c-Kit (IC50 = 0.17 μM); PDGFRβ (IC50 = 0.20 μM); FLT3 (IC50 = 0.22 μM); CSF-1R (IC50 = 3.43 μM)

体外活性：坦度替尼对 EGFR、FGFR、KDR、InsR、Src、Abl、PKC、PKA 和 MAPK 几乎没有活性。 Tandutinib 抑制不依赖于 IL-3 的细胞生长和 FLT3-ITD 自磷酸化，IC50 为 10-100 nM。 Tandutinib 还抑制含有 FLT3-ITD 突变的人白血病 Ba/F3 细胞的增殖，IC50 值为 10-30 nM，以及 FLT3-ITD 阳性 Molm-13 和 Molm-14 细胞的增殖，IC50 为 10 nM。在 FLT3-ITD 阳性 Molm-14 细胞中，但在 FLT3-ITD 阴性 THP-1 细胞中，由于特异性 FLT3 抑制作用，Tandutinib 治疗在 24 小时和 96 小时分别导致显着细胞凋亡 51% 和 78%。与 ITD 阴性 AML 患者相比，坦度替尼优先抑制 FLT3 ITD 阳性母细胞集落的生长，且不影响正常人类祖细胞的集落形成。激酶测定：PDGFR 家族激酶的自磷酸化测定是基于细胞的酶联免疫吸附 (ELISA) 测定，使用表达野生型 PDGFRβ、嵌合蛋白 PDGFRβ/c-Kit 和 PDGFRβ/Flt3 的 CHO 细胞，其中包含胞外和跨膜结构域PDGFRβ 和 c-Kit 的胞质结构域以及 Flt-3。在标准组织培养条件下，细胞在 96 孔微量滴定板中生长至汇合，然后血清饥饿 16 小时。简而言之，将静止细胞在 37°C 下与浓度逐渐增加的 Tandutinib 一起孵育 30 分钟，然后添加 8 nM PDGF-BB 10 分钟。将细胞裂解于 100 mM Tris、pH 7.5、750 mM NaCl、0.5% Triton X-100、10 mM 焦磷酸钠、50 mM NaF、10 μg/mL 抑肽酶、10 μg/mL 亮抑酶肽、1 mM 苯甲基磺酰氟、1 mM钒酸钠，15,000g离心5分钟使裂解物澄清。将澄清的裂解物转移到第二个微量滴定板中，其中的孔预先用 500 ng/孔的 1B5B11 抗 PDGFRβ mAb 包被，然后在室温下孵育 2 小时。用结合缓冲液（0.3%明胶、25 mM HEPES、pH 7.5、100 mM NaCl、0.01% Tween 20）洗涤 3 次后，加入 250 ng/mL 兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗体，并将板在 37 °C 下孵育60分钟。随后，用结合缓冲液将每个孔洗涤3次，并与1μg/mL辣根过氧化物酶缀合的抗兔抗体在37℃下孵育60分钟。在添加2,2-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)之前清洗孔，并在650 nm处监测底物形成的速率。细胞测定：将细胞（Ba/F3、Molm-13、Molm-14、HL60、AML193、KG-1、KG-1a、THP-1 和 RS4）暴露于浓度不断增加的坦度替尼 (0.004-30 μM)。细胞在组织培养物中生长 3-7 天，并对通过台盼蓝染料排除法确定的活细胞进行计数。每天收集、洗涤细胞并重悬于含有 10 mM HEPES (pH 7.4)、140 mM NaCl 和 2.5 mM CaCl2 的 100 uL 结合缓冲液中。将膜联蛋白 V-FITC (100 ng) 和碘化丙啶 (250 ng) 添加到细胞悬浮液中，然后在室温下孵育 15 分钟。在 FACSort 流式细胞仪上染色后立即进行流式细胞术，激发波长为 488 nm。膜联蛋白 V-FITC 和 DNA 碘化丙啶染色的荧光分别在 515 nm 和 585 nm 处测量。

每日两次口服 60 mg/kg Tandutinib 可显着提高携带表达 W51 FLT3-ITD 突变体的 Ba/F3 细胞的小鼠的存活率，并显着降低小鼠骨髓移植模型中的死亡率。每日两次 180 mg/kg 坦度替尼治疗对正常造血功能具有轻微毒性，但在该剂量下坦度替尼可有效治疗小鼠 FLT3 ITD 阳性白血病。

PDGFR 家族激酶自磷酸化测定是基于细胞的酶联免疫吸附 (ELISA) 测定，使用表达 PDGFRβ 野生型、PDGFRβ/c-Kit 嵌合蛋白和 PDGFRβ/Flt3 的 CHO 细胞，其中包含 Flt-3 的胞质结构域和c-Kit 以及 PDGFRβ 的胞外和跨膜结构域。使用标准组织培养条件使细胞在 96 孔微量滴定板中生长至汇合。此后，细胞16小时内缺乏血清。总之，将静止细胞在 37°C 下培养 30 分钟，并逐渐增加坦妥替尼浓度，然后添加 8 nM PDGF-BB 并放置 10 分钟。将细胞裂解物在 100 mM Tris, pH 7.5, 750 mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 10 mM 焦磷酸钠, 50 mM NaF, 10 μg/中裂解后，以 15,000g 离心 5 分钟获得裂解物。 mL 抑肽酶、10 μg/mL 亮抑肽酶、1 mM 苯甲基磺酰氟和 1 mM 钒酸钠。然后将澄清的裂解物转移到第二个微量滴定板中，其中的孔已涂有 500 ng/孔的 1B5B11 抗 PDGFRβ mAb，并在室温下静置两小时。用结合缓冲液（0.3% 明胶、25 mM HEPES、pH 7.5、100 mM NaCl、0.01% Tween 20）洗涤 3 次后，将板在 37 °C 下孵育 60 分钟。随后，添加 250 ng/mL 兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗体。然后，每孔用结合缓冲液清洗3次后，与1μg/mL辣根过氧化物酶缀合的抗兔抗体在37℃下孵育60分钟。在添加 2,2'-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)之前，清洁孔，并在 650 nm 处跟踪底物形成速率。

坦度替尼以逐渐升高的浓度（0.004-30 μM）暴露于细胞。在组织培养中细胞生长 3-7 天后，对活细胞进行计数，并通过台盼蓝染料排除进行评估。每天取出细胞，清洗并重悬于 100 uL 结合缓冲液中，其中含有 140 mM NaCl、2.5 mM CaCl2 和 10 mM HEPES (pH 7.4)。将细胞悬液与 100 ng 膜联蛋白 V-FITC 和 250 ng 碘化丙啶混合，然后在室温下孵育 15 分钟。使用激发波长为488 nm的FACSort流式细胞仪，染色后立即进行流式细胞术。 DNA 碘化丙啶染色和膜联蛋白 V-FITC 染色的荧光分别在 585 nm 和 515 nm 处测量。

Female athymic nude (nu/nu) mice injected with Ba/F3 cells expressing W51 FLT3-ITD mutant
40-120 mg/kg/day
Orally by gavage

[1]. Cancer Cell . 2002 Jun;1(5):421-32.

[2]. Blood . 2004 Nov 1;104(9):2912-8.

[3]. Cell Cycle . 2009 Aug 15;8(16):2621-30.

Tandutinib is an N-arylpiperazine that is piperazine in which the hydrogen attached to the nitrogen at position 1 is replaced by a 6-methoxy-7-[3-(piperidin-1-yl)propoxy]quinazolin-4-yl group, while the hydrogen attached to the nitrogen at position 4 is replaced by a (p-isopropoxyphenyl)aminocarbonyl group. Tandutinib is an inhibitor of tyrosine kinases FLT3, PDGFR and KIT. It has a role as an antineoplastic agent and an EC 2.7.10.1 (receptor protein-tyrosine kinase) inhibitor. It is a N-carbamoylpiperazine, a N-arylpiperazine, a member of quinazolines, a member of piperidines, an aromatic ether, a tertiary amino compound and a member of phenylureas.
MLN518 is a novel, oral, small molecule designed to inhibit type III receptor tyrosine kinases, including FLT3, (platelet-derived growth-factor receptor) PDGFR and c-KIT. Tyrosine kinases are enzymes involved in several cellular processes and are known to be activated in cancer cells to drive tumor growth. AML patients with FLT3 mutations experience earlier disease relapse and shorter survival rates compared to patients without these mutations. Approximately 25 to 30 percent of all adult AML patients have a mutation of the FLT3 gene. The use of MLN518 to treat AML has been granted fast-track status by the U.S. Food and Drug Administration. Phase I/II trials are underway.
Tandutinib is a piperazinyl quinazoline receptor tyrosine kinase inhibitor with antineoplastic activity. Tandutinib inhibits the autophosphorylation of FLT3 (FMS-Like Tyrosine kinase-3), c-KIT and PDGF (platelet-derived growth factor) receptor tyrosine kinases, thereby inhibiting cellular proliferation and inducing apoptosis.

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Drug Indication
Investigated for use/treatment in leukemia (myeloid).

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Mechanism of Action
MLN518 inhibits tyrosine kinases; Specifically, it is selective for FLT3, KIT, and platelet-derived growth-factor receptor (PDGFR).

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Pharmacodynamics
MLN518 is a novel quinazoline-based small molecule inhibitor of the FLT3, KIT, and platelet-derived growth-factor receptor (PDGFR) tyrosine kinases with that has been shown to have great efficacy in murine models of FLT3 ITD-positive leukemia. Experiments with mice demonstrate that at effective concentrations, MLN518 has mild toxicity toward normal hematopoiesis for FLT3 ITD-positive leukemia. MLN518 has also been shown to preferentially inhibit the growth of blast colonies from FLT3 ITD-positive as compared to ITD-negative patients with AML, without significantly affecting colony formation by normal human progenitor cells.

C31H42N6O4

562.7

562.326

C, 66.17; H, 7.52; N, 14.94; O, 11.37

387867-13-2

Tandutinib hydrochloride;2438900-70-8

3038522

White to light yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

769.5±60.0 °C at 760 mmHg

177-178°C

419.2±32.9 °C

0.0±2.6 mmHg at 25°C

1.611

3.48

92.29

1

8

10

41

783

0

O(C1=C(C([H])=C2C(=C1[H])N=C([H])N=C2N1C([H])([H])C([H])([H])N(C(N([H])C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)C([H])([H])C1([H])[H])OC([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H]

UXXQOJXBIDBUAC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C31H42N6O4/c1-23(2)41-25-10-8-24(9-11-25)34-31(38)37-17-15-36(16-18-37)30-26-20-28(39-3)29(21-27(26)32-22-33-30)40-19-7-14-35-12-5-4-6-13-35/h8-11,20-23H,4-7,12-19H2,1-3H3,(H,34,38)

4-[6-methoxy-7-(3-piperidin-1-ylpropoxy)quinazolin-4-yl]-N-(4-propan-2-yloxyphenyl)piperazine-1-carboxamide

MLN 518; CT 53518; D06005; NSC726292; MLN-518; MLN0518; MLN 518; MLN518; NSC 726292; CT53518; NSC-726292; CT-53518; D-06005; D 06005; Tandutinib

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 0.5% methylcellulose: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。