SZL P1-41

Skp2
The literature refers to "compound #25" (corresponding to SZL P1-41) as a specific inhibitor of Skp2 SCF ubiquitin ligase, which selectively targets the Skp2-Skp1 interaction interface to inhibit Skp2 E3 ligase activity; [1]
SZL P1-41 (compound #25) targets Skp2 E3 ligase, upregulates the tumor suppressor p27 and inactivates the oncoprotein Akt,[2]

体外活性：SZL P1-41 还表现出在遗传性 Skp2 缺陷时观察到的影响，例如抑制存活、Akt 介导的糖酵解以及触发不依赖于 p53 的细胞衰老。 SZL P1-41 可防止 Skp2-Skp1 相互作用和 Skp2 SCF E3 连接酶活性。参考浓度为5 uM。 SZL P1-41 通过触发 p53 独立的细胞衰老和抑制有氧糖酵解来限制癌细胞存活。激酶测定： 细胞测定：

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1. SZL P1-41（compound #25）选择性抑制Skp2 E3连接酶活性，但对其他SCF复合物的活性无抑制作用。在体外Skp2-Skp1结合实验中，该化合物可阻断Skp2与Skp1的相互作用；在PC3细胞的体内结合实验中，也可破坏Skp2-Skp1复合物的形成 [1]
2. 在转染了p27、His-Ub和Xp-Skp2的293T细胞中，SZL P1-41可在体内抑制p27的泛素化；在以Flag-Skp2-SCF为作用体系的体外Skp2介导p27泛素化实验中，该化合物可降低p27的泛素化水平 [1]
3. SZL P1-41在体内（293T细胞转染实验）和体外（以GST-Akt为底物的Skp2介导Akt泛素化实验）均可抑制Akt的泛素化 [1]
4. PC3细胞经不同剂量SZL P1-41处理24小时后，免疫印迹实验显示相关蛋白的表达/修饰水平发生改变；血清饥饿的LNCaP细胞经该化合物处理24小时后，给予EGF刺激，免疫印迹结果显示Akt的活化状态改变 [1]
5. SZL P1-41以剂量依赖的方式降低前列腺癌细胞（PC3、LNCaP）和肺癌细胞（A549）的存活率，但对正常上皮细胞（PNT1A）和正常成纤维细胞（IMR90）影响较小[1]
6. PC3细胞经SZL P1-41处理4天后可诱导p53非依赖性的细胞衰老；该化合物可降低PC3和LNCaP细胞的乳酸生成量（与LY294002作用效果相似），提示其可抑制Akt介导的糖酵解；同时可提高PC3细胞的凋亡率[1]
7. 敲低Skp2的PC3细胞或稳定表达Skp2 WT、W97A、D98A突变体的PC3细胞经不同剂量SZL P1-41处理：Skp2敲低可增强PC3细胞对该化合物的敏感性，而Skp2 W97A/D98A突变体（失去与该化合物的结合位点）则降低化合物对细胞存活的抑制作用（数据以平均值±标准差表示，p<0.05，p<0.01）[1]
8. SZL P1-41可降低PC3和LNCaP细胞中ALDH⁺癌症干细胞的比例（与LY294002、Skp2敲低效果相似）；同时可抑制PC3和LNCaP细胞的成球能力（前列腺球形成实验，数据以平均值±标准差表示，p<0.01）[1]
9. SZL P1-41衍生物的构效关系（SAR）研究：体外Skp2-Skp1结合实验和体内p27泛素化实验显示，不同衍生物对Skp2的抑制活性存在差异；细胞存活实验证实衍生物活性与Skp2抑制效力相关[1]

SZL P1-41 在多种动物模型中表现出有效的抗肿瘤活性，并与化疗药物配合减少癌细胞的存活。

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1. SZL P1-41（compound #25）在体外可增强PC3细胞对化疗药物多柔比星（Dox）和环磷酰胺（CPA）的敏感性；在荷A549（肺癌）或PC3（前列腺癌）肿瘤裸鼠异种移植模型中，腹腔（IP）注射该化合物可显著抑制肿瘤生长（每组n=6只小鼠，肿瘤体积均值±标准差，p<0.05，p<0.01，）[1]
2. 裸鼠PC3肿瘤异种移植物的组织学分析：SZL P1-41（低剂量40 mg/kg，高剂量80 mg/kg，腹腔注射）可上调肿瘤组织中p27和p21的表达，下调pAkt和Glut1的水平（定量结果以平均值±标准差表示，p<0.05，p<0.01；代表性组织学图像比例尺为100 µm）[1]
3. SZL P1-41（compound #25）可模拟Skp2缺失的效应，通过上调p27和灭活Akt发挥抗肿瘤作用；此外该化合物可能在肥胖预防中具有潜在应用[2]

1. 体外Skp2-Skp1结合实验：在存在/不存在SZL P1-41（compound #25）的条件下检测Skp2与Skp1的相互作用，验证该化合物对Skp2-Skp1相互作用的抑制效果，同时用于评估SZL P1-41衍生物的活性[1]
2. 体外Skp2介导p27泛素化实验：以Flag-Skp2-SCF复合物和p27为底物，在DMSO或SZL P1-41存在下检测p27的泛素化水平，验证化合物对Skp2 E3连接酶活性的抑制作用[1]
3. 体外Skp2介导Akt泛素化实验：以Flag-Skp2-SCF复合物和GST-Akt为底物，在DMSO或SZL P1-41存在下检测Akt泛素化水平，评估化合物对Skp2介导Akt泛素化的影响[1]

1. 细胞存活实验：前列腺癌细胞（PC3、LNCaP）、肺癌细胞（A549）、正常上皮细胞（PNT1A）和正常成纤维细胞（IMR90）经不同剂量SZL P1-41（compound #25）处理特定时长（未明确）后，检测细胞存活率；敲低Skp2或稳定表达Skp2突变体（WT、W97A、D98A）的PC3细胞经不同剂量该化合物处理后，存活率以DMSO组为基准进行归一化（结果以平均值±标准差表示，p<0.05，p<0.01）[1]
2. 细胞衰老实验：PC3细胞经SZL P1-41处理或未处理4天后，评估细胞衰老状态[1]
3. 乳酸生成实验：PC3和LNCaP细胞经DMSO、LY294002或SZL P1-41处理后，检测细胞培养基中的乳酸水平以评估糖酵解活性[1]
4. 凋亡实验：PC3细胞经DMSO或SZL P1-41处理后，测定细胞凋亡率 [1]
5. ALDH⁺细胞流式细胞术（FACS）分析：PC3和LNCaP细胞经DMSO、LY294002、SZL P1-41处理或敲低Skp2后，通过流式细胞术定量ALDH⁺细胞群（癌症干细胞）[1]
6. 前列腺球形成实验：PC3和LNCaP细胞经DMSO、LY294002或SZL P1-41处理后，在成球条件下培养，计数球的数量/大小以评估癌症干细胞自我更新能力（结果以平均值±标准差表示，p<0.01）[1]
7. 免疫印迹（IB）实验：不同剂量SZL P1-41处理24小时的PC3细胞，或经该化合物处理24小时（有无EGF刺激）的血清饥饿LNCaP细胞被收集，制备全细胞提取物（WCE），通过蛋白质印迹检测相关蛋白的表达/磷酸化水平（如pAkt、p27）[1]
8. 基于细胞的体内泛素化实验：293T细胞转染p27/His-Ub/Xp-Skp2或Akt相关构建体，经DMSO或SZL P1-41处理（部分实验加用MG132处理6小时）后，检测p27/Akt的泛素化水平[1]

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1. Xenograft tumor model in nude mice: A549 (lung cancer) or PC3 (prostate cancer) cells were implanted into nude mice to establish tumor xenografts; SZL P1-41 (compound #25) was administered to the mice via intraperitoneal (IP) injection at doses of 40 mg/kg (low) and 80 mg/kg (high) . Tumor volumes were measured regularly, and data were presented as mean tumor volumes ± s.d. (n=6 mice per group). After the experiment, tumor tissues were collected for histological analysis [1]

[1]. Pharmacological inactivation of Skp2 SCF ubiquitin ligase restricts cancer stem cell traits and cancer progression. Cell. 2013 Aug 1;154(3):556-68.

[2]. Skp2: a dream target in the coming age of cancer therapy. Cell Cycle. 2014;13(5):679-80.

SZL-P1-41 is a chromone that is 3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-8-(1-piperidinylmethyl)chromen-4-one bearing additional ethyl and hydroxy substituents at positions 6 and 7 respectively. It has a role as an antineoplastic agent and an EC 6.3.2.19 (ubiquitin--protein ligase) inhibitor. It is a member of benzothiazoles, a member of chromones, a member of piperidines and a member of phenols.

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1. SZL P1-41 (compound #25) was identified through high-throughput in silico screening of large and diverse chemical libraries, targeting the Skp2-Skp1 interaction interface (binding to Trp97 and Asp98 residues of Skp2, forming hydrogen bonds/hydrophobic/aromatic stacking interactions with Skp2) [1]
2. The chemical structure of SZL P1-41 is 3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-6-ethyl-7-hydroxy-8-(1-piperidinylmethyl)-4H-chromen-4-one; molecular docking showed that the compound binds to predicted pocket 1 of Skp2 [1]
3. SZL P1-41 phenocopies the effects of genetic Skp2 deficiency, including suppressing cancer cell survival, inhibiting Akt-mediated glycolysis, inducing p53-independent cellular senescence, reducing cancer stem cell populations and self-renewal ability [1]
4. SZL P1-41 exhibits potent antitumor activity in multiple animal models and synergizes with chemotherapeutic agents (Dox, CPA) to reduce cancer cell survival [1]
5. SZL P1-41 (compound #25) may have potential applications in obesity prevention (Skp2 loss reduces adipocyte number possibly via p27 accumulation), in addition to its antitumor effects [2]
6. Skp2 is overexpressed in numerous human cancers and plays a critical role in cell-cycle progression, senescence, metabolism, cancer progression and metastasis; SZL P1-41 provides pharmacological evidence that Skp2 is a promising target for cancer therapy [1,2]

C24H24N2O3S

420.52

420.15

C, 68.55; H, 5.75; N, 6.66; O, 11.41; S, 7.62

222716-34-9

1286902

Off-white to pink solid powder

1.3±0.1 g/cm3

610.0±65.0 °C at 760 mmHg

322.7±34.3 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.687

4.85

90.9

1

6

4

30

665

0

S1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N=C1C1=C([H])OC2=C(C1=O)C([H])=C(C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=C2C([H])([H])N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H])O[H]

JKIXLEKBXHMXTN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H24N2O3S/c1-2-15-12-16-22(28)18(24-25-19-8-4-5-9-20(19)30-24)14-29-23(16)17(21(15)27)13-26-10-6-3-7-11-26/h4-5,8-9,12,14,27H,2-3,6-7,10-11,13H2,1H3

3-(2-Benzothiazolyl)-6-ethyl-7-hydroxy-8-(1-piperidinylmethyl)-4H-1-benzopyran-4-one

SZL-P1-41; SZL P1 41; SZLP141; SKP2 E3 Ligase Inhibitor III; SZLP-141; SZLP 141;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 2.5~5 mg/mL ( 5.95~11.89 mM )

配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (11.89 mM) in Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。