUPCJIJBXHJ-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C25H19FN2O4S/c26-20-10-13-22(14-11-20)33(31,32)28-23-16-21(12-15-24(23)29)27-25(30)19-8-6-18(7-9-19)17-4-2-1-3-5-17/h1-16,28-29H,(H,27,30)
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| 化学名 |
N-(3-((4-fluorophenyl)sulfonamido)-4-hydroxyphenyl)-[1,1'-biphenyl]-4-carboxamide
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| 别名 |
SN 011; SN-011; N-(3-(4-Fluorophenylsulfonamido)-4-hydroxyphenyl)-[1,1'-biphenyl]-4-carboxamide; CHEMBL5189857; N-[3-[(4-Fluorophenyl)sulfonylamino]-4-hydroxyphenyl]-4-phenylbenzamide; STING INHIBITOR-2?; SCHEMBL23226366; SN011
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~216.22 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1622 mL | 10.8110 mL | 21.6221 mL | |
| 5 mM | 0.4324 mL | 2.1622 mL | 4.3244 mL | |
| 10 mM | 0.2162 mL | 1.0811 mL | 2.1622 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
INI3069
CDN prodrug-1
STING agonist-45
STING agonist-46
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