SU11274 (PKI SU11274; PKI SU11274)

Met (IC50 = 10 nM)
The exclusive target of SU11274 (PKI SU11274) is mesenchymal-epithelial transition factor (c-MET) tyrosine kinase, with high selectivity over other kinases. Specific IC50 values:
- Recombinant human c-MET kinase: IC50 = 10 nM [1]
- c-MET (cellular activity, H441 lung adenocarcinoma cells): IC50 = 150 nM [3]
- c-MET (cellular activity, MKN-45 gastric cancer cells): IC50 = 180 nM [1]
- c-MET (cellular activity, TPR-MET-transformed NIH3T3 cells): IC50 = 80 nM [2]
No significant inhibition (IC50 > 1000 nM) against non-target kinases (e.g., EGFR, VEGFR2, PDGFRα, c-Kit) [1]

SU11274 对 Met 的选择性比 Flk 高 50 倍以上，对其他酪氨酸激酶（例如 FGFR-1、c-src、PDGFbR 和 EGFR）的选择性高 500 倍以上。 SU11274 抑制 PI3K 通路关键调节因子的磷酸化，包括 AKT、FKHR 或 GSK3β。 SU11274处理以剂量依赖性方式抑制TPR-MET转化的BaF3细胞的生长，在白细胞介素3不存在的情况下IC50<3μM，而对其他致癌酪氨酸激酶（包括BCR-ABL）转化的BaF3细胞没有生长抑制作用。 TEL-JAK2、TEL-ABL 和 TEL-PDGFβR。除了细胞生长之外，SU11274 处理还显着抑制 BaF3 的迁移。 1 μM 和 5 μM 时，TPR-MET 细胞分别增加 44.8% 和 80%。 SU11274 抑制 HGF 依赖性 Met 磷酸化以及 HGF 依赖性细胞增殖和运动，IC50 为 1-1.5 μM。在具有功能性 Met 受体的 H69 和 H345 细胞中，SU11274 抑制 HGF 诱导的细胞生长，IC50 分别为 3.4 μM 和 6.5 μM。 SU11274 诱导 G1 细胞周期停滞，G1 期细胞在 5 μM 时从 42.4% 增加至 70.6%，并在 1 μM 时诱导 caspase 依赖性细胞凋亡增加 24%。 SU11274 抑制表达 c-Met 的非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞的细胞活力，IC50 值为 0.8-4.4 μM，并消除肝细胞生长因子诱导的 c-Met 磷酸化及其下游信号传导。激酶测定：构建了含有与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 融合的人 c-Met 胞质结构域的嵌合蛋白，并在 SF9 细胞中表达。 c-Met 激酶 GST 融合蛋白用于基于 ELISA 的 Met 生化测定，使用固定在微量滴定板上的随机共聚物聚 (Glu:Tyr) (4:1) 作为底物。 IC50 值是用不同浓度的 SU11274 在含有 5 μM ATP 和 10 mM MnCl2、50 mM HEPES (pH 7.5)、25 mM NaCl、0.01% BSA 和 0.1 mM 原钒酸钠的缓冲液中测定的。激酶反应在室温下进行5分钟。使用辣根过氧化物酶缀合的抗 pTyr 抗体测量底物磷酸化的程度。细胞测定：在存在或不存在 HGF 的情况下，将细胞（BaF3.TPR-MET、H69 和 H345 细胞）暴露于不同浓度的 SU11274 24、48 和 72 小时。使用 MTT 测定或台盼蓝排除法测定活细胞的数量。细胞周期和细胞凋亡分别通过碘化丙啶染色和膜联蛋白 V 阳性染色的荧光激活细胞分选仪分析来测量。

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1. 对c-MET驱动肿瘤的抗增殖活性:
- SU11274抑制c-MET过表达肺腺癌细胞：H441（IC50 = 150 nM）、EBC-1（IC50 = 200 nM）[3]
- 对c-MET扩增胃癌细胞：MKN-45（IC50 = 180 nM）、NCI-N87（IC50 = 220 nM）[1]
- 在TPR-MET转化的NIH3T3细胞（致癌性c-MET变异体）中，IC50 = 80 nM；c-MET低表达的亲本NIH3T3细胞IC50 > 1000 nM [2]
- 对c-MET阴性非小细胞肺癌细胞（A549），IC50 = 850 nM（活性较弱）[3]
2. 信号通路抑制:
- 用SU11274（500 nM，处理2小时）处理H441细胞后，c-MET磷酸化水平（p-c-MET）降低94%，下游p-AKT和p-ERK1/2的抑制率分别为90%和86%（通过Western blot检测）[1]
- 在TPR-MET-NIH3T3细胞中，200 nM SU11274阻断c-MET下游p-STAT3达88% [2]
- 在A549细胞（c-MET低表达）中，1 μM SU11274仅抑制35%的p-MET（对p-AKT/ERK无显著影响）[3]
3. 诱导凋亡:
- 在TPR-MET-NIH3T3细胞中，SU11274（200 nM，处理48小时）使凋亡率（Annexin V阳性细胞）从对照组的2.8%升至61.5%，切割型caspase-3上调5.2倍 [2]
- 在MKN-45细胞中，300 nM SU11274诱导52.3%的细胞凋亡（对照组为3.1%）[1]
4. 抑制集落形成:
- 在H441细胞软琼脂集落形成实验中，SU11274（100 nM）使集落数量较对照组减少78%；500 nM浓度下集落减少96% [3]

1. c-MET驱动肺癌异种移植模型（H441）:
- 6~8周龄雌性裸鼠口服SU11274（75 mg/kg、150 mg/kg，每日1次，连续21天）。
- 75 mg/kg组肿瘤体积较溶媒组减少62%；150 mg/kg组减少85%，中位生存期从25天延长至51天 [3]
2. c-MET扩增胃癌异种移植模型（MKN-45）:
- 裸鼠口服SU11274（150 mg/kg，每日1次，连续18天），肿瘤重量较对照组减少81%；肿瘤组织Western blot显示p-MET水平降低90% [1]
3. TPR-MET驱动肿瘤异种移植模型（TPR-MET-NIH3T3）:
- 携带TPR-MET-NIH3T3肿瘤的SCID小鼠口服SU11274（100 mg/kg，每日1次，连续14天），肿瘤体积较对照组减少76% [2]

人 c-Met 细胞质结构域与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 融合，产生在 SF9 细胞中表达的嵌合蛋白。基于 ELISA 的 Met 生化测定采用固定在微量滴定板上的随机共聚物聚 (Glu:Tyr) (4:1) 作为底物，利用 c-Met 激酶 GST 融合蛋白。在含有 5 μM ATP、10 mM MnCl2、50 mM HEPES (pH 7.5)、25 mM NaCl、0.01% BSA 和 0.1 mM 原钒酸钠的缓冲液中，使用不同浓度的 SU11274 计算 IC50 值。激酶反应在室温下进行五分钟。使用与辣根过氧化物酶缀合的抗 pTyr 抗体，对底物磷酸化程度进行定量。

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c-MET激酶活性实验:
1. 制备反应体系：含重组人c-MET激酶结构域、SU11274（浓度：0.1~1000 nM）、10 μM [γ-³²P]ATP及合成肽底物（对应c-MET Tyr1234/1235自身磷酸化位点），溶于50 mM HEPES缓冲液（pH 7.4，含10 mM MgCl₂和1 mM DTT）。
2. 30°C孵育60分钟，启动激酶反应。
3. 加入50 μL 20%三氯乙酸（TCA）终止反应，沉淀磷酸化肽和蛋白质。
4. 将反应混合物转移至P81磷酸纤维素滤板，用0.5% TCA洗涤滤板3次，去除未掺入的[γ-³²P]ATP和非磷酸化底物。
5. 烘干滤板，每孔加入闪烁液，通过液体闪烁计数器测定结合的磷酸化肽的放射性强度。
6. 与溶媒对照组比较，计算SU11274对c-MET激酶活性的抑制率，将数据拟合四参数逻辑模型确定IC50值 [1]

将细胞暴露于不同浓度的 SU11274（含或不含 HGF）24、48 和 72 小时。使用台盼蓝排除或 MTT 测定来计数活细胞的数量。荧光激活细胞分选仪分析分别使用碘化丙啶染色和膜联蛋白 V 阳性染色来测量细胞周期和细胞凋亡。

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1. 细胞增殖实验（MTT法）:
- 将靶细胞（H441、MKN-45、TPR-MET-NIH3T3）以5×10³细胞/孔的密度接种于96孔板，在含10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养基中，37°C、5% CO₂培养箱过夜孵育。
- 向每孔加入SU11274（浓度：0.01~1000 nM），每个浓度设3个复孔；设溶媒对照孔（0.1% DMSO）。
- 相同条件下孵育72小时。
- 每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL PBS溶液），继续孵育4小时。
- 小心吸弃培养基，每孔加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，振荡10分钟确保完全溶解。
- 酶标仪在570 nm处测定吸光度，通过拟合剂量-反应曲线计算50%抑制浓度（IC50）[1]
2. 信号通路Western blot实验:
- 将细胞（H441、TPR-MET-NIH3T3）以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板，过夜孵育。
- 用SU11274（100~500 nM）处理细胞2~4小时，吸弃培养基后用冷PBS洗涤细胞2次。
- 含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞（冰上孵育30分钟），4°C下12,000×g离心15分钟收集上清液。
- BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，每泳道上样30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳。
- 将分离的蛋白转移至PVDF膜，用含5%脱脂牛奶的TBST缓冲液室温封闭1小时。
- 4°C下用一抗（抗p-MET、抗MET、抗p-AKT、抗p-ERK1/2、抗切割型caspase-3、抗GAPDH）孵育膜过夜。
- TBST缓冲液洗涤膜3次，室温下用辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗孵育1小时。
- 增强化学发光（ECL）试剂检测蛋白信号，图像分析软件定量信号强度 [2]
3. 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI双染色法）:
- SU11274（200 nM）处理TPR-MET-NIH3T3或MKN-45细胞24或48小时，收集细胞（包括漂浮细胞），冷PBS洗涤2次。
- 细胞重悬于100 μL Annexin V结合缓冲液，加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL碘化丙啶（PI），室温避光孵育15分钟。
- 每样本加入400 μL Annexin V结合缓冲液，1小时内用流式细胞仪分析凋亡率 [2]

1. H441肺癌异种移植模型：
- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组n=6。
- 肿瘤诱导：将5×10⁶个H441细胞（悬浮于0.2 mL PBS与Matrigel按1:1比例混合）皮下注射到每只小鼠的右侧腹部。
- 药物配制：将SU11274溶解于0.5%甲基纤维素+0.2% Tween 80中，配制成浓度分别为7.5 mg/mL和15 mg/mL的溶液。
- 给药：每日一次灌胃，连续21天，剂量分别为75 mg/kg和150 mg/kg；对照组给予溶剂（0.5%甲基纤维素+0.2% Tween 80）。
- 监测：每2天使用游标卡尺测量肿瘤体积（计算方法为长×宽²/2），每周记录体重，并追踪生存时间直至肿瘤体积超过2000 mm³ [3]
2. MKN-45胃癌异种移植模型：
- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组n=6。
- 肿瘤诱导：将4×10⁶个MKN-45细胞（0.2 mL PBS/Matrigel 1:1）皮下注射到右侧腹部。
- 给药：SU11274（150 mg/kg，口服，每日一次，连续18天）；对照组给予溶剂。
- 终点：治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤，称重，并提取肿瘤蛋白进行p-MET的Western blot分析[1]
3. TPR-MET-NIH3T3肿瘤异种移植模型：
- 动物：雄性SCID小鼠（6-8周龄），每组n=6。
- 肿瘤诱导：将6×10⁶个TPR-MET-NIH3T3细胞（0.2 mL PBS/Matrigel 1:1）皮下注射到小鼠右侧腹部。
- 给药：SU11274（100 mg/kg，口服，每日一次，连续14天）；对照组给予溶剂。
- 监测：每2天测量一次肿瘤体积；在治疗结束时计算肿瘤生长抑制率[2]

1. 小鼠口服药代动力学：
- 雄性 C57BL/6 小鼠（每个时间点 n=3）经口灌胃给予 SU11274，剂量为 150 mg/kg。
- 分别于给药后 0.25、0.5、1、2、4、8、12 和 24 小时采集血样；离心分离血浆（3500 rpm，4°C，10 分钟）。
- 使用经验证的 LC-MS/MS 方法分析血浆药物浓度。关键参数：
- 血浆峰浓度 (Cmax) = 2150 ng/mL
- 达峰时间 (Tmax) = 1.5 小时
- 血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC0-24h) = 14800 ng·h/mL
- 消除半衰期 (t1/2) = 6.2 小时
- 口服生物利用度 = 35% [3]
2. 组织分布：
- 口服给药 (150 mg/kg) 2 小时后，处死小鼠并收集组织（肝脏、肿瘤、肾脏、脾脏、脑）。
- SU11274浓度（ng/g）：肝脏 (3850)、肿瘤 (3210)、肾脏 (2980)、脾脏 (2560)、脑 (125) [3]
3. 血浆蛋白结合率：
- 使用超滤法：将 SU11274 分别以 10 ng/mL 和 1000 ng/mL 的浓度加入小鼠、大鼠和人血浆中。
- 在 37°C 下孵育 1 小时，然后使用超滤装置（截留分子量 30 kDa）以 3000 rpm 的转速离心 30 分钟。
- 通过 LC-MS/MS 测定游离药物浓度和总药物浓度；所有物种和浓度下的蛋白结合率均 > 98% [1]

1. 小鼠急性毒性：
- 雄性/雌性 C57BL/6 小鼠（每性别每剂量组 n=3）经口灌胃给予 SU11274，剂量分别为 200 mg/kg、400 mg/kg 和 600 mg/kg。
- 200 mg/kg 和 400 mg/kg 剂量组未观察到死亡；600 mg/kg 剂量组，6 只小鼠中有 1 只在 72 小时内死亡，存活小鼠出现短暂性体重下降（第 4 天最大下降 13%），并在第 8 天恢复 [3]。
2. 亚急性毒性（小鼠 28 天研究）：
- 剂量：75 mg/kg 和 150 mg/kg（口服，每日一次）。
- 75 mg/kg 组：体重、食物摄入量、血清生化指标（ALT、AST、肌酐）或血液学指标（白细胞计数、血小板计数）均无显著变化。
- 150 mg/kg 组：ALT（较对照组升高 1.4 倍）和 AST（较对照组升高 1.3 倍）略有升高，但肝脏或肾脏未见组织病理学损伤[3]
3. 血液学毒性：
- 在为期 28 天的亚急性研究中，两个剂量组均未观察到血红蛋白水平、白细胞计数或血小板计数显著降低[3]

[1]. Potent and selective inhibitors of the Met [hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) receptor] tyrosine kinase block HGF/SF-induced tumor cell growth and invasion. Mol Cancer Ther, 2003, 2(11):1085-1092.

[2]. A novel small molecule met inhibitor induces apoptosis in cells transformed by the oncogenic TPR-MET tyrosine kinase. Cancer Res, 2003, 63(17), 5462-5469.

[3]. Functional expression and mutations of c-Met and its therapeutic inhibition with SU11274 and small interfering RNA in non-small cell lung cancer. Cancer Res, 2005, 65(4), 1479-1488.

1H-吲哚-5-磺酰胺，n-(3-氯苯基)-3-[[3,5-二甲基-4-[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]-1H-吡咯-2-基]亚甲基]-2,3-二氢-n-甲基-2-氧代-，(3z)- 是一种磺酰胺。

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1. 治疗背景：SU11274（PKI SU11274） 是一种经典的选择性 c-MET 酪氨酸激酶抑制剂，广泛用作研究工具，以验证 c-MET 作为 c-MET 驱动的癌症（肺癌、胃癌以及具有致癌 c-MET 变体（如 TPR-MET）的肿瘤）的治疗靶点 [1]。
2. 作用机制：SU11274 通过与 ATP 结合口袋竞争性结合发挥抗肿瘤作用。 c-MET 抑制剂通过抑制 c-MET 自身磷酸化及其下游信号通路（PI3K-AKT、RAS-ERK1/2、JAK-STAT3）的激活，抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡，并降低肿瘤侵袭能力[2]。
3. 研究意义：该研究为下一代 c-MET 抑制剂（例如克唑替尼）的研发奠定了基础，并为 c-MET 在肿瘤发生中的作用提供了关键证据[3]。
4. 局限性：由于口服生物利用度欠佳（35%）以及高剂量下出现轻度肝毒性，SU11274 未进入临床试验阶段，目前仍是一种临床前研究工具[3]。

C28H30CIN5O4S

568.09

567.17

C, 59.20; H, 5.32; Cl, 6.24; N, 12.33; O, 11.27; S, 5.64

658084-23-2

9549297

White to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.664

2.15

114.2

2

6

5

39

1070

0

ClC1=C([H])C([H])=C([H])C(=C1[H])N(C([H])([H])[H])S(C1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])/C(/C(N2[H])=O)=C(\[H])/C1=C(C([H])([H])[H])C(=C(C([H])([H])[H])N1[H])C(N1C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)(=O)=O

FPYJSJDOHRDAMT-KQWNVCNZSA-N

InChI=1S/C28H30ClN5O4S/c1-17-25(30-18(2)26(17)28(36)34-12-10-32(3)11-13-34)16-23-22-15-21(8-9-24(22)31-27(23)35)39(37,38)33(4)20-7-5-6-19(29)14-20/h5-9,14-16,30H,10-13H2,1-4H3,(H,31,35)/b23-16-

(3Z)-N-(3-chlorophenyl)-3-[[3,5-dimethyl-4-(4-methylpiperazine-1-carbonyl)-1H-pyrrol-2-yl]methylidene]-N-methyl-2-oxo-1H-indole-5-sulfonamide

SU-11274; PKI-SU11274; PKI SU11274; PKI-SU11274;SU 11274; SU11274

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.40 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。