| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Anaphase-promoting complex (APC)
TAME specifically targets the anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) (IC50 = 1.5 μM for APC/C ubiquitin ligase activity) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
TAME 抑制有丝分裂爪蟾卵提取物中的细胞周期蛋白水解，IC50 为 12 µM。浓度为 1-200 μM 的 TAME 可阻止用重组细胞周期蛋白 B1/Cdc2 复合物处理的间期提取物进行有丝分裂，并具有稳定的细胞周期蛋白 B1 和磷酸化 Cdc27。浓度为 200 μM 的 TAME 显着抑制后期促进复合物 (APC) 的泛素连接酶活性，同时减少 Cdh1 与 APC 的结合。添加到间期提取物中的 TAME 可部分通过直接与 APC 结合，以剂量依赖性方式减少 Cdc20 与 APC 的关联，贡献基序是 APC 上的 C 端异亮氨酸-精氨酸 (IR) 尾部。 TAME 被胰蛋白酶水解，Km 为 0.328 mM。 TAME 可将 ATP 水解过程加速约 12 倍。 TAME通过胍基和芳香环与β和γ磷酸以及ATP的腺嘌呤环相互作用。浓度为 50 mM 的 TAME 可抑制枯草芽孢杆菌中营养诱导的发芽和 600 MPa 压力诱导的发芽。 TAME 在回肠试纸上诱导浓度依赖性收缩反应，EC50 为 4.3 x 103 M。激酶测定：浓度为 1-200 μM 的 TAME 可以阻止用重组细胞周期蛋白 B1/Cdc2 复合物处理的间期提取物进行有丝分裂，并具有稳定的细胞周期蛋白 B1 和磷酸化 Cdc27 。浓度为 200 μM 的 TAME 显着抑制后期促进复合物 (APC) 的泛素连接酶活性，同时减少 Cdh1 与 APC 的结合。添加到间期提取物中的 TAME 可部分通过直接与 APC 结合，以剂量依赖性方式减少 Cdc20 与 APC 的关联，贡献基序是 APC 上的 C 端异亮氨酸-精氨酸 (IR) 尾部。 TAME 被胰蛋白酶水解，Km 为 0.328 mM。 TAME 可将 ATP 水解过程加速约 12 倍。 TAME通过胍基和芳香环与β和γ磷酸以及ATP的腺嘌呤环相互作用。浓度为 50 mM 的 TAME 可抑制枯草芽孢杆菌中营养诱导的发芽和 600 MPa 压力诱导的发芽。 TAME 在回肠条上诱导浓度依赖性收缩反应，EC50 为 4.3 x 103 M。 细胞测定：在有丝分裂的非洲爪蟾卵母细胞中，TAME 与 Cdc20 C 末端 IR 尾部竞争 APC 结合，从而抑制 APC 依赖性蛋白水解。 [3] TAME 还通过自然终止泛素化来稳定细胞周期蛋白 B1。它减缓未修饰的细胞周期蛋白 B1 的初始泛素化。在 TAME 存在的情况下，泛素化的细胞周期蛋白 B1 无法促进 Cdc20 与 APC 的结合。
在重组APC/C酶实验中，TAME 抑制APC/C介导的cyclin B1泛素化，IC50为1.5 μM，是一种可逆性抑制剂。在浓度高达20 μM时，它对其他E3泛素连接酶（如SCFβ-TrCP、MDM2）无显著抑制作用 [1] - 在一组人癌细胞系（HCT116、HeLa、U2OS、A549、MDA-MB-231）中，TAME 表现出抗增殖活性，IC50值范围为3-12 μM。处理72小时后，10 μM浓度使不同细胞系的细胞活力降低50-75% [1] - 在HCT116结肠癌细胞中，TAME（5 μM）诱导纺锤体检查点依赖性有丝分裂停滞，16小时后有丝分裂期细胞比例从对照组的4%升至35%。Western blot分析显示APC/C底物（cyclin B1、securin）稳定，蛋白水平分别增加2.8倍和3.1倍 [1] - 在HeLa细胞中，TAME（8 μM）在长时间有丝分裂停滞（24小时）后诱导凋亡，膜联蛋白V阳性细胞比例从对照组的3%升至28%，胱天蛋白酶-3/7活性提高2.5倍 [1] - 体外实验中，TAME（10 μM）提前终止APC/C底物（cyclin B1、securin）上的泛素链延长，导致形成短泛素链（二聚体和三聚体泛素化产物）而非多聚泛素化，从而阻止底物降解 [2] |
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| 酶活实验 |
浓度范围为 1 至 200 μM 的 TAME 会阻止重组细胞周期蛋白 B1/Cdc2 复合物处理的有丝分裂间期提取物，从而产生磷酸化的 Cdc27 和稳定的细胞周期蛋白 B1。在 200 μM 浓度下，TAME 显着抑制后期促进复合物 (APC) 的泛素连接酶活性，同时伴随着 Cdh1 与 APC 结合的减少。通过直接与 APC 结合，将 TAME 添加到间期提取物中会以剂量依赖性方式减少 Cdc20 与 APC 的关联。 APC 上的 C 端异亮氨酸-精氨酸 (IR) 尾是贡献基序。胰蛋白酶水解TAME，其Km值为0.328 mM。 TAME 可使 ATP 的水解速度加快 12 倍。通过胍基和芳香环，TAME 与 β 和 γ 磷酸盐以及 ATP 的腺嘌呤环相互作用。 TAME 可抑制枯草芽孢杆菌中 600 MPa 压力诱导的发芽和浓度 50 mM 营养诱导的发芽。在回肠试纸上，TAME 会引起浓度依赖性收缩反应，EC50 为 4.3 x 10 3 M。
APC/C泛素连接酶活性实验：将纯化的重组人APC/C（由Cdc20激活）与E1、E2（UbcH10）、泛素、ATP和cyclin B1（底物）在实验缓冲液中于30°C孵育90分钟。加入浓度为0.1-50 μM的 TAME，Western blot检测泛素化cyclin B1，定量多聚泛素化条带强度以计算IC50值 [1] - 泛素链延长实验：将重组APC/C-Cdc20复合物与E1、E2、泛素、ATP和securin（底物）在 TAME（0.5-20 μM）存在下于30°C孵育60分钟。SDS-PAGE分离泛素化securin产物，Western blot检测以分析泛素链长度 [2] - E3连接酶选择性实验：将重组SCFβ-TrCP和MDM2与各自底物、E1、E2、泛素、ATP和 TAME（0.1-20 μM）在最适条件下孵育。Western blot检测泛素化活性以评估选择性 [1] |
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| 细胞实验 |
为了防止有丝分裂爪蟾卵母细胞中 APC 依赖性蛋白水解，TAME 与 Cdc20 C 末端 IR 尾部竞争 APC 结合。此外，TAME 通过提前停止泛素化来稳定细胞周期蛋白 B1。它抑制未修饰的细胞周期蛋白 B1 的第一轮泛素化。当 TAME 存在时，未泛素化的细胞周期蛋白 B1 无法促进 Cdc20 与 APC 结合。
抗增殖实验：将癌细胞系（HCT116、HeLa、U2OS、A549、MDA-MB-231）以4×10³个/孔接种到96孔板中，培养24小时。加入浓度为0.5-50 μM的 TAME，孵育72小时。MTT法评估细胞活力，推导IC50值 [1] - 有丝分裂停滞实验：将HCT116细胞以2×10⁵个/孔接种到6孔板中，用 TAME（5 μM）处理16小时。固定细胞后，用磷酸化组蛋白H3（pH3）抗体（有丝分裂标志物）和DAPI染色，免疫荧光显微镜分析量化有丝分裂细胞。Western blot检测cyclin B1和securin水平 [1] - 凋亡实验：用 TAME（8 μM）处理HeLa细胞24小时。膜联蛋白V-FITC/PI染色后流式细胞术分析凋亡细胞，荧光素酶试剂盒检测胱天蛋白酶-3/7活性 [1] - 细胞内泛素链分析：HeLa细胞转染FLAG标签的cyclin B1，随后用 TAME（10 μM）处理12小时。FLAG抗体免疫沉淀细胞裂解物，泛素抗体Western blot检测泛素化cyclin B1产物以分析链长度 [2] |
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| 动物实验 |
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
TAMe is an L-arginine ester that is methyl L-argininate in which one of the hydrogens attached to the alpha-nitrogen is substituted by a tosyl group. It is a L-arginine ester, a sulfonamide, a methyl ester and a member of guanidines.
Arginine derivative which is a substrate for many proteolytic enzymes. As a substrate for the esterase from the first component of complement, it inhibits the action of C(l) on C(4). TAME is a potent, selective inhibitor of the APC/C E3 ubiquitin ligase, a key regulator of mitotic progression and cell cycle exit [1] - Its mechanism of action involves binding to the APC/C-Cdc20 complex, inhibiting ubiquitin chain elongation on APC/C substrates (e.g., cyclin B1, securin), thereby stabilizing these proteins and inducing spindle checkpoint-dependent mitotic arrest [1][2] - Prolonged mitotic arrest induced by TAME leads to cancer cell apoptosis, making it a potential tool compound for studying APC/C function and mitotic regulation [1] - TAME does not cause spindle damage, distinguishing it from spindle poisons; its mitotic arrest is strictly dependent on a functional spindle assembly checkpoint [1] |
| 分子式 |
C14H22N4O4S
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|---|---|---|
| 分子量 |
342.41
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| 精确质量 |
342.136
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| CAS号 |
901-47-3
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| 相关CAS号 |
1784-03-8
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| PubChem CID |
1550286
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| 外观&性状 |
White to off-white solid
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
516.5±60.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
266.1±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.591
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| LogP |
0.77
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| tPSA |
142.75
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
503
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
S(C1C=CC(C)=CC=1)(=O)(=O)N[C@H](C(=O)OC)CCCNC(N)=N
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| InChi Key |
FKMJXALNHKIDOD-LBPRGKRZSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C14H22N4O4S/c1-10-5-7-11(8-6-10)23(20,21)18-12(13(19)22-2)4-3-9-17-14(15)16/h5-8,12,18H,3-4,9H2,1-2H3,(H4,15,16,17)/t12-/m0/s1
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| 化学名 |
methyl (2S)-5-(diaminomethylideneamino)-2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]pentanoate
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9205 mL | 14.6024 mL | 29.2048 mL | |
| 5 mM | 0.5841 mL | 2.9205 mL | 5.8410 mL | |
| 10 mM | 0.2920 mL | 1.4602 mL | 2.9205 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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COA
粤公网安备 44011102003439号
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