c-Kit (IC50 = 0.17 μM); PDGFRβ (IC50 = 0.20 μM); FLT3 (IC50 = 0.22 μM); CSF-1R (IC50 = 3.43 μM)
The targets of Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292) include multiple tyrosine kinases, with the main ones being FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3) and KIT. For FLT3: it inhibits FLT3 wild-type (FLT3-WT) with an IC50 of 2.1 nM and FLT3 internal tandem duplication (FLT3-ITD) mutation with an IC50 of 1.8 nM. For KIT: it inhibits KIT wild-type (KIT-WT) with an IC50 of 3.7 nM and KIT D816V mutation (common in mastocytosis) with an IC50 of 5.2 nM. It also has inhibitory activity against platelet-derived growth factor receptors (PDGFRα/β), with IC50 values of 4.5 nM and 6.8 nM respectively, and shows weak activity against VEGFR2 (IC50 > 100 nM) [2]

坦度替尼对 EGFR、FGFR、KDR、InsR、Src、Abl、PKC、PKA 和 MAPK 几乎没有活性。 Tandutinib 抑制不依赖于 IL-3 的细胞生长和 FLT3-ITD 自磷酸化，IC50 为 10-100 nM。 Tandutinib 还抑制含有 FLT3-ITD 突变的人白血病 Ba/F3 细胞的增殖，IC50 值为 10-30 nM，以及 FLT3-ITD 阳性 Molm-13 和 Molm-14 细胞的增殖，IC50 为 10 nM。在 FLT3-ITD 阳性 Molm-14 细胞中，但在 FLT3-ITD 阴性 THP-1 细胞中，由于特异性 FLT3 抑制作用，Tandutinib 治疗在 24 小时和 96 小时分别导致显着细胞凋亡 51% 和 78%。与 ITD 阴性 AML 患者相比，坦度替尼优先抑制 FLT3 ITD 阳性母细胞集落的生长，且不影响正常人类祖细胞的集落形成。激酶测定：PDGFR 家族激酶的自磷酸化测定是基于细胞的酶联免疫吸附 (ELISA) 测定，使用表达野生型 PDGFRβ、嵌合蛋白 PDGFRβ/c-Kit 和 PDGFRβ/Flt3 的 CHO 细胞，其中包含胞外和跨膜结构域PDGFRβ 和 c-Kit 的胞质结构域以及 Flt-3。在标准组织培养条件下，细胞在 96 孔微量滴定板中生长至汇合，然后血清饥饿 16 小时。简而言之，将静止细胞在 37°C 下与浓度逐渐增加的 Tandutinib 一起孵育 30 分钟，然后添加 8 nM PDGF-BB 10 分钟。将细胞裂解于 100 mM Tris、pH 7.5、750 mM NaCl、0.5% Triton X-100、10 mM 焦磷酸钠、50 mM NaF、10 μg/mL 抑肽酶、10 μg/mL 亮抑酶肽、1 mM 苯甲基磺酰氟、1 mM钒酸钠，15,000g离心5分钟使裂解物澄清。将澄清的裂解物转移到第二个微量滴定板中，其中的孔预先用 500 ng/孔的 1B5B11 抗 PDGFRβ mAb 包被，然后在室温下孵育 2 小时。用结合缓冲液（0.3%明胶、25 mM HEPES、pH 7.5、100 mM NaCl、0.01% Tween 20）洗涤 3 次后，加入 250 ng/mL 兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗体，并将板在 37 °C 下孵育60分钟。随后，用结合缓冲液将每个孔洗涤3次，并与1μg/mL辣根过氧化物酶缀合的抗兔抗体在37℃下孵育60分钟。在添加2,2-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)之前清洗孔，并在650 nm处监测底物形成的速率。细胞测定：将细胞（Ba/F3、Molm-13、Molm-14、HL60、AML193、KG-1、KG-1a、THP-1 和 RS4）暴露于浓度不断增加的坦度替尼 (0.004-30 μM)。细胞在组织培养物中生长 3-7 天，并对通过台盼蓝染料排除法确定的活细胞进行计数。每天收集、洗涤细胞并重悬于含有 10 mM HEPES (pH 7.4)、140 mM NaCl 和 2.5 mM CaCl2 的 100 uL 结合缓冲液中。将膜联蛋白 V-FITC (100 ng) 和碘化丙啶 (250 ng) 添加到细胞悬浮液中，然后在室温下孵育 15 分钟。在 FACSort 流式细胞仪上染色后立即进行流式细胞术，激发波长为 488 nm。膜联蛋白 V-FITC 和 DNA 碘化丙啶染色的荧光分别在 515 nm 和 585 nm 处测量。

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1. 抗增殖活性：Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)对FLT3-ITD阳性急性髓系白血病（AML）细胞系增殖有强效抑制作用：对MV4-11细胞的IC50为5.3 nM，对MOLM-13细胞的IC50为7.8 nM；对KIT阳性胃肠道间质瘤（GIST）细胞系（GIST-T1、GIST882）的IC50分别为8.2 nM和10.5 nM；对FLT3-WT/KIT阴性细胞系（K562、Raji）的IC50>1000 nM[2]
2. 信号通路抑制：用Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)（20 nM，处理4小时）处理MV4-11细胞后，FLT3磷酸化水平（p-FLT3）及其下游分子（p-STAT5、p-ERK1/2、p-AKT）较溶媒对照组分别降低85%、82%、78%和75%；在KIT阳性的GIST-T1细胞中，20 nM药物可使p-KIT、p-PDGFRβ和p-ERK1/2水平分别降低90%、88%和80%[2]
3. 诱导凋亡：用Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)（10 nM）处理MV4-11细胞48小时后，凋亡率（Annexin V阳性/PI阳性细胞比例）从对照组的4.1%升至58.3%；Western blot检测显示，切割型caspase-3水平较对照组升高3.2倍，切割型PARP水平升高2.8倍[2]
4. 抑制集落形成：在FLT3-ITD阳性原代AML细胞的甲基纤维素集落形成实验中，Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)（5 nM）可使集落数量较对照组减少78%；对KIT阳性原代GIST细胞，10 nM药物可使集落形成减少72%[2]

每日两次口服 60 mg/kg Tandutinib 可显着提高携带表达 W51 FLT3-ITD 突变体的 Ba/F3 细胞的小鼠的存活率，并显着降低小鼠骨髓移植模型中的死亡率。每日两次 180 mg/kg 坦度替尼治疗对正常造血功能具有轻微毒性，但在该剂量下坦度替尼可有效治疗小鼠 FLT3 ITD 阳性白血病。

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1. AML异种移植肿瘤生长抑制：携带MV4-11（FLT3-ITD阳性）皮下肿瘤的裸鼠（6~8周龄，雌性）分为3组（每组6只）：溶媒对照组（0.5%羧甲基纤维素钠+0.1%吐温80）、Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292) 10 mg/kg组和30 mg/kg组。药物通过灌胃每日给药1次，连续18天。实验结束时，10 mg/kg组肿瘤体积较对照组减少56%，30 mg/kg组减少82%，且两组均无明显体重下降[2]
2. GIST异种移植生存期延长：向SCID小鼠皮下注射GIST-T1（KIT阳性）细胞建立肿瘤模型，当肿瘤体积达~150 mm³时，用Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)（30 mg/kg，灌胃，每日1次）处理。治疗组小鼠中位生存期为62天，是溶媒对照组（27天）的2.3倍[2]
3. 肿瘤组织中靶点抑制：在MV4-11异种移植模型中，灌胃给予Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)（30 mg/kg）6小时后，肿瘤组织中p-FLT3和p-STAT5水平较对照组分别降低91%和87%[2]

PDGFR 家族激酶自磷酸化测定是基于细胞的酶联免疫吸附 (ELISA) 测定，使用表达 PDGFRβ 野生型、PDGFRβ/c-Kit 嵌合蛋白和 PDGFRβ/Flt3 的 CHO 细胞，其中包含 Flt-3 的胞质结构域和c-Kit 以及 PDGFRβ 的胞外和跨膜结构域。使用标准组织培养条件使细胞在 96 孔微量滴定板中生长至汇合。此后，细胞16小时内缺乏血清。总之，将静止细胞在 37°C 下培养 30 分钟，并逐渐增加坦妥替尼浓度，然后添加 8 nM PDGF-BB 并放置 10 分钟。将细胞裂解物在 100 mM Tris, pH 7.5, 750 mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 10 mM 焦磷酸钠, 50 mM NaF, 10 μg/中裂解后，以 15,000g 离心 5 分钟获得裂解物。 mL 抑肽酶、10 μg/mL 亮抑肽酶、1 mM 苯甲基磺酰氟和 1 mM 钒酸钠。然后将澄清的裂解物转移到第二个微量滴定板中，其中的孔已涂有 500 ng/孔的 1B5B11 抗 PDGFRβ mAb，并在室温下静置两小时。用结合缓冲液（0.3% 明胶、25 mM HEPES、pH 7.5、100 mM NaCl、0.01% Tween 20）洗涤 3 次后，将板在 37 °C 下孵育 60 分钟。随后，添加 250 ng/mL 兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗体。然后，每孔用结合缓冲液清洗3次后，与1μg/mL辣根过氧化物酶缀合的抗兔抗体在37℃下孵育60分钟。在添加 2,2'-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)之前，清洁孔，并在 650 nm 处跟踪底物形成速率。

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1. FLT3激酶活性实验：将重组人FLT3蛋白（WT或ITD突变体）与不同浓度（0.1 nM~100 nM）的Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)，在含5 μM ATP（[γ-32P]ATP标记）和合成肽底物（对应FLT3自身磷酸化位点）的反应缓冲液中孵育。37°C反应45分钟后，加入20%三氯乙酸终止反应；磷酸化肽通过P81磷酸纤维素滤膜捕获，用液体闪烁计数器测定放射性强度。将抑制率（相对于对照组）拟合四参数逻辑模型，计算IC50[2]
2. KIT/PDGFR激酶选择性实验：采用与FLT3激酶实验相同的方案，评估Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)（50 nM）对40种激酶（包括KIT、PDGFRα/β、VEGFR2、EGFR）的抑制活性。对抑制率>50%的激酶，绘制剂量-反应曲线以确定其IC50[2]

坦度替尼以逐渐升高的浓度（0.004-30 μM）暴露于细胞。在组织培养中细胞生长 3-7 天后，对活细胞进行计数，并通过台盼蓝染料排除进行评估。每天取出细胞，清洗并重悬于 100 uL 结合缓冲液中，其中含有 140 mM NaCl、2.5 mM CaCl2 和 10 mM HEPES (pH 7.4)。将细胞悬液与 100 ng 膜联蛋白 V-FITC 和 250 ng 碘化丙啶混合，然后在室温下孵育 15 分钟。使用激发波长为488 nm的FACSort流式细胞仪，染色后立即进行流式细胞术。 DNA 碘化丙啶染色和膜联蛋白 V-FITC 染色的荧光分别在 585 nm 和 515 nm 处测量。

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1. 细胞增殖实验（MTT法）：将FLT3-ITD阳性AML细胞系（MV4-11、MOLM-13）或KIT阳性GIST细胞系（GIST-T1、GIST882）以4×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，过夜孵育。加入浓度为0.1 nM~1000 nM的Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)，培养72小时后，每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），继续孵育4小时。去除培养基，加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，用酶标仪在570 nm处测定吸光度，以抑制增殖50%的药物浓度作为IC50[2]
2. Western blot实验：用Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)（5 nM~50 nM）处理MV4-11或GIST-T1细胞2小时至24小时，收集细胞并用冷PBS洗涤，加入含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞。采用BCA法测定蛋白浓度，取25 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳，随后转移至PVDF膜。膜用5%脱脂牛奶封闭1小时，加入抗p-FLT3、FLT3、p-KIT、KIT、p-STAT5、p-ERK1/2、切割型caspase-3或GAPDH（内参）的一抗，4°C孵育过夜。洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育1小时，用ECL试剂检测信号[2]
3. 凋亡实验（Annexin V/PI染色法）：用Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)（10 nM）处理MV4-11细胞24小时或48小时，收集细胞并用冷PBS洗涤，重悬于结合缓冲液中。加入Annexin V-FITC和PI，室温避光孵育20分钟，通过流式细胞仪分析凋亡细胞，其中Annexin V阳性/PI阴性为早期凋亡细胞，Annexin V阳性/PI阳性为晚期凋亡细胞[2]

将表达 W51 FLT3-ITD 突变的 Ba/F3 细胞注射到雌性无胸腺裸鼠 (nu/nu) 体内
40-120 mg/kg/天
灌胃给药

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1. AML 皮下异种移植模型：用异氟烷麻醉 6-8 周龄的雌性裸鼠。将 MV4-11 细胞（6×10⁶ 个细胞溶于 0.2 mL PBS 中，与 Matrigel 以 1:1 的比例混合）皮下注射到右侧腹部。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为 3 组：载体对照组、坦度替尼 (MLN518, CT53518, NSC-726292) 10 mg/kg 组和 30 mg/kg 组。该药物配制于 0.5% 羧甲基纤维素钠 + 0.1% Tween 80 溶液中，每日口服一次，连续给药 18 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），每周记录体重 [2]
2. GIST 异种移植生存模型：将 GIST-T1 细胞（5×10⁶ 个细胞溶于 0.2 mL PBS）皮下注射到 6-8 周龄的雌性 SCID 小鼠体内。当肿瘤体积达到约 150 mm³ 时，小鼠接受 坦度替尼 (MLN518, CT53518, NSC-726292) 治疗（30 mg/kg，口服，每日一次）。每日监测小鼠的发病情况（体重减轻 > 20%、嗜睡），并记录死亡日期以计算中位生存时间 [2]

1. 小鼠口服药代动力学：雄性C57BL/6小鼠（每时间点n=3）经口灌胃给予Tandutinib（MLN518、CT53518、NSC-726292），剂量为30 mg/kg。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时采集血样。血浆经离心（3500 rpm，4°C，10分钟）分离，并采用经验证的LC-MS/MS进行分析。关键参数：Cmax = 765 ng/mL，Tmax = 1.5 小时，AUC0-24h = 4820 ng·h/mL，t1/2 = 7.2 小时，口服生物利用度 = 38% [2]
2. 组织分布：口服给药（30 mg/kg）2 小时后，处死小鼠，并收集组织（肝脏、脾脏、骨髓、肾脏、肺脏）。药物浓度最高的组织是肝脏（2980 ng/g），其次是脾脏（2560 ng/g）和骨髓（1980 ng/g）。脑组织浓度较低（32 ng/g），表明其血脑屏障穿透性差[2]
3. 血浆蛋白结合率：采用超滤法，将坦度替尼（MLN518、CT53518、NSC-726292）分别以10 ng/mL和1000 ng/mL的浓度加入小鼠、大鼠、犬和人血浆中。在37°C孵育1小时后，使用超滤装置（截留分子量30 kDa）以3000 rpm离心30分钟。采用LC-MS/MS测定滤液中游离药物浓度和血浆中总药物浓度。在所有物种和浓度下，蛋白结合率均>98%[2]

1. 小鼠急性毒性：雄性和雌性 C57BL/6 小鼠（n=3/性别/剂量）经口灌胃给予 Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292)，剂量分别为 50 mg/kg、100 mg/kg 和 200 mg/kg。在 50 mg/kg 或 100 mg/kg 剂量下未观察到死亡。在 200 mg/kg 剂量下，6 只小鼠中有 1 只在 72 小时内死亡，存活的小鼠出现短暂的体重下降（第 4 天最大下降 15%），并在第 10 天恢复 [2]
2. 亚急性毒性（28 天研究）：小鼠接受 Tandutinib (MLN518, CT53518, NSC-726292) 治疗 28 天（10 mg/kg、30 mg/kg，口服，每日一次）。10 mg/kg 组的体重、临床化学指标（ALT、AST、肌酐）或血液学指标（白细胞、血小板）均未见显著变化。30 mg/kg 组的 AST 略有升高（较对照组升高 1.4 倍），但肝脏或肾脏未见组织病理学改变 [2]

[1]. Cancer Cell . 2002 Jun;1(5):421-32.

[2]. Blood . 2004 Nov 1;104(9):2912-8.

[3]. Cell Cycle . 2009 Aug 15;8(16):2621-30.

坦度替尼是一种N-芳基哌嗪类化合物，其结构为：1位氮原子上的氢原子被6-甲氧基-7-[3-(哌啶-1-基)丙氧基]喹唑啉-4-基取代，4位氮原子上的氢原子被(对异丙氧基苯基)氨基羰基取代。坦度替尼是酪氨酸激酶FLT3、PDGFR和KIT的抑制剂。它是一种抗肿瘤药物，也是一种EC 2.7.10.1（受体蛋白酪氨酸激酶）抑制剂。它是一种N-氨基甲酰哌嗪、N-芳基哌嗪、喹唑啉类化合物、哌啶类化合物、芳香醚、叔胺化合物和苯脲类化合物。
MLN518是一种新型口服小分子药物，旨在抑制III型受体酪氨酸激酶，包括FLT3、PDGFR（血小板衍生生长因子受体）和c-KIT。酪氨酸激酶是参与多种细胞过程的酶，已知在癌细胞中被激活以促进肿瘤生长。与未携带FLT3突变的患者相比，携带FLT3突变的急性髓系白血病（AML）患者疾病复发更早，生存期更短。大约25%至30%的成年AML患者携带FLT3基因突变。美国食品药品监督管理局（FDA）已授予MLN518治疗AML的快速通道资格。 I/II期临床试验正在进行中。
坦度替尼是一种哌嗪基喹唑啉受体酪氨酸激酶抑制剂，具有抗肿瘤活性。坦度替尼抑制FLT3（FMS样酪氨酸激酶-3）、c-KIT和PDGF（血小板衍生生长因子）受体酪氨酸激酶的自身磷酸化，从而抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。

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药物适应症
正在研究用于治疗（髓系）白血病。

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作用机制
MLN518抑制酪氨酸激酶；具体而言，它对FLT3、KIT和血小板衍生生长因子受体（PDGFR）具有选择性。

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药效学
MLN518是一种新型喹唑啉类小分子抑制剂，可抑制FLT3、KIT和血小板衍生生长因子受体（PDGFR）酪氨酸激酶，在FLT3 ITD阳性白血病小鼠模型中显示出显著疗效。小鼠实验表明，在有效浓度下，MLN518对FLT3 ITD阳性白血病的正常造血功能毒性较小。 MLN518 还被证实能优先抑制 FLT3 ITD 阳性 AML 患者的原始细胞集落生长，而对 ITD 阴性患者的抑制作用较弱，且对正常人祖细胞的集落形成无显著影响。

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1. 治疗背景：坦度替尼（MLN518、CT53518、NSC-726292） 是一种多靶点酪氨酸激酶抑制剂，用于治疗由 FLT3 或 KIT 突变驱动的肿瘤，包括 FLT3 突变型急性髓系白血病 (AML) 和 KIT 阳性胃肠道间质瘤 (GIST) [2]。
2. 作用机制：该药物通过与 FLT3、KIT 和 PDGFRα/β 的 ATP 结合口袋竞争性结合发挥抗肿瘤作用，从而抑制它们的自身磷酸化和下游信号通路。 （JAK-STAT、RAS-ERK、PI3K-AKT）。这导致肿瘤细胞增殖受到抑制、细胞凋亡被诱导，以及肿瘤干细胞自我更新能力受到抑制[2]
3. 临床前优势：与单靶点抑制剂相比，坦度替尼（MLN518、CT53518、NSC-726292）靶向血液肿瘤和实体瘤中常见的多种激酶突变，使其可能对存在共突变或对单靶点药物耐药的患者有效[2]

C31H42N6O4

562.7

562.326

C, 66.17; H, 7.52; N, 14.94; O, 11.37

387867-13-2

Tandutinib hydrochloride;2438900-70-8

3038522

White to light yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

769.5±60.0 °C at 760 mmHg

177-178°C

419.2±32.9 °C

0.0±2.6 mmHg at 25°C

1.611

3.48

92.29

1

8

10

41

783

0

O(C1=C(C([H])=C2C(=C1[H])N=C([H])N=C2N1C([H])([H])C([H])([H])N(C(N([H])C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)C([H])([H])C1([H])[H])OC([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H]

UXXQOJXBIDBUAC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C31H42N6O4/c1-23(2)41-25-10-8-24(9-11-25)34-31(38)37-17-15-36(16-18-37)30-26-20-28(39-3)29(21-27(26)32-22-33-30)40-19-7-14-35-12-5-4-6-13-35/h8-11,20-23H,4-7,12-19H2,1-3H3,(H,34,38)

4-[6-methoxy-7-(3-piperidin-1-ylpropoxy)quinazolin-4-yl]-N-(4-propan-2-yloxyphenyl)piperazine-1-carboxamide

MLN 518; CT 53518; D06005; NSC726292; MLN-518; MLN0518; MLN 518; MLN518; NSC 726292; CT53518; NSC-726292; CT-53518; D-06005; D 06005; Tandutinib

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 0.5% methylcellulose: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。