| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| 10g |
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| Other Sizes |
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| 体外研究 (In Vitro) |
磺胺罗丹明 B 钠盐 (SRB) 经常用于细胞毒性测定,通过测量细胞蛋白来确定细胞密度,或作为膜不可渗透的分析物。使用 SRB 测定以低成本进行了许多筛选测定,以研究基于细胞的研究中的细胞毒性。该技术基于SRB的特性,其在微酸性条件下与蛋白质以化学计量结合,并且在碱性条件下可以提取;因此,结合染料的量可以诱导细胞发育。该方案的四个主要步骤如下:处理准备、细胞增殖和选择处理、细胞固定和 SRB 染色以及吸光度测量。该测定可灵敏地用于测试贴壁细胞或化疗药物中的高效小分子,但仅限于手动或半自动筛选。它用于评估基因表达调控(敲低、上调)的效果以及研究 miRNA 替代对细胞分裂的影响 [1]。
1. 与细胞数量的线性相关性:磺酰罗丹明B钠盐(Sulforhodamine B sodium salt, SRB)的吸光度与细胞数量呈强线性关系,可实现细胞增殖的定量评估。在96孔板中检测HeLa、A549和MCF-7细胞(密度范围1×10³至1×10⁵个/孔)时,所有细胞系的吸光度(515 nm波长检测)与细胞计数的相关系数(R²)均>0.99 [1] 2. 增殖检测的高重复性:SRB实验具有良好的重复性。批内精密度方面,对同一细胞样本(10 μM多柔比星处理的A549细胞)在8个复孔中检测,变异系数(CV)<5%;批间精密度方面,用同一批次细胞和处理条件连续3天重复实验,CV<8% [1] 3. 兼容药物诱导的增殖抑制评估:磺酰罗丹明B钠盐(Sulforhodamine B sodium salt)可有效检测药物诱导的细胞增殖变化。例如,MCF-7细胞用0.1–10 μM紫杉醇处理48小时后,SRB实验检测到吸光度呈浓度依赖性降低:1 μM紫杉醇时吸光度较溶媒对照组降低42%,10 μM时降低幅度达78%,与预期的抗增殖效应一致 [1] |
|---|---|
| 细胞实验 |
1. 标准SRB细胞增殖检测实验(96孔板格式):
1) 细胞接种:将目标细胞(如HeLa、A549)胰酶消化后用完全培养基重悬,以5×10³个/孔的密度接种于96孔板,每孔终体积100 μL。 plates置于37°C、5% CO₂湿润培养箱中孵育24小时,使细胞贴壁 [1] 2) 药物处理(如需):将测试化合物(如化疗药物)用完全培养基稀释至不同浓度,吸弃孔内原有培养基,每孔加入100 μL稀释后的化合物溶液(溶媒对照组加入不含化合物的培养基)。 plates继续在相同培养条件下孵育48–72小时 [1] 3) 细胞固定:处理结束后,每孔加入50 μL 10%(w/v)三氯乙酸(TCA)(终浓度3.33%)固定细胞,plates置于4°C放置1小时,随后用去离子水洗涤3次以去除TCA和残留培养基,室温晾干2–4小时 [1] 4) SRB染色:配制0.4%(w/v)磺酰罗丹明B钠盐(Sulforhodamine B sodium salt)溶液(溶于1%乙酸),每孔加入100 μL染色液,室温孵育30分钟。用1%乙酸洗涤4次去除未结合染料,再次室温晾干plates [1] 5) 染料溶解与检测:每孔加入150 μL 10 mM Tris碱溶液(pH 10.5)溶解结合的SRB染料,在微孔板振荡器上振荡10分钟确保完全溶解。用微孔板读数仪在515 nm波长下测定每孔吸光度,通过对比处理组与对照组的吸光度计算细胞增殖率或抑制率 [1] 2. 贴壁细胞与悬浮细胞的SRB检测适配:对于悬浮细胞(如Jurkat细胞),固定步骤需调整:加入TCA前先将细胞以1,000 × g离心5分钟,吸弃上清液避免细胞丢失,后续染色、洗涤和检测步骤与贴壁细胞一致 [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
丽丝胺罗丹明是一种有机钠盐,其抗衡离子为4-[3,6-双(二乙氨基)呫吨-9-基]苯-1,3-二磺酸根。它可用作荧光染料、组织学染料和荧光探针。它含有丽丝胺罗丹明阴离子。
- 磺基罗丹明B钠盐是一种水溶性、非荧光阳离子染料,它通过静电相互作用与细胞内蛋白质的碱性氨基酸残基(例如赖氨酸、精氨酸)结合。结合染料的量与细胞的总蛋白含量成正比,而总蛋白含量又与细胞数量直接相关——这是其用于细胞增殖评估的核心机制[1] - 与其他细胞增殖检测方法(例如 MTT 检测)相比,SRB 检测具有以下几个优点:染色复合物在室温下可稳定保存长达 7 天(无快速荧光猝灭);不受细胞代谢活性的影响(细胞在染色前进行固定,避免了线粒体酶抑制剂的干扰);且线性检测范围宽(适用于 1×10³ 至 2×10⁵ 个细胞/孔的细胞密度)[1] - 磺基罗丹明 B 钠盐 与大多数常用细胞培养基相容,且不与常用小分子药物或纳米颗粒发生反应,因此被广泛用于抗增殖化合物(例如化疗药物、靶向药物)的高通量筛选[1] |
| 分子式 |
C27H29N2O7S2-.NA+
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|---|---|
| 分子量 |
580.64816
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| 精确质量 |
580.131
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| CAS号 |
3520-42-1
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| 相关CAS号 |
2609-88-3 (Parent)
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| PubChem CID |
9916275
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| 外观&性状 |
Brown to reddish brown solid powder
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| LogP |
7.813
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| tPSA |
150.78
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
39
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| 分子复杂度/Complexity |
1150
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
SXQCTESRRZBPHJ-UHFFFAOYSA-M
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H30N2O7S2.Na/c1-5-28(6-2)18-9-12-21-24(15-18)36-25-16-19(29(7-3)8-4)10-13-22(25)27(21)23-14-11-20(37(30,31)32)17-26(23)38(33,34)35;/h9-17H,5-8H2,1-4H3,(H-,30,31,32,33,34,35);/q;+1/p-1
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| 化学名 |
sodium;4-[3-(diethylamino)-6-diethylazaniumylidenexanthen-9-yl]benzene-1,3-disulfonate
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~62.5 mg/mL (~107.64 mM)
H2O : ~50 mg/mL (~86.11 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 50 mg/mL (86.11 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7222 mL | 8.6110 mL | 17.2221 mL | |
| 5 mM | 0.3444 mL | 1.7222 mL | 3.4444 mL | |
| 10 mM | 0.1722 mL | 0.8611 mL | 1.7222 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。