SU9516

CDK2 (IC50 = 22 nM); CDK1 (IC50 = 40 nM); CDK4 (IC50 = 200 nM); PDGFr (IC50 = 18000 nM)

体外活性：SU9516 是 cdk 2 的有效抑制剂，其对 cdk2 的选择性分别是 cdk4 和 cdk1 的 9 倍和 1.8 倍。 SU9516 (5 μM) 处理可抑制 (P ≤ 0.05) SW480 细胞中 pRb 的 cdk2 特异性 (27–64%) 和 cdk4 特异性 (26–49%) 磷酸化（24、48 和 72 小时）时间点。在血清诱导和添加 SU9516 后 20 小时，RKO 细胞仍处于 G2-M 期。 SU9516 在 EGF 刺激的细胞中产生剂量依赖性 G1 积累。在所有细胞系中，用 5 microM SU9516 处理可防止 pRb 从 E2F1 解离 (HT-29>RKO>SW480)。治疗效果具有时间依赖性，在 HT-29 细胞中，48 小时的抑制作用比 24 小时的抑制作用更大。此外，E2F 物种与 p107、p130、DP-1 以及细胞周期蛋白 A 和 E 形成复合物。用 5 microM SU9516 处理 24 小时后，细胞周期蛋白 D1 和 cdk2 水平降低了 10-60%。 U937 和其他白血病细胞快速（即在 4 小时内）暴露于浓度 > 或 = 5 microM 的 SU9516 会诱导细胞色素 c 释放、Bax 线粒体易位和细胞凋亡，并与抗凋亡蛋白 Mcl-1 的显着下调相关。激酶测定：激酶测定在96孔聚丙烯板中进行。每个反应含有 2 μg 组蛋白 H1，终浓度为 10 μM [γ-33P]ATP（0.2 μCi/孔；大约是实验确定的 Km 的两倍；数据未显示）、10 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% Triton X-100 和 10% 甘油，体积为 40 µl。加入 20 μl 酶（6ng cdk2/孔，最终浓度为 1.6 nM）开始反应，该酶事先在相同缓冲液中按 1:50-1:200 稀释，并在 30℃下反应 1 小时。室内温度。通过添加0.01ml 10%磷酸终止反应，并将25μl反应混合物转移至P30磷酸纤维素滤垫纸上。将滤垫用1.0％磷酸洗涤3次，风干，然后在液体闪烁计数器(Wallac Betaplate)中计数放射性。细胞测定（SRB 细胞增殖测定）：将 RKO 细胞和 SW480 细胞以 1 × 104 个细胞/孔重复接种 (n = 6) 于 96 孔板 (Becton Dickinson, Lincoln Park, NJ) 中，并贴壁过夜。以 0.05 μM 至 50.00 μM 的浓度添加 SU9516 (Sugen, San Francisco, CA) 24 小时，然后用 PBS 洗涤细胞两次，并用完全培养基补充细胞。去除药物后 0、4 和 7 天固定细胞，并使用改良的 SRB 细胞毒性测定法测定蛋白质水平。将细胞在10%三氯乙酸中固定1小时，用蒸馏水洗涤，并在0.4%SRB/乙酸中染色30分钟。然后将细胞用 0.1% 乙酸洗涤，溶解在 10 mM Tris (pH 9) 中，并在 Bio-Rad 360 酶标仪 (Bio-Rad) 上于 595 nm 处进行分析。所有实验至少重复三次。细胞测定：在 RKO 细胞中，SU 9516 (5 μM) 将 pRb 的 cdk2 特异性磷酸化降低 52%。而在 SW480 细胞中，SU9516 (5 μM) 分别抑制 pRb 的 cdk2 特异性和 cdk4 特异性磷酸化 64% 和 49%。此外，SU 9516 (5 μM) 会导致 G0-G1 或 G2-M 阻滞，并以剂量依赖性方式诱导细胞凋亡。在 HT-29、SW480 和 RKO 人结肠癌细胞中，SU9516 (5 μM) 以时间依赖性方式抑制 pRb 从 E2F1 解离。此外，SU 9516 使细胞周期蛋白 D1 和 CDK2 降低 10-60%。在人白血病细胞中，SU 9516 (5 μM) 诱导 Bax 线粒体易位、细胞色素 c 释放和细胞凋亡，这与抗凋亡蛋白 Mcl-1 的下调相关。此外，SU 9516 诱导 caspase-3 和 -8 的激活

96 孔聚丙烯板用于激酶测定。 40 μL 体积，含有 10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.01% Triton X-100、10% 甘油和 2 μg 组蛋白 H1，终浓度为 10 μM [-^{每个反应均使用 33 P]ATP（0.2 μCi/孔）。添加 20 μL 酶（6 ng cdk2/孔，或最终浓度为 1.6 nM）以开始反应。该酶已在相同缓冲液中按 1:50–1:200 稀释，并在室温下放置一小时。将25 μL反应混合物转移至P30磷酸纤维素滤垫纸上，并通过添加0.01 mL 10%磷酸终止反应。将过滤垫风干，用1.0%磷酸漂洗3次，然后用液体闪烁计数器测量其放射性。}

在 96 孔板中，以 1×10⁴ 细胞/孔的密度一式两份 (n = 6) 接种 RKO 和 SW480 细胞，并使其贴壁过夜。添加浓度范围为 0.05 μM 至 50.00 μM 的 SU9516 24 小时后，用 PBS 洗涤细胞两次，并用全培养基重新补充。使用改良的 SRB 细胞毒性测定，在去除药物后 0、4 和 7 天固定细胞并测量其蛋白质水平。在10％三氯乙酸中固定一小时后，在蒸馏水中清洗细胞并在0.4％SRB/乙酸中染色30分钟。在 10 mM Tris (pH 9) 中溶解后，将细胞用 0.1% 乙酸冲洗，并使用 Bio-Rad 360 酶标仪在 595 nm 处进行检查。每个实验都要进行三次或更多次。

[1]. A novel cdk2-selective inhibitor, SU9516, induces apoptosis in colon carcinoma cells. Cancer Res. 2001 Aug 15;61(16):6170-7.

[2]. SU9516, a cyclin-dependent kinase 2 inhibitor, promotes accumulation of high molecular weight E2F complexes in human colon carcinoma cells. Biochem Pharmacol. 2002 Oct 1;64(7):1091-100.

[3]. The three-substituted indolinone cyclin-dependent kinase 2 inhibitor 3-[1-(3H-imidazol-4-yl)-meth-(Z)-ylidene]-5-methoxy-1,3-dihydro-indol-2-one (SU9516) kills human leukemia cells via down-regulation of Mcl-1 through a transcriptional mechanism. Mol Pharmacol. 2006 Aug;70(2):645-55.

3-(1H-imidazol-5-ylmethylidene)-5-methoxy-1H-indol-2-one is a member of indoles.

C13H11N3O2

241.25

241.085

C, 64.72; H, 4.60; N, 17.42; O, 13.26

377090-84-1

5289419

Light brown to brown solid powder

1.4±0.1 g/cm3

601.5±55.0 °C at 760 mmHg

317.6±31.5 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.696

1.02

67.01

2

3

2

18

369

0

O(C([H])([H])[H])C1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])/C(=C(\[H])/C1=C([H])N=C([H])N1[H])/C(N2[H])=O

FUOLFAHJLGZFME-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H24N4O2/c28-23-13-7-8-14-24(23)31-27(33)25-16-15-21(18-29-25)30-26(32)22(20-11-5-2-6-12-20)17-19-9-3-1-4-10-19/h1-16,18,22H,17,28H2,(H,30,32)(H,31,33)

N-(2-aminophenyl)-5-(2,3-diphenylpropanoylamino)pyridine-2-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3.25 mg/mL (13.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 32.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 3.25 mg/mL (13.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 32.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。