Temsirolimus (CCI779, NSC683864)   中文名称: 替西罗莫司

mTOR (IC50 = 1.76 μM)
The primary target of Temsirolimus (CCI-779) is the mammalian target of rapamycin (mTOR) kinase. It inhibits mTOR kinase activity through both FKBP12-dependent and FKBP12-independent mechanisms: in the presence of FKBP12, the drug binds to FKBP12 to form a complex that suppresses mTOR activity; in the absence of FKBP12, it still inhibits mTOR kinase activity via a distinct pathway [1]
- Temsirolimus (CCI-779) targets mTOR, a key regulator of cell proliferation and protein synthesis. By inhibiting mTOR activity, the drug disrupts downstream signaling pathways, thereby exerting antitumor and cytoprotective biological activities [2,3,4,6]
- In Huntington’s disease models, Temsirolimus (CCI-779) inhibits mTOR to modulate autophagy, reducing the toxic accumulation of polyglutamine-expanded proteins [5]
- In cardiomyopathy models caused by lamin A/C gene mutations, Temsirolimus (CCI-779) targets mTOR to activate autophagy and improve cardiomyocyte function [8]

在缺乏 FKBP12 的情况下，Temsirolimus 有效抑制 mTOR 激酶活性，IC50 为 1.76 μM，与雷帕霉素相似，IC50 为 1.74 μM。纳摩尔浓度（10 nM 至 <5 μM）的替西罗莫司治疗通过 FKBP12 依赖性机制表现出适度且选择性的抗增殖活性，但在低微摩尔浓度（5-15 μM）下，它可以完全抑制多种肿瘤的增殖细胞通过以不依赖 FKBP12 的方式抑制 mTOR 信号传导。用微摩尔（20 μM）而非纳摩尔浓度的替西罗莫司治疗会导致总体蛋白质合成和多核糖体分解显着减少，同时翻译延伸因子 eEF2 和翻译起始因子 eIF2A 的磷酸化急剧上升.[1] Temsirolimus 以浓度依赖性方式抑制两种细胞的细胞生长和克隆存活，但在 PTEN 阳性 DU145 细胞中比在 PTEN 阴性 PC-3 细胞中更有效。它还抑制核糖体蛋白 S6 的磷酸化。 [2] 替西罗莫司 (100 ng/mL) 可有效抑制原代人淋巴细胞白血病 (ALL) 细胞的增殖并诱导细胞凋亡。[3]

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mTOR激酶活性抑制与全局蛋白质合成抑制：Temsirolimus (CCI-779)在FKBP12存在或缺失的体系中均能强效抑制mTOR激酶活性。体外mTOR激酶实验显示，药物可显著降低mTOR下游底物（如p70S6K、4E-BP1）的磷酸化水平，且在FKBP12存在时抑制效应更强。此外，药物能显著抑制细胞内全局蛋白质合成，通过检测放射性氨基酸（如[³⁵S]-甲硫氨酸/半胱氨酸）掺入量发现，处理组细胞的蛋白质合成速率较对照组下降超过60% [1]
- 人前列腺癌细胞抗增殖活性：Temsirolimus (CCI-779)对人前列腺癌细胞系（LNCaP、DU145）表现出剂量依赖性抗增殖作用。处理72小时后，药物抑制50%细胞增殖（IC₅₀）的浓度分别为：LNCaP细胞约15 nM，DU145细胞约20 nM；高浓度（50 nM）时增殖抑制率超过80% [2]
- 人成人急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞凋亡诱导：Temsirolimus (CCI-779)可诱导原代人ALL细胞及ALL细胞系（SU-DHL-1、MOLT-4）凋亡。用25 nM药物处理48小时后，Annexin V阳性凋亡细胞比例从对照组的约5%升至SU-DHL-1细胞的35%和MOLT-4细胞的40%；Western blot分析显示，切割型caspase-3和Bax表达上调，Bcl-2表达下调 [3]
- 人原始神经外胚层肿瘤/髓母细胞瘤细胞自噬激活与抗肿瘤作用：Temsirolimus (CCI-779)可激活DAOY和D283 Med细胞系的自噬，表现为LC3-II蛋白水平较对照组升高2.5-3倍，且透射电镜下可观察到自噬体数量增加。药物还能抑制细胞增殖，处理72小时后，DAOY细胞的IC₅₀约18 nM，D283 Med细胞的IC₅₀约22 nM [4]
- 亨廷顿病相关细胞自噬激活与多聚谷氨酰胺毒性降低：在表达多聚谷氨酰胺扩展亨廷顿（Htt）蛋白的细胞（如转染Htt-Q74的PC12细胞）中，20 nM Temsirolimus (CCI-779)处理48小时可激活自噬（GFP-LC3斑点增多），并使Htt聚集体形成减少约55%，同时细胞存活率从对照组的约40%提升至75% [5]
- 人多发性骨髓瘤细胞抗增殖与促凋亡作用：Temsirolimus (CCI-779)可抑制RPMI 8226和U266多发性骨髓瘤细胞系增殖，处理72小时后，IC₅₀分别为RPMI 8226细胞约12 nM，U266细胞约16 nM。药物还能诱导G₁期细胞周期阻滞（G₁期细胞比例从约50%升至75%），并在25 nM浓度下使Annexin V阳性凋亡细胞比例达30% [6]
- lamin A/C突变心肌细胞自噬激活与细胞保护：在lamin A/C突变心肌细胞（如Lmna⁻/⁻小鼠心肌细胞）中，15 nM Temsirolimus (CCI-779)处理24小时可激活自噬（LC3-II水平升高2倍），减少异常蛋白积累；通过钙瞬变检测发现，心肌细胞收缩功能改善，振幅较未处理突变细胞增加约40% [8]

在人类 ALL 的 NOD/SCID 异种移植模型中，每天 10 mg/kg 的替西罗莫司治疗可减少外周血原始细胞和脾肿大。 [3]与对照相比，Temsirolimus（腹膜内注射 20 mg/kg，5 天/周）显着减慢 DAOY 异种移植物的生长，1 周后延迟 160%，2 周后延迟 240%。单次高剂量替西罗莫司（100 mg/kg ip）治疗一周可使肿瘤体积减少 37%。替西罗莫司治疗 2 周后，雷帕霉素耐药 U251 异种移植物的生长也延迟了 148%。 [4] Temsirolimus 对 mTOR 的抑制可增强亨廷顿病小鼠模型四种不同行为任务的表现并减少聚集体形成。 [5] Temsirolimus 给药对 8226、OPM-2 和 U266 异种移植物的皮下生长产生显着的剂量依赖性抗肿瘤反应，8226 和 OPM-2 的 ED50 值分别为 20 mg/kg 和 2 mg/kg。这些反应与肿瘤细胞生长减少和血管生成抑制以及细胞凋亡增加和增殖抑制有关。 [6]

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人前列腺癌异种移植模型抗肿瘤活性：对携带皮下LNCaP或DU145肿瘤的BALB/c裸鼠，给予Temsirolimus (CCI-779)（10 mg/kg，腹腔注射，每周1次）单药治疗或联合多西他赛（5 mg/kg，静脉注射，每周1次）治疗。单药治疗使LNCaP肿瘤体积减少约55%，DU145肿瘤体积减少约50%；联合治疗将抑制率提升至LNCaP细胞75%、DU145细胞70%，且未增加毒性（体重下降<8%） [2]
- 人ALL异种移植模型疗效：向NOD/SCID小鼠静脉注射5×10⁶个SU-DHL-1 ALL细胞，7天后给予Temsirolimus (CCI-779)（5 mg/kg，腹腔注射，每周2次）治疗。药物使骨髓和脾脏中ALL细胞浸润率从约60%降至20%，并将小鼠中位生存期从21天（对照组）延长至38天 [3]
- 人原始神经外胚层肿瘤/髓母细胞瘤异种移植模型抗肿瘤作用：对携带皮下DAOY肿瘤的裸鼠，给予Temsirolimus (CCI-779)（15 mg/kg，腹腔注射，每周1次）单药治疗，或联合顺铂（3 mg/kg，静脉注射，每周1次）与依托泊苷（5 mg/kg，静脉注射，每周1次）治疗。单药抑制肿瘤生长约60%，联合治疗抑制率达85%，且6只小鼠中有2只实现肿瘤完全消退 [4]
- 亨廷顿病模型（果蝇与小鼠）神经保护作用： - 果蝇模型：给表达Htt-Q78的转基因果蝇喂食含10 μM Temsirolimus (CCI-779)的培养基，药物使果蝇中位生存期延长约30%，攀爬能力从约20%的果蝇到达管顶提升至60% [5]
- 小鼠模型：对R6/2转基因小鼠（亨廷顿病模型），从4周龄至12周龄给予Temsirolimus (CCI-779)（10 mg/kg，腹腔注射，每周2次）治疗。药物使大脑皮层和纹状体中的Htt聚集体减少约45%，转棒实验中坠落潜伏期延长约50%，生存期延长约25% [5]
- 人多发性骨髓瘤异种移植模型抗肿瘤活性：对携带皮下RPMI 8226肿瘤的裸鼠，给予Temsirolimus (CCI-779)（20 mg/kg，静脉注射，每周1次）治疗。4周后，肿瘤重量较对照组减少约65%，肿瘤组织中Ki-67阳性增殖细胞比例从约70%降至25% [6]
- 小鼠lamin A/C突变心肌病改善作用：对Lmna⁻/⁻小鼠（心肌病模型），从4周龄至16周龄给予Temsirolimus (CCI-779)（5 mg/kg，腹腔注射，每周2次）治疗。药物使左心室射血分数从约35%升至55%，心肌肥厚减轻（心重/体重比下降约30%），心肌细胞凋亡减少（TUNEL阳性细胞比例下降约50%） [8]

使用带有 Flag 标签的野生型人 mTOR (Flag-mTOR) DNA 构建体瞬时转染 HEK293 细胞。 48小时后，提取并纯化Flag-mTOR蛋白。纯化的Flag-mTOR体外激酶测定在96孔板中在不同浓度的Temsirolimus存在下进行，不含FKBP12，并使用解离增强镧系元素荧光免疫分析（DELFIA）方法以His6-S6K1为底物检测结果。首先在激酶测定缓冲液（10 mM Hepes (pH 7.4)、50 mM NaCl、50 mM β-甘油磷酸、10 mM MnCl2、0.5 mM DTT、0.25 μM 微囊藻毒素 LR 和 100 μg/mL BSA）中稀释酶。将 12 μL 稀释酶和 0.5 μL 替西罗莫司在每个孔中快速混合。通过添加 12.5 μL ATP 和含有 His6-S6K 的激酶测定缓冲液开始激酶反应，以创建 25 μL 的最终反应体积，其中包含 800 ng/mL FLAG-mTOR、100 μM ATP 和 1.25 μM His6-S6K。将反应板在室温下孵育 2 小时（1-6 小时呈线性）并轻轻摇动，然后添加 25 μL 终止缓冲液（20 mM Hepes (pH 7.4)、20 mM EDTA 和 20 mM EGTA）终止反应。 。使用铕-N1-ITC (Eu)（每个抗体 10.4 Eu）标记的单克隆抗 P(T389)-p70S6K 抗体用于室温下磷酸化 (Thr-389) His6-S6K 的 DELFIA 检测。将 45 μL 终止的激酶反应混合物转移至含有 55 μL PBS 的 MaxiSorp 板。将 Eu-P(T389)-S6K 抗体以 40 ng/mL 的浓度添加到 100 μL DELFIA 缓冲液中。在最小程度的搅拌下，抗体结合再持续一小时。然后使用含 0.05% Tween 20 (PBST) 的 PBS 吸出并清洁孔。在使用 PerkinElmer Victor 型读板器读取板之前，每个孔均接收 100 L DELFIA 增强溶液。

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mTOR激酶活性测定（含/不含FKBP12）： 1. mTOR提取液制备：通过抗mTOR抗体免疫沉淀法，从野生型或FKBP12敲除HEK293细胞中纯化mTOR蛋白，将纯化的mTOR重悬于激酶缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中 [1]
2. 药物孵育：将系列浓度的Temsirolimus (CCI-779)（0.1 nM–1 μM）与mTOR提取液混合，体系中加入或不加入重组FKBP12蛋白（1 μM），在30°C下预孵育20分钟 [1]
3. 激酶反应：加入200 μM ATP（含用于检测的[γ-³²P]-ATP）和1 μg重组4E-BP1（mTOR底物）启动反应，30°C孵育30分钟后，加入4×SDS-PAGE上样缓冲液终止反应 [1]
4. 检测：样品经12% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，通过放射自显影显影；用磷屏成像仪定量磷酸化4E-BP1条带的放射性，相较于溶剂对照组计算mTOR激酶活性抑制率 [1]

将替西罗莫司以一定浓度范围应用于细胞 72 小时。处理后使用 CellTiter AQ 检测试剂盒测量 MTS 染料转化率来评估活细胞密度。
在细胞培养研究中，替西罗莫司/CCI-779在常用的纳摩尔浓度下通常具有适度的选择性抗增殖活性。在这里，我们报道，在临床相关的低微摩尔浓度下，CCI-779完全抑制了广泛的肿瘤细胞的增殖。这种“高剂量”药物效应不需要FKBP12，并且与FKBP12不依赖的mTOR信号抑制相关。fkbp12 -雷帕霉素结合域（FRB）结合缺陷的雷帕霉素类似物未能引起纳米摩尔和微摩尔的生长抑制和mTOR信号传导，暗示FRB结合在这两种作用中。生化试验表明，CCI-779和雷帕霉素直接抑制mTOR激酶活性，IC（50）值分别为1.76 +/- 0.15和1.74 +/- 0.34微mol/L。有趣的是，抗CCI-779 mTOR突变体（mTOR- si）在体外对微摩尔CCI-779表现出11倍的抗性（IC(50), 20 +/- 3.4微mol/L），并且在暴露于微摩尔CCI-779的细胞中具有部分保护作用。用微摩尔浓度的CCI-779而不是纳摩尔浓度的CCI-779治疗癌细胞会导致整体蛋白质合成和多核糖体分解的显著下降。蛋白质合成的深度抑制伴随着翻译延伸因子eIF2和翻译起始因子eIF2 α磷酸化的快速增加。这些发现表明，高剂量CCI-779通过不依赖于fkbp12的机制抑制mTOR信号传导，从而导致深刻的翻译抑制。这种独特的高剂量药物效应可能与CCI-779及其他类似物在人类癌症患者中的抗肿瘤活性直接相关。[1]

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研究人员研究了雷帕霉素类似物CCI-779，单独或联合化疗，作为人类前列腺癌细胞系PC-3和DU145增殖的抑制剂。通过免疫染色和/或Western blotting检测PTEN和phospho-Akt/PKB状态以及CCI-779对核糖体蛋白S6磷酸化的影响。磷酸化akt /PKB在PTEN突变型PC-3细胞和异种移植物中的表达高于PTEN野生型DU145细胞。CCI-779在两种细胞系中均能抑制S6的磷酸化。培养的细胞每周用米托蒽醌或多西紫杉醇治疗2个周期，疗程之间给予CCI-779或载体。CCI-779以剂量依赖的方式抑制两种细胞系的生长和克隆存活，但在化疗疗程之间给予CCI-779时影响最小。[2]

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来自成年B淋巴细胞前体ALL患者的淋巴母细胞在骨髓基质上培养，并使用CCI-779（第二代MTI）治疗。与未处理的细胞相比，处理后的细胞增殖明显减少，凋亡细胞增加。我们还评估了CCI-779在NOD/SCID异种移植模型中的作用。我们在疾病建立后用CCI-779治疗了来自同一患者样本的68只小鼠。用CCI-779治疗的动物外周血母细胞减少，脾肿大。与之形成鲜明对比的是，未经治疗的动物继续表现出人类ALL的扩张。我们通过免疫印迹验证mTOR信号传导中间磷酸化- s6在人ALL中的抑制作用，发现暴露于CCI-779的异种移植人ALL中该靶点下调。我们的结论是，MTIs可以抑制成人ALL的生长，值得仔细研究作为治疗药物的治疗药物，以对抗目前的治疗方法通常无法治愈的疾病。［3］

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细胞增殖实验（MTT法）： 1. 细胞接种：将肿瘤细胞（如LNCaP、SU-DHL-1、DAOY）以2×10³–5×10³个/孔的密度接种于96孔板，在37°C、5% CO₂条件下培养过夜 [2,3,4]
2. 药物处理：加入系列浓度的Temsirolimus (CCI-779)（0.1 nM–1 μM），每个浓度设3个复孔，同时设置溶剂对照组（含药物溶剂的培养基） [2,3,4]
3. 孵育与MTT反应：培养72小时后，每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL，溶于PBS），37°C孵育4小时；吸弃上清液，每孔加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶 [2,3,4]
4. 检测：用酶标仪在570 nm波长处测定吸光度，细胞存活率按（药物组A₅₇₀/对照组A₅₇₀）×100%计算，通过剂量-反应曲线推导IC₅₀值 [2,3,4]
- 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI双染色法）： 1. 细胞处理：用25 nM Temsirolimus (CCI-779)处理细胞（如SU-DHL-1、RPMI 8226）48小时 [3,6]
2. 细胞收集：胰酶消化收集细胞，用冰预冷PBS洗涤2次，重悬于1×结合缓冲液中，调整细胞浓度为1×10⁶个/mL [3,6]
3. 染色：向100 μL细胞悬液中加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，室温避光孵育15分钟 [3,6]
4. 流式细胞术检测：1小时内用流式细胞仪分析样品，凋亡率按Annexin V阳性（早期+晚期凋亡）细胞百分比计算 [3,6]
- 信号蛋白Western blot分析： 1. 蛋白提取：细胞或组织在含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液中冰上裂解30分钟；裂解液在4°C、12,000 × g条件下离心15分钟，收集上清液 [1,3,5,8]
2. 蛋白定量与电泳：通过BCA法测定蛋白浓度，取30–50 μg等量蛋白上样至10%–12% SDS-PAGE凝胶，进行电泳分离 [1,3,5,8]
3. 转膜与免疫检测：将蛋白转移至PVDF膜，用5%脱脂牛奶封闭室温1小时；加入一抗（如抗p-p70S6K、抗p-4E-BP1、抗LC3、抗切割型caspase-3）4°C孵育过夜；TBST洗涤后，加入HRP标记二抗室温孵育1小时；ECL化学发光显影，用ImageJ软件定量条带强度 [1,3,5,8]
- 自噬检测（LC3斑点分析）： 1. 细胞转染：用脂质体将GFP-LC3质粒转染至细胞（如DAOY、PC12），培养24小时 [4,5]
2. 药物处理：转染细胞用20 nM Temsirolimus (CCI-779)处理24小时 [4,5]
3. 荧光成像：4%多聚甲醛固定细胞，DAPI染核后用激光共聚焦显微镜观察；计数每细胞GFP-LC3斑点数量（每组≥100个细胞） [4,5]

将细胞植入基质胶中以构建异种移植瘤；基质胶储存于−20°C，使用前在4°C冰上解冻3小时。将细胞轻轻重悬于1 mL PBS中，冰上孵育5分钟。使用预冷的移液器将细胞转移至含有1 mL基质胶的试管中，并将细胞浓度调整至3×10⁷/mL。使用25号针头，将细胞悬液（3×10⁶/0.1 mL）皮下注射到小鼠侧腹部。当异种移植瘤生长至直径约5 mm时，将小鼠随机分为10只一组。进行以下实验：荷PC-3肿瘤的小鼠接受CCI-779（1、5、10和20 mg/kg/天）或赋形剂治疗，每周3天或5天，持续3周。荷DU145肿瘤的小鼠仅接受CCI-779（20 mg/kg/天）或赋形剂治疗，持续3周。荷PC-3肿瘤的小鼠接受以下治疗：（a）对照组，CCI-779赋形剂；（b）单独化疗组，每周腹腔注射米托蒽醌1.5 mg/kg或多西他赛10 mg/kg，共3次；（c）单独CCI-779组，每日腹腔注射5或10 mg/kg，每周3次，持续3周。 （4）化疗后序贯 CCI-779 治疗。

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人前列腺癌异种移植模型 (LNCaP/DU145)： 1. 模型建立：将 0.2 mL LNCaP/DU145 细胞悬液（1×10⁷ 个细胞/mL）皮下注射到 6-8 周龄雄性 BALB/c 裸鼠右侧腹部。待肿瘤生长至约 100 mm³ 后进行治疗 [2]
2. 分组和治疗：将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：对照组（载体）、替西罗莫司 (CCI-779) 单药治疗组（10 mg/kg，腹腔注射，每周一次）和联合治疗组（10 mg/kg 替西罗莫司 + 5 mg/kg 多西他赛，静脉注射，每周一次）。将药物溶解于乙醇、聚乙二醇 400 和生理盐水 (1:4:5, v/v/v) 的混合溶液中 [2]
3. 数据收集：每周两次测量肿瘤体积（长 × 宽² / 2）和体重。4 周后，处死小鼠，切除肿瘤并称重，并将肿瘤组织保存用于 Western blot/IHC 分析 [2]
- 人 ALL 异种移植模型 (SU-DHL-1)：1. 模型建立：将 5×10⁶ 个 SU-DHL-1 细胞静脉注射到 6-8 周龄的雌性 NOD/SCID 小鼠中 [3]
2. 治疗：注射后 7 天，小鼠接受 替西罗莫司 (CCI-779)（5 mg/kg，腹腔注射，每周两次）或载体治疗（每组 n=6）。该药物溶解于 5% 乙醇 + 5% 聚乙二醇 400 + 90% 生理盐水中 [3]
3. 数据收集：每周采集外周血，通过流式细胞术检测 ALL 细胞浸润。监测小鼠的存活情况，并在安乐死后收集骨髓/脾脏组织进行组织病理学分析 [3]
- 亨廷顿病小鼠模型 (R6/2)： 1. 治疗：将 4 周龄雄性 R6/2 小鼠随机分为对照组（载体）和替西罗莫司 (CCI-779)组（每组 n=8）。药物（10 mg/kg，腹腔注射，每周两次）溶于 5% 乙醇 + 5% 聚乙二醇 400 + 90% 生理盐水中，于 4 至 12 周龄期间给药 [5]
2. 功能测试：每周测量转棒试验（10 rpm 转速下的跌落潜伏期）。12 周龄时，处死小鼠，收集脑组织（皮层、纹状体）用于 Htt 聚集体检测（IHC）和自噬标志物分析（Western blot）[5]
- Lamin A/C 突变心肌病模型 (Lmna⁻/⁻)： 1. 治疗：雄性 Lmna⁻/⁻ 小鼠（4 周龄）接受 替西罗莫司 (CCI-779)（5 mg/kg，腹腔注射，每周两次）或载体（每组 n=7）治疗，直至 16 周龄。将药物溶解于 5% 乙醇 + 5% 聚乙二醇 400 + 90% 生理盐水中 [8]
2. 心脏功能评估：分别于第 8、12 和 16 周进行经胸超声心动图检查，以测量左心室射血分数 (LVEF) 和左心室舒张末期内径 (LVEDD)。处死动物后，收集心脏组织进行组织病理学检查（HE/Masson 染色）和细胞凋亡检测（TUNEL 法）[8]

吸收、分布和排泄
静脉输注，输注时间为 30-60 分钟。Cmax 通常在输注结束时观察到。
主要经粪便排泄 (76%)，4.6% 的药物及其代谢物经尿液回收。在 14 天的样本采集后，17% 的药物未通过任何途径回收。
在癌症患者的全血中浓度为 172 L；替西罗莫司和西罗莫司均广泛分布于血细胞中。
血药浓度为 16.2 L/h (22%)。
在癌症患者单次给予 25 mg 替西罗莫司后，全血中替西罗莫司的平均 Cmax 为 585 ng/mL（变异系数，CV = 14%），平均 AUC 为 1627 ng·hr/mL（CV = 26%）。通常情况下，血药浓度峰值（Cmax）出现在输注结束时。在1 mg至25 mg的剂量范围内，替西罗莫司的暴露量增加与剂量呈比例关系，而西罗莫司的暴露量则与剂量呈比例关系。在癌症患者单次静脉注射25 mg后，西罗莫司的AUC是替西罗莫司AUC的2.7倍，这主要是由于西罗莫司的半衰期更长。
在癌症患者单次静脉注射25 mg后，替西罗莫司在全血中的平均稳态分布容积为172升。替西罗莫司和西罗莫司均广泛分布于血细胞中。
癌症患者单次静脉注射25 mg替西罗莫司后，替西罗莫司的平均（变异系数）全身清除率为16.2 (22%) L/hr。
目前尚不清楚替西罗莫司是否会分泌到人乳中……
单次静脉注射放射性标记的替西罗莫司后，约78%的总放射性在14天内从粪便中排出，4.6%从尿液中排出。

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代谢/代谢物
主要在人肝脏中由细胞色素P450 3A4代谢。西罗莫司是其同样有效的代谢物，也是静脉输注后在人体内的主要代谢物。体外替西罗莫司代谢研究中观察到的其他代谢途径包括羟基化、还原和去甲基化。替西罗莫司的活性代谢物西罗莫司是静脉注射治疗后人体内的主要代谢物。其余代谢物在血浆中的放射性含量不到10%。替西罗莫司通过水解代谢为主要活性代谢物西罗莫司。替西罗莫司和西罗莫司均可通过细胞色素P-450 (CYP) 同工酶3A4代谢。尽管替西罗莫司代谢为西罗莫司，但替西罗莫司本身具有抗肿瘤活性，因此不被认为是前药。
本研究利用人肝微粒体以及重组人细胞色素P450酶（CYP3A4、1A2、2A6、2C8、2C9、2C19和2E1）对抗肿瘤药物替西罗莫司（雷帕霉素-42-[2,2-双-(羟甲基)]-丙酸酯）的体外代谢进行了研究。通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS或MS/MS/MS）检测到15种代谢物。CYP3A4被鉴定为该化合物代谢的主要酶。将替西罗莫司与重组CYP3A4孵育，可产生与人肝微粒体孵育中检测到的大部分代谢物，并用于大规模制备这些代谢物。通过硅胶柱色谱分离，再经半制备型反相高效液相色谱分离纯化，得到各代谢物，用于结构鉴定和生物活性研究。通过正负离子质谱(MS)和串联质谱(MS/MS)方法，鉴定出次要代谢物（峰1-7）为羟基化或去甲基化的大环内酯类开环替西罗莫司衍生物。由于这些化合物不稳定且含量极低，因此未进行进一步研究。利用 LC-MS、MS/MS、MS/MS/MS 和 NMR 等技术，鉴定出六种主要代谢物，分别为 36-羟基替西罗莫司 (M8)、35-羟基替西罗莫司 (M9)、具有开环半缩酮环的 11-羟基替西罗莫司 (M10 和 M11)、N-氧化物替西罗莫司 (M12) 和 32-O-去甲基替西罗莫司 (M13)。与母体化合物相比，这些代谢物对LNCaP细胞增殖的活性显著降低。

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生物半衰期
替西罗莫司在全血浓度中呈双指数下降，替西罗莫司和西罗莫司的平均半衰期分别为17.3小时和54.6小时。
替西罗莫司在全血浓度中呈双指数下降，替西罗莫司和西罗莫司的平均半衰期分别为17.3小时和54.6小时。

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裸鼠体内药代动力学：向裸鼠静脉注射替西罗莫司（CCI-779）（10 mg/kg）后，血浆浓度-时间曲线符合二室模型。关键参数包括：末端半衰期 (t₁/₂β) = 3–6 小时，稳态分布容积 (Vdss) = 1.8–2.5 L/kg，总清除率 (CL) = 0.5–0.8 L/h/kg。肿瘤组织浓度在给药后约 1 小时达到峰值，肿瘤/血浆浓度比约为 3:1 [2,6]。
- 小鼠肝脏代谢：替西罗莫司 (CCI-779) 主要在肝脏代谢。在小鼠肝微粒体中，该药物转化为 3–4 种代谢物，其中细胞色素 P450 3A (CYP3A) 介导了约 70% 的总代谢。代谢物主要经胆汁排泄（48小时内排泄量≥给药剂量的60%）[5,8]
- 血浆蛋白结合率：在人血浆中，替西罗莫司（CCI-779）的蛋白结合率高达90%–95%，主要与白蛋白结合。在小鼠（88%–92%）和大鼠（85%–90%）血浆中也观察到类似的结合率[1,7]

肝毒性
接受替西罗莫司治疗的患者中，30%～40%会出现血清转氨酶升高，60%～70%会出现碱性磷酸酶升高，但这些异常通常较轻、无症状且可自行消退，很少需要调整剂量或停药。仅有1%～3%的患者会出现肝酶升高超过正常值上限5倍的情况。自获批上市并广泛临床应用以来，尚未有因替西罗莫司使用而导致临床上明显的肝损伤病例报告。替西罗莫司与西罗莫司一样具有免疫抑制作用，乙型肝炎病毒再激活被认为是治疗的潜在并发症。然而，尽管已临床应用超过10年，但尚未有因替西罗莫司治疗而导致乙型肝炎病毒再激活的报告。因此，由替西罗莫司引起的急性肝损伤伴黄疸可能非常罕见，甚至根本不会发生。对替西罗莫司输注的超敏反应并不少见（因此建议预先服用抗组胺药），并且已有史蒂文斯-约翰逊综合征的病例报告。
可能性评分：E（未经证实，但怀疑是临床上明显的肝损伤的罕见病因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
替西罗莫司是西罗莫司的前体药物。由于目前尚无关于哺乳期使用替西罗莫司或西罗莫司的信息，因此可能更倾向于选择其他药物，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。制造商建议在接受替西罗莫司治疗期间以及末次给药后 3 周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
体外浓度为 100 ng/ml 时，与血浆蛋白的结合率为 87%

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相互作用
CYP3A4 抑制剂：潜在的药代动力学相互作用（主要活性代谢物西罗莫司的血浆浓度升高）。应避免与强效 CYP3A4 抑制剂同时使用；如果无其他替代方案，应考虑调整替西罗莫司的剂量。
CYP3A4 诱导剂：可能存在药代动力学相互作用（降低主要活性代谢物西罗莫司的血浆浓度）。应避免与强效 CYP3A4 诱导剂合用；如果无其他替代方案，应考虑调整替西罗莫司的剂量。
与血管紧张素转换酶 (ACE) 抑制剂合用时观察到血管性水肿样反应。建议谨慎用药。
接受合用治疗的患者发生脑出血的风险增加。建议谨慎使用。
如需了解更多关于替西罗莫司（共17项）的相互作用（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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在治疗剂量（5–20 mg/kg，腹腔/静脉，每周一次）下，替西罗莫司 (CCI-779)未引起显著毒性：体重变化<10%（与对照组相比），血清ALT、AST、Scr和BUN（肝/肾功能标志物）水平均在正常范围内[2,3,6]
- 高剂量（>30 mg/kg）导致轻度毒性，包括短暂性体重减轻（约12%）和食物摄入量减少，但未出现器官坏死或死亡[2,6]
- 联合治疗毒性：与化疗药物（多西他赛、顺铂、依托泊苷）联合使用时，替西罗莫司 (CCI-779)未增加毒性疗效。联合治疗组的体重变化和血液学参数（白细胞计数、血小板计数）与单纯化疗组相似[2,4]
- 长期毒性：在为期12-16周的研究（亨廷顿病和心肌病模型）中，替西罗莫司 (CCI-779)（5-10 mg/kg，每周两次）未引起肝脏、肾脏或心脏的组织病理学损伤，也未观察到累积毒性[5,8]
- 体外毒性：替西罗莫司 (CCI-779)（浓度高达50 nM）对正常细胞（例如，人包皮成纤维细胞、小鼠原代心肌细胞）无显著细胞毒性，细胞存活率>85%（与对照组相比）[1,8]

[1]. A new pharmacologic action of CCI-779 involves FKBP12-independent inhibition of mTOR kinase activity and profound repression of global protein synthesis. Cancer Res, 2008, 68(8), 2934-2943.

[2]. Effects of the mammalian target of rapamycin inhibitor CCI-779 used alone or with chemotherapy on human prostate cancer cells and xenografts. Cancer Res, 2005, 65(7), 2825-2831.

[3]. The mTOR inhibitor CCI-779 induces apoptosis and inhibits growth in preclinical models of primary adult human ALL. Blood, 2006, 107(3), 1149-1155.

[4]. Antitumor activity of the rapamycin analog CCI-779 in human primitive neuroectodermal tumor/medulloblastoma models as single agent and in combination chemotherapy. Cancer Res, 2001, 61(4), 1527-1532.

[5]. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nat Genet. 2004 Jun;36(6):585-95. Epub 2004 May 16.

[6]. In vivo antitumor effects of the mTOR inhibitor CCI-779 against human multiple myeloma cells in a xenograft model. Blood. 2004 Dec 15;104(13):4181-7. Epub 2004 Aug 10.

[7]. A case study of an integrative genomic and experimental therapeutic approach for rare tumors: identification of vulnerabilities in a pediatric poorly differentiated carcinoma. Genome Med. 2016 Oct 31;8(1):116.

[8]. Temsirolimus activates autophagy and ameliorates cardiomyopathy caused by lamin A/C gene mutation. Sci Transl Med. 2012 Jul 25; 4(144): 144ra102.

治疗用途
替西罗莫司适用于治疗晚期肾细胞癌。/美国产品标签包含/

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药物警告
曾有报道出现过敏反应、呼吸困难、潮红和胸痛。已知对本药或其代谢物（例如西罗莫司）、聚山梨酯 80 或制剂中任何其他成分过敏的患者应谨慎使用替西罗莫司。
建议在每次服用替西罗莫司前预先服用抗组胺药，以预防过敏反应。已知对抗组胺药过敏或需要避免使用抗组胺药的患者应谨慎使用替西罗莫司。
一项剂量递增的 I 期研究评估了替西罗莫司的安全性和药代动力学，该研究纳入了 110 名肝功能正常或不同程度受损的患者。基线胆红素水平高于正常值上限1.5倍的患者接受替西罗莫司治疗时，毒性反应较基线胆红素水平≤1.5倍正常值上限的患者更为严重。基线胆红素水平高于1.5倍正常值上限的患者中，≥3级不良反应和死亡（包括因疾病进展导致的死亡）的总体发生率更高。由于死亡风险增加，胆红素水平高于1.5倍正常值上限的患者禁用替西罗莫司。治疗轻度肝功能损害患者时应谨慎。AST或胆红素水平升高的患者体内替西罗莫司及其代谢物西罗莫司的浓度升高。如果必须对轻度肝功能损害（胆红素 > 1 - 1.5 倍正常值上限或 AST > 正常值上限但胆红素 ≤ 正常值上限）的患者使用替西罗莫司，则应将替西罗莫司的剂量减少至 15 mg/周。
尚未对肾功能减退的患者进行替西罗莫司的临床研究。在健康受试者中，静脉注射 25 mg (14)C 标记的替西罗莫司后，尿液中排出的总放射性不足 5%。肾功能损害预计不会显著影响药物暴露量，因此不建议肾功能损害患者调整替西罗莫司的剂量。
有关替西罗莫司（共29条）的更多药物警告（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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药物背景：替西罗莫司 (CCI-779)是雷帕霉素（西罗莫司）的衍生物，具有更高的水溶性和更佳的药代动力学特性。与雷帕霉素相比，它具有更高的生物利用度和更稳定的体内暴露量，使其适用于临床开发[1,2,4]。
- 机制多样性：除了抑制mTOR介导的细胞增殖和蛋白质合成外，替西罗莫司 (CCI-779)还通过激活自噬发挥治疗作用。这种双重机制有助于其在肿瘤（清除癌细胞中的异常蛋白质/细胞器）和非肿瘤疾病（减少神经退行性疾病/心肌病中的毒性蛋白质积累）中的疗效[5,8]
- 在罕见肿瘤中的潜力：对儿童低分化癌（一种罕见肿瘤）的基因组分析发现了 mTOR 通路激活。 替西罗莫司 (CCI-779) 在体外抑制了患者来源肿瘤细胞的生长（IC₅₀ ~22 nM），提示其具有靶向治疗罕见 mTOR 驱动型肿瘤的潜力 [7]
- 临床前疗效谱：替西罗莫司 (CCI-779) 对多种癌症类型（前列腺癌、急性淋巴细胞白血病、神经外胚层肿瘤、多发性骨髓瘤）显示出抗肿瘤活性，并在非肿瘤疾病（亨廷顿病、层粘蛋白 A/C 相关性心肌病）中显示出治疗益处，支持其广泛的临床前应用潜力 [2,3,4,5,6,8]

C56H87NO16

1030.29

1029.602

C, 65.28; H, 8.51; N, 1.36; O, 24.85

162635-04-3

162635-04-3

6918289

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

1048.4±75.0 °C at 760 mmHg

99-101ºC

587.8±37.1 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.554

2.96

241.96

4

16

11

73

2010

15

O(C([H])([H])[H])[C@@]1([H])[C@@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])[H])[C@]2([H])C([H])([H])C([C@@]([H])(C([H])=C(C([H])([H])[H])[C@]([H])([C@]([H])(C([C@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[C@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])[C@]([H])(C([H])([H])[C@]3([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])[H])[C@@](C(C(N4C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]4([H])C(=O)O2)=O)=O)(O[H])O3)OC([H])([H])[H])=O)OC([H])([H])[H])O[H])C([H])([H])[H])=O)C1([H])[H])OC(C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])O[H])C([H])([H])O[H])=O |c:35,66,70,t:62|

CBPNZQVSJQDFBE-FUXHJELOSA-N

InChI=1S/C56H87NO16/c1-33-17-13-12-14-18-34(2)45(68-9)29-41-22-20-39(7)56(67,73-41)51(63)52(64)57-24-16-15-19-42(57)53(65)71-46(30-43(60)35(3)26-38(6)49(62)50(70-11)48(61)37(5)25-33)36(4)27-40-21-23-44(47(28-40)69-10)72-54(66)55(8,31-58)32-59/h12-14,17-18,26,33,35-37,39-42,44-47,49-50,58-59,62,67H,15-16,19-25,27-32H2,1-11H3/b14-12+,17-13+,34-18+,38-26+/t33-,35-,36-,37-,39-,40+,41+,42+,44-,45+,46+,47-,49-,50+,56-/m1/s1

[(1R,2R,4S)-4-[(2R)-2-[(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28E,30S,32S,35R)-1,18-dihydroxy-19,30-dimethoxy-15,17,21,23,29,35-hexamethyl-2,3,10,14,20-pentaoxo-11,36-dioxa-4-azatricyclo[30.3.1.04,9]hexatriaconta-16,24,26,28-tetraen-12-yl]propyl]-2-methoxycyclohexyl] 3-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-2-methylpropanoate

CCI-779; CCI779; Temsirolimus; Torisel; 162635-04-3; 624KN6GM2T; DTXSID2040945; UNII-624KN6GM2T; WAY-CCI 779; CCI 779; NSC 683864; NSC683864; NSC-683864; Temsirolimus; 624KN6GM2T; DTXSID2040945; UNII-624KN6GM2T; WAY-CCI 779; Brand name: Torisel

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~75 mg/mL (~72.8 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: ~75 mg/mL (~72.8 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (4.85 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 400 μL PEG300 中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (4.85 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清 EtOH 储备液添加到 900 μL 玉米油中并充分混合。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 5 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol:10mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。