TGFβRII; p38 MAPK (IC50 = 20 nM)

TA-02 (5 μM) 抑制 MAPKAPK2 和 HSP27 的磷酸化，这些蛋白质在心脏发生过程中被 p38α MAPK 磷酸化。与依赖于 p38α MAPK 抑制的机制所预测的相反，浓度为 5 μM 的 TA-02 会诱导心脏发生，同时还会增加 ATF-2 磷酸化和 MEF2C õ 表达[1]。 TA-02 诱导 T/Brachyury，而添加 SB203580 则增加 MESP1 和 T/Brachyury 转录本 [1]。在第 0 天和第 8 天之间使用 TA-02 会显着提高 NKX2-5 的表达[1]。 TA-02被发现可以抑制许多与p38α MAPK具有相似效力的靶标，包括p38α、p38β、JNK3、JNK2、CIT、CK1ε、DMPK2、JNK1、DDR1 CK1δ、MEK5和ERBB2[1]。核 TCF/LEF-1 驱动的 DKK-1 样荧光素酶转录受到 TA-02 和 SB203580 的抑制[1]。在体外，TA-02 (5 nM–5 M) 可增强 BDNF 的抗炎作用，同时抑制 p38[2]。

体外模型及转染[2]
神经细胞系AGE1。HN在添加10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100µg/ml链霉素的Dulbecco改良Eagle培养基中培养，在加5% CO2的湿化气氛中37℃保存。BDNF-pcDNA3.1(向前,5 -AGAAAAGCCAAFFAGTGAA-3和反向,5 -AAAAGGGGAAGATAGTGGATTTATGTT-3)和negative-pcDNA3.1消极模仿质粒(向前,5 -CCCCCCCCCCCCCCCCCC-3和反向,5“-CCCCCCCCCCCCCCCCCC-3”)是由xxx。根据制造商的方案，用100 ng BDNF质粒或阴性模拟物Lipofectamine 2000转染细胞。转染48 h后，用100 ng/ml脂多糖在37℃下诱导细胞4 h。细胞分别用10µM TrkB抑制剂ANA-12或5 nM TA-02 （p-38抑制剂）37℃处理44 h，分别用100 ng/ml LPS在37℃诱导4 h，再用100 ng/ml LPS在37℃诱导4 h。阴性组，细胞转染阴性模拟物。

[1]. Cardiomyocyte differentiation of pluripotent stem cells with SB203580 analogues correlates with Wnt pathway CK1 inhibition independent of p38 MAPK signaling. J Mol Cell Cardiol. 2015 Mar;80:56-70.

[[2]. The activation of BDNF reduced inflammation in a spinal cord injury model by TrkB/p38 MAPK signaling. Exp Ther Med. 2019 Mar;17(3):1688-1696.

本研究旨在探讨脑源性神经营养因子（BDNF）信号通路在促进大鼠脊髓损伤（SCI）后炎症反应中的作用。采用逆转录-定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测SCI大鼠脊髓组织中BDNF的表达水平。通过Basso、Beattie和Bresnahan（BBB）试验和脊髓含水量测定，评估BDNF对SCI的影响。结果显示，SCI大鼠脊髓组织中BDNF表达水平升高。在体外模型中，BDNF 过表达诱导酪氨酸激酶受体 B (TrkB) 蛋白表达，抑制磷酸化 (p-)p38 蛋白表达，并降低炎症反应，如肿瘤坏死因子 (TNF)-α、白细胞介素 (IL)-1β、IL-6、IL-18、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) 和环氧合酶 (COX)-2 水平所示。相反，TrkB 抑制剂 ANA-12 抑制 TrkB 蛋白表达，诱导 p-p38 蛋白表达，并在 BDNF 过表达诱导的脊髓损伤 (SCI) 体外模型中促进炎症反应（如 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、iNOS 和 COX-2 水平所示）。此外，p38 抑制剂 TA-0 抑制 p38 蛋白表达，并在 BDNF 过表达诱导的 SCI 体外模型中降低炎症反应。这些数据共同表明，BDNF/TrkB的促炎作用通过p38信号通路促进大鼠脊髓损伤（SCI）的炎症反应。[2]

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背景：NRAS突变激活MAPK信号通路，是美国约20%黑色素瘤病例的致癌驱动基因改变。NRAS突变型黑色素瘤特异性地依赖于CRAF而非BRAF来激活下游MEK/ERK信号通路。在BRAF突变型黑色素瘤中，已获批准的RAF靶向疗法通常与MEK抑制剂联合使用，通过抑制致癌MAPK信号通路中的两个靶点来发挥临床疗效。早期临床开发中的泛RAF抑制剂的新兴数据表明，无论是否联合MEK抑制剂，均能带来疗效，但目前尚无获批的针对NRAS突变型黑色素瘤患者的靶向疗法。KIN-2787是一种新型的口服泛RAF抑制剂，旨在对RAF依赖性癌症有效，且不受RAF亚型的影响。方法：在Reaction Biology公司，采用放射性酶分析法对688种激酶（包括野生型、非典型型和突变型）进行激酶组分析。通过抑制下游MAPK通路信号传导和抑制人肿瘤细胞系中的细胞生长来评估细胞活性。分别使用KIN-2787和binimetinib在9×5剂量矩阵中开展联合细胞生长抑制研究。采用Incucyte成像技术评估延长的细胞生长抑制效果。在NRAS突变异种移植瘤模型中评估KIN-2787及其联合用药的体内疗效。结果：KIN-2787 的激酶组分析显示其具有极高的选择性，在 1 μM KIN-2787 浓度下，669 个非 RAF 家族激酶中仅有 2 个被抑制超过 75%，且相对于 RAF 激酶，其对 DDR1 和 p38b 的选择性窗口分别约为 10 倍和 70 倍。我们此前报道过 KIN-2787 对 BRAF、NRAS 和 KRAS 突变型肿瘤细胞系均有活性，尤其在 II 类和 III 类二聚体驱动的 BRAF 模型中最为敏感。在此，我们评估了 KIN-2787 与 binimetinib 联合治疗 NRAS 突变型、BRAF 野生型黑色素瘤的潜力。结果表明，携带 NRAS 热点突变的黑色素瘤细胞系与 binimetinib 联合使用具有协同增效作用。在NRAS突变型黑色素瘤异种移植模型中，每日KIN-2787联合binimetinib治疗较单药治疗显著抑制肿瘤生长，并伴有MAPK通路生物标志物抑制。结论：KIN-2787是一种高选择性、强效的新一代泛RAF抑制剂，对BRAF和RAS突变型人类肿瘤细胞模型均具有活性。KIN-2787联合binimetinib的临床前体外和体内研究表明，在NRAS突变型黑色素瘤模型中，联合用药具有显著疗效。结合其独特的选择性，这些数据支持KIN-2787用于该患者群体的联合治疗。一项评估KIN-2787安全性和有效性的I/Ib期剂量递增和扩展临床试验正在进行中（NCT04913285）。[1]

C20H13F2N3

333.3341

333.107

C, 72.06; H, 3.93; F, 11.40; N, 12.61

1784751-19-4

TA-01;1784751-18-3

91691130

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

515.7±50.0 °C at 760 mmHg

265.7±30.1 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.619

4.99

41.6

1

4

3

25

421

0

FC1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C1=NC(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])F)=C(C2C([H])=C([H])N=C([H])C=2[H])N1[H]

QIFJOFNVIVQRNJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H13F2N3/c21-15-7-5-13(6-8-15)18-19(14-9-11-23-12-10-14)25-20(24-18)16-3-1-2-4-17(16)22/h1-12H,(H,24,25)

4-[2-(2-fluorophenyl)-4-(4-fluorophenyl)-1H-imidazol-5-yl]pyridine

TA 02; TA02; TA-02; 1784751-19-4; 4-(2-(2-Fluorophenyl)-4-(4-fluorophenyl)-1H-imidazol-5-yl)pyridine; 4-[2-(2-fluorophenyl)-4-(4-fluorophenyl)-1H-imidazol-5-yl]pyridine; MFCD29924749; SCHEMBL17002317; TA-02

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 25~67 mg/mL (75.0~201.0 mM)
Ethanol: ~3 mg/mL (~9.0 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。